RESUMO

Double electron-electron resonance (DEER) can be used to study the structure of a protein in its native cellular environment. Until now, this has required isolation, in vitro labeling, and reintroduction of the protein back into the cells. We describe a completely biosynthetic approach that avoids these steps. It exploits genetically encodable lanthanide-binding tags (LBT) to form self-assembling Gd(III) metal-based spin labels and enables direct in-cell measurements. This approach is demonstrated using a pair of LBTs encoded one at each end of a 3-helix bundle expressed in E. coli grown on Gd(III) -supplemented medium. DEER measurements directly on these cells produced readily detectable time traces from which the distance between the Gd(III) labels could be determined. This work is the first to use biosynthetically produced self-assembling metal-containing spin labels for non-disruptive in-cell structural measurements.

Assuntos

Escherichia coli/citologia , Gadolínio/química , Marcadores de Spin , Espectroscopia de Ressonância de Spin Eletrônica , Escherichia coli/crescimento & desenvolvimento , Tamanho da Partícula

RESUMO

Introdução: A pele está sujeita ao envelhecimento intrínseco e extrínseco. Desse modo, tratar o fotoenvelhecimento cutâneo representa desafio clínico. Objetivo: Avaliar, através de parâmetros objetivos e subjetivos, segurança, tolerabilidade e eficácia clínica de produto cosmético contendo retinaldeído 0,05%, nicotinamina 4% e extrato de Vitis vinifera 1% no tratamento do envelhecimento da pele. Métodos: Estudo monocêntrico, prospectivo, intervencional, aberto que avaliou 40 voluntárias do sexo feminino de 25 a 40 anos, fototipos I a IV de Fitzpatrick, que aplicaram produto dermocosmético durante 60 dias consecutivos. As avaliações foram realizadas de forma subjetiva pelo médico, voluntária e exameultrassonográfico e de forma objetiva por fotografias pelo Visia®, biópsias cutâneas, corneometria, pHmetria e sebumetria. Resultados: 36 voluntárias completaram o estudo. Avaliações subjetivas demonstraram melhora nas rugas, linhas finas, flacidez, viço e aparência geral. Ultrassom e biópsia cutânea evidenciaram aumento de colágeno em 94,4% e 30,6% respectivamente. Fotos do aparelho Visia® demonstraram redução de manchas, rugas, poros e melhora da textura cutânea. Sebumeter revelou diminuição da oleosidade, e houve redução do pH. As medidas do Corneometer mantiveram-se constantes. Conclusões: o produto dermocosmético analisado foi eficaz e seguro para combater o fotoenvelhecimento.