RESUMO

Cryptosporidium and Giardia are protozoan parasites that cause diarrhea in humans and animals. Molecular characterization of these pathogens in sewage may provide insight on their occurrence and prevalence in Brazil. This study aimed to investigate the presence of Giardia and Cryptosporidium in raw and treated sewage from Londrina, Paraná, Brazil. Samples were collected every two weeks during a year. Samples were concentrated, then DNA was extracted and subjected to a nested PCR targeting the Giardia 18S rRNA gene and the Cryptosporidium 18S rRNA gene. Species of Cryptosporidium were characterized by restriction fragment length polymorphism (RFLP). All raw sewage and 76% of the treated sewage were positive for Giardia; 84% of raw sewage samples and 8% of treated sewage were positive for Cryptosporidium. C. muris, C. hominis, C. baileyi, C. parvum and C. suis were detected in 100%, 19%, 9%, 9% and 4% of raw sewage, respectively. C. muris was the only species found in treated sewage. Multiple species of Cryptosporidium were present in 19.04% of the raw sewage. Treated sewage water can pose a threat to human health. The speciation of Cryptosporidium revealed the presence of non-common zoonotic species as C. suis and C. muris.

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Abstract Cryptosporidium and Giardia are protozoan parasites that cause diarrhea in humans and animals. Molecular characterization of these pathogens in sewage may provide insight on their occurrence and prevalence in Brazil. This study aimed to investigate the presence of Giardia and Cryptosporidium in raw and treated sewage from Londrina, Paraná, Brazil. Samples were collected every two weeks during a year. Samples were concentrated, then DNA was extracted and subjected to a nested PCR targeting the Giardia 18S rRNA gene and the Cryptosporidium 18S rRNA gene. Species of Cryptosporidium were characterized by restriction fragment length polymorphism (RFLP). All raw sewage and 76% of the treated sewage were positive for Giardia; 84% of raw sewage samples and 8% of treated sewage were positive for Cryptosporidium. C. muris, C. hominis, C. baileyi, C. parvum and C. suis were detected in 100%, 19%, 9%, 9% and 4% of raw sewage, respectively. C. muris was the only species found in treated sewage. Multiple species of Cryptosporidium were present in 19.04% of the raw sewage. Treated sewage water can pose a threat to human health. The speciation of Cryptosporidium revealed the presence of non-common zoonotic species as C. suis and C. muris.

Resumo Cryptosporidium e Giardia são protozoários causadores de diarreia em animais e humanos. A caracterização molecular destes protozoários em esgoto pode prover dados ainda desconhecidos da ocorrência de espécies. O objetivo do presente estudo foi monitorar a ocorrência de Giardia e espécies de Cryptosporidium em esgoto bruto e tratado em uma estação de tratamento de esgoto (ETE) de Londrina, Paraná. Amostras de esgoto bruto e tratado foram coletadas no período de um ano, com periodicidade quinzenal. A ocorrência destes protozoários foi caracterizada por meio de concentração das amostras e posterior extração de DNA seguida de nested-PCR para amplificação de fragmentos dos genes 18S rRNA de Giardia e 18S rRNA de Cryptosporidium. A caracterização das espécies de Cryptosporidium foi realizada por meio de análise por polimorfismo de comprimento do fragmento de restrição (RFLP) dos produtos obtidos. Foram coletadas no total 25 amostras de cada, esgoto bruto e esgoto tratado. Para Giardia, todas as amostras de esgoto bruto e 76% das de esgoto tratado foram positivas. Cryptosporidium esteve presente em 84% das amostras de esgoto bruto e em 8% do tratado. No esgoto tratado foi encontrado apenas C. muris, já nas amostras de esgoto bruto foram encontradas cinco espécies: C. muris, C. hominis, C. baileyi, C. suis e C. parvum em 100%, 19%, 9%, 9% e 4%, respectivamente. A presença de espécies mistas foi observada em 19,04% das amostras. A presença de Giardia e Cryptosporidium em esgoto tratado pode pôr em risco a saúde humana. A discriminação de espécies de Cryptosporidium revelou a presença de espécies zoonóticas incomuns como C. suis e C. muris.

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Cryptosporidium and Giardia are protozoan parasites that cause diarrhea in humans and animals. Molecular characterization of these pathogens in sewage may provide insight on their occurrence and prevalence in Brazil. This study aimed to investigate the presence of Giardia and Cryptosporidium in raw and treated sewage from Londrina, Paraná, Brazil. Samples were collected every two weeks during a year. Samples were concentrated, then DNA was extracted and subjected to a nested PCR targeting the Giardia 18S rRNA gene and the Cryptosporidium 18S rRNA gene. Species of Cryptosporidium were characterized by restriction fragment length polymorphism (RFLP). All raw sewage and 76% of the treated sewage were positive for Giardia; 84% of raw sewage samples and 8% of treated sewage were positive for Cryptosporidium. C. muris, C. hominis, C. baileyi, C. parvum and C. suis were detected in 100%, 19%, 9%, 9% and 4% of raw sewage, respectively. C. muris was the only species found in treated sewage. Multiple species of Cryptosporidium were present in 19.04% of the raw sewage. Treated sewage water can pose a threat to human health. The speciation of Cryptosporidium revealed the presence of non-common zoonotic species as C. suis and C. muris.(AU)

Cryptosporidium e Giardia são protozoários causadores de diarreia em animais e humanos. A caracterização molecular destes protozoários em esgoto pode prover dados ainda desconhecidos da ocorrência de espécies. O objetivo do presente estudo foi monitorar a ocorrência de Giardia e espécies de Cryptosporidium em esgoto bruto e tratado em uma estação de tratamento de esgoto (ETE) de Londrina, Paraná. Amostras de esgoto bruto e tratado foram coletadas no período de um ano, com periodicidade quinzenal. A ocorrência destes protozoários foi caracterizada por meio de concentração das amostras e posterior extração de DNA seguida de nested-PCR para amplificação de fragmentos dos genes 18S rRNA de Giardia e 18S rRNA de Cryptosporidium. A caracterização das espécies de Cryptosporidium foi realizada por meio de análise por polimorfismo de comprimento do fragmento de restrição (RFLP) dos produtos obtidos. Foram coletadas no total 25 amostras de cada, esgoto bruto e esgoto tratado. Para Giardia, todas as amostras de esgoto bruto e 76% das de esgoto tratado foram positivas. Cryptosporidium esteve presente em 84% das amostras de esgoto bruto e em 8% do tratado. No esgoto tratado foi encontrado apenas C. muris, já nas amostras de esgoto bruto foram encontradas cinco espécies: C. muris, C. hominis, C. baileyi, C. suis e C. parvum em 100%, 19%, 9%, 9% e 4%, respectivamente. A presença de espécies mistas foi observada em 19,04% das amostras. A presença de Giardia e Cryptosporidium em esgoto tratado pode pôr em risco a saúde humana. A discriminação de espécies de Cryptosporidium revelou a presença de espécies zoonóticas incomuns como C. suis e C. muris.(AU)

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Water is an important vehicle for pathogens such as Cryptosporidium spp. and Giardia duodenalis. In fact, these organisms are responsible for almost 58% and 38% of the waterborne outbreaks reported in ~60 years. Characteristics related to the environmental phase of these protozoa and the different types of hosts are important factors related to environmental contamination. In cryptosporidiosis and giardiasis, outbreaks caused by waterborne pathogens are identified as major risk factors for contamination of water resources by untreated sewage and the entrainment of cattle feces in rainwater. Further, this review covers taxonomic, biologic, and epidemiologic aspects such as prevalence, risk factors, and molecular characterization of these protozoa observed in humans and cattle in order to elucidate the role of these hosts in environmental pollution, and consequently, as a source of infection for susceptible humans, especially in rural areas. Alternative water resources such as wells and springs are used without water treatment and potability monitoring. Epidemiological data are useful, but insufficient to characterize the source of infection, thereby requiring the use of appropriate molecular methods for subtyping the protozoa detected in environmental and feces samples as well as for assessing public health risk.(AU)

A água é um importante veículo de transmissão de patógenos, entre eles Cryptosporidium spp e Giardia duodenalis, respectivamente responsáveis por 58% e 38% dos surtos de veiculação hídrica registrados em cerca de 60 anos. Características relacionadas às fases ambientais destes protozoários e a grande quantidade de hospedeiros são importantes fatores relacionados à contaminação ambiental. Em surtos de criptosporidiose e giardíase por veiculação hídrica são apontados como principais fatores de risco a contaminação dos mananciais, utilizados para a dessedentação humana, por esgoto não tratado e o desague de fezes de animais devido ao carreamento por água da chuva. Além destes fatores, esta revisão aborda aspectos taxonômicos, biológicos e epidemiológicos, como prevalência, fatores de risco e caracterização molecular destes protozoários em humanos e bovinos como forma de elucidar a importância destes hospedeiros na contaminação ambiental e, consequentemente, como fonte de infecção para humanos suscetíveis, especialmente em áreas rurais. Nestas áreas são frequentemente utilizadas fontes alternativas de abastecimento de água, como poços e nascentes, sem tratamento e monitoramento de potabilidade. Dados epidemiológico auxiliam, porém não são suficientes para caracterizar fontes de infecção, sendo necessário o uso de adequadas ferramentas de caracterização molecular para subtipagem de de protozoários identificados em fezes e amostras ambientais e avaliação do risco de saúde pública.(AU)

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The aims of this study were to verify the prevalence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in animal feces and drinking water on dairy farms and to identify a possible relation between the exposure factors and the presence of these parasites. Fecal samples from cattle and humans and water samples were collected on dairy farms in Paraná, Brazil. Analysis of (oo)cysts in the feces was performed by the modified Ziehl-Neelsen staining and centrifugal flotation in zinc sulfate. Test-positive samples were subjected to nested PCR amplification of the 18SSU ribosomal RNA gene for identification of Cryptosporidium and Giardia and of the gp60 gene for subtyping of Cryptosporidium. Microbiological analysis of water was carried out by the multiple-tube method and by means of a chromogenic substrate, and parasitological analysis was performed on 31 samples by direct immunofluorescence and nested PCR of the genes mentioned above. Identification of the species of Cryptosporidium was performed by sequencing and PCR with analysis of restriction fragment length polymorphisms. The prevalence of Giardia and Cryptosporidium was higher in calves than in adults. Among the samples of cattle feces, Cryptosporidium parvum was identified in 41 (64%), C. ryanae in eight (12.5%), C. bovis in four (6.3%), C. andersoni in five (7.8%), and a mixed infection in 20 samples (31.3%). These parasites were not identified in the samples of human feces. Thermotolerant coliform bacteria were identified in 25 samples of water (45.5%). Giardia duodenalis and C. parvum were identified in three water samples. The gp60 gene analysis of C. parvum isolates revealed the presence of two strains (IIaA20G1R1 and IIaA17G2R2) in the fecal samples and one (IIaA17G2R1) in the water samples. The presence of coliforms was associated with the water source, structure and degradation of springs, rain, and turbidity. The prevalence of protozoa was higher in calves up to six months of age. C. parvum and G. duodenalis were identified in the water of dairy farms, as were thermotolerant coliforms; these findings point to the need for guidance on handling of animals, preservation of water sources, and water treatment.

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Water is an important vehicle for pathogens such as Cryptosporidium spp. and Giardia duodenalis. In fact, these organisms are responsible for almost 58% and 38% of the waterborne outbreaks reported in ~60 years. Characteristics related to the environmental phase of these protozoa and the different types of hosts are important factors related to environmental contamination. In cryptosporidiosis and giardiasis, outbreaks caused by waterborne pathogens are identified as major risk factors for contamination of water resources by untreated sewage and the entrainment of cattle feces in rainwater. Further, this review covers taxonomic, biologic, and epidemiologic aspects such as prevalence, risk factors, and molecular characterization of these protozoa observed in humans and cattle in order to elucidate the role of these hosts in environmental pollution, and consequently, as a source of infection for susceptible humans, especially in rural areas. Alternative water resources such as wells and springs are used without water treatment and potability monitoring. Epidemiological data are useful, but insufficient to characterize the source of infection, thereby requiring the use of appropriate molecular methods for subtyping the protozoa detected in environmental and feces samples as well as for assessing public health risk.

A água é um importante veículo de transmissão de patógenos, entre eles Cryptosporidium spp e Giardia duodenalis, respectivamente responsáveis por 58% e 38% dos surtos de veiculação hídrica registrados em cerca de 60 anos. Características relacionadas às fases ambientais destes protozoários e a grande quantidade de hospedeiros são importantes fatores relacionados à contaminação ambiental. Em surtos de criptosporidiose e giardíase por veiculação hídrica são apontados como principais fatores de risco a contaminação dos mananciais, utilizados para a dessedentação humana, por esgoto não tratado e o desague de fezes de animais devido ao carreamento por água da chuva. Além destes fatores, esta revisão aborda aspectos taxonômicos, biológicos e epidemiológicos, como prevalência, fatores de risco e caracterização molecular destes protozoários em humanos e bovinos como forma de elucidar a importância destes hospedeiros na contaminação ambiental e, consequentemente, como fonte de infecção para humanos suscetíveis, especialmente em áreas rurais. Nestas áreas são frequentemente utilizadas fontes alternativas de abastecimento de água, como poços e nascentes, sem tratamento e monitoramento de potabilidade. Dados epidemiológico auxiliam, porém não são suficientes para caracterizar fontes de infecção, sendo necessário o uso de adequadas ferra

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Water is an important vehicle for pathogens such as Cryptosporidium spp. and Giardia duodenalis. In fact, these organisms are responsible for almost 58% and 38% of the waterborne outbreaks reported in ~60 years. Characteristics related to the environmental phase of these protozoa and the different types of hosts are important factors related to environmental contamination. In cryptosporidiosis and giardiasis, outbreaks caused by waterborne pathogens are identified as major risk factors for contamination of water resources by untreated sewage and the entrainment of cattle feces in rainwater. Further, this review covers taxonomic, biologic, and epidemiologic aspects such as prevalence, risk factors, and molecular characterization of these protozoa observed in humans and cattle in order to elucidate the role of these hosts in environmental pollution, and consequently, as a source of infection for susceptible humans, especially in rural areas. Alternative water resources such as wells and springs are used without water treatment and potability monitoring. Epidemiological data are useful, but insufficient to characterize the source of infection, thereby requiring the use of appropriate molecular methods for subtyping the protozoa detected in environmental and feces samples as well as for assessing public health risk.

A água é um importante veículo de transmissão de patógenos, entre eles Cryptosporidium spp e Giardia duodenalis, respectivamente responsáveis por 58% e 38% dos surtos de veiculação hídrica registrados em cerca de 60 anos. Características relacionadas às fases ambientais destes protozoários e a grande quantidade de hospedeiros são importantes fatores relacionados à contaminação ambiental. Em surtos de criptosporidiose e giardíase por veiculação hídrica são apontados como principais fatores de risco a contaminação dos mananciais, utilizados para a dessedentação humana, por esgoto não tratado e o desague de fezes de animais devido ao carreamento por água da chuva. Além destes fatores, esta revisão aborda aspectos taxonômicos, biológicos e epidemiológicos, como prevalência, fatores de risco e caracterização molecular destes protozoários em humanos e bovinos como forma de elucidar a importância destes hospedeiros na contaminação ambiental e, consequentemente, como fonte de infecção para humanos suscetíveis, especialmente em áreas rurais. Nestas áreas são frequentemente utilizadas fontes alternativas de abastecimento de água, como poços e nascentes, sem tratamento e monitoramento de potabilidade. Dados epidemiológico auxiliam, porém não são suficientes para caracterizar fontes de infecção, sendo necessário o uso de adequadas ferra

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Water is an important vehicle for pathogens such as Cryptosporidium spp. and Giardia duodenalis. In fact, these organisms are responsible for almost 58% and 38% of the waterborne outbreaks reported in ~60 years. Characteristics related to the environmental phase of these protozoa and the different types of hosts are important factors related to environmental contamination. In cryptosporidiosis and giardiasis, outbreaks caused by waterborne pathogens are identified as major risk factors for contamination of water resources by untreated sewage and the entrainment of cattle feces in rainwater. Further, this review covers taxonomic, biologic, and epidemiologic aspects such as prevalence, risk factors, and molecular characterization of these protozoa observed in humans and cattle in order to elucidate the role of these hosts in environmental pollution, and consequently, as a source of infection for susceptible humans, especially in rural areas. Alternative water resources such as wells and springs are used without water treatment and potability monitoring. Epidemiological data are useful, but insufficient to characterize the source of infection, thereby requiring the use of appropriate molecular methods for subtyping the protozoa detected in environmental and feces samples as well as for assessing public health risk.

A água é um importante veículo de transmissão de patógenos, entre eles Cryptosporidium spp e Giardia duodenalis, respectivamente responsáveis por 58% e 38% dos surtos de veiculação hídrica registrados em cerca de 60 anos. Características relacionadas às fases ambientais destes protozoários e a grande quantidade de hospedeiros são importantes fatores relacionados à contaminação ambiental. Em surtos de criptosporidiose e giardíase por veiculação hídrica são apontados como principais fatores de risco a contaminação dos mananciais, utilizados para a dessedentação humana, por esgoto não tratado e o desague de fezes de animais devido ao carreamento por água da chuva. Além destes fatores, esta revisão aborda aspectos taxonômicos, biológicos e epidemiológicos, como prevalência, fatores de risco e caracterização molecular destes protozoários em humanos e bovinos como forma de elucidar a importância destes hospedeiros na contaminação ambiental e, consequentemente, como fonte de infecção para humanos suscetíveis, especialmente em áreas rurais. Nestas áreas são frequentemente utilizadas fontes alternativas de abastecimento de água, como poços e nascentes, sem tratamento e monitoramento de potabilidade. Dados epidemiológico auxiliam, porém não são suficientes para caracterizar fontes de infecção, sendo necessário o uso de adequadas ferramentas de caracterização molecular para subtipagem de de protozoários identificados em fezes e amostras ambientais e avaliação do risco de saúde pública.

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The aims of the present study were to serosurvey dogs, horses, and humans highly exposed to tick bites for anti-Borrelia burgdorferi s.l. antibodies, identify tick species present, and determine risk factors associated with seropositivity in a rural settlement of Paraná State, southern Brazil. Eighty-seven residents were sampled, along with their 83 dogs and 18 horses, and individual questionnaires were administered. Immunofluorescence antibody test (IFAT) was performed on serum samples and positive samples were subjected to western blot (WB) analysis. Anti-B. burgdorferi antibodies were found in 4/87 (4.6%) humans, 26/83 (31.3%) dogs, and 7/18 (38.9%) horses by IFAT, with 4/4 humans also positive by WB. Ticks identified were mostly from dogs and included 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale, and 1/67 A. cajennense sensu lato. All (34/34) horse ticks were identified as A. cajennense s.l.. No significant association was found when age, gender, or presence of ticks was correlated to seropositivity to Borrelia sp. In conclusion, although anti-Borrelia antibodies have been found in dogs, horses and their owners from the rural settlement, the lack of isolation, molecular characterization, absence of competent vectors and the low specificity of the commercial WB kit used herein may have impaired risk factor analysis.

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Abstract The aims of the present study were to serosurvey dogs, horses, and humans highly exposed to tick bites for anti-Borrelia burgdorferi s.l. antibodies, identify tick species present, and determine risk factors associated with seropositivity in a rural settlement of Paraná State, southern Brazil. Eighty-seven residents were sampled, along with their 83 dogs and 18 horses, and individual questionnaires were administered. Immunofluorescence antibody test (IFAT) was performed on serum samples and positive samples were subjected to western blot (WB) analysis. Anti-B. burgdorferi antibodies were found in 4/87 (4.6%) humans, 26/83 (31.3%) dogs, and 7/18 (38.9%) horses by IFAT, with 4/4 humans also positive by WB. Ticks identified were mostly from dogs and included 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale, and 1/67 A. cajennense sensu lato. All (34/34) horse ticks were identified as A. cajennense s.l.. No significant association was found when age, gender, or presence of ticks was correlated to seropositivity to Borrelia sp. In conclusion, although anti-Borrelia antibodies have been found in dogs, horses and their owners from the rural settlement, the lack of isolation, molecular characterization, absence of competent vectors and the low specificity of the commercial WB kit used herein may have impaired risk factor analysis.

Resumo Os objetivos do presente estudo foram realizar um levantamento sorológico de cães, cavalos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos para anticorpos anti-B. burgdorferi s.l., identificar as espécies de carrapatos presentes, e determinar os fatores de risco associados a soropositividade em um assentamento rural do Estado do Paraná, sul do Brasil. Oitenta e sete residentes foram amostrados junto com seus respectivos 83 cães e 118 cavalos e questionários individuais foram aplicados. O teste de imunofluorescência indireta (IFI) foi realizado nas amostras sorológicas e as positivas foram submetidas a análise por western blot (WB). Anticorpos anti-B. burgdorferi foram detectados em 4/87 (4,6%) humanos, 26/83 (31,3%) cães e 7/18 (38,9%) cavalos pela IFI, com 4/4 humanos também positivos pelo WB. Os carrapatos identificados foram em sua maioria de cães e incluíram 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale e 1/67 A. cajennense sensu lato. Todos (34/34) carrapatos dos cavalos foram identificados como A. cajennense s.l.. Não foram observadas diferenças estatísticas entre idade, sexo ou presença de carrapatos e soropositividade para Borrelia sp. Em conclusão, embora anticorpos anti-Borrelia tenham sido encontrados em cães, equinos e seus proprietários do assentamento rural, a ausência de isolamento, caracterização molecular, ausência de vetores competentes e baixa especificidade do kit comercial de WB utilizado podem ter limitado a análise de fatores de risco.

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Abstract The aims of the present study were to serosurvey dogs, horses, and humans highly exposed to tick bites for anti-Borrelia burgdorferi s.l. antibodies, identify tick species present, and determine risk factors associated with seropositivity in a rural settlement of Paraná State, southern Brazil. Eighty-seven residents were sampled, along with their 83 dogs and 18 horses, and individual questionnaires were administered. Immunofluorescence antibody test (IFAT) was performed on serum samples and positive samples were subjected to western blot (WB) analysis. Anti-B. burgdorferi antibodies were found in 4/87 (4.6%) humans, 26/83 (31.3%) dogs, and 7/18 (38.9%) horses by IFAT, with 4/4 humans also positive by WB. Ticks identified were mostly from dogs and included 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale, and 1/67 A. cajennense sensu lato. All (34/34) horse ticks were identified as A. cajennense s.l.. No significant association was found when age, gender, or presence of ticks was correlated to seropositivity to Borrelia sp. In conclusion, although anti-Borrelia antibodies have been found in dogs, horses and their owners from the rural settlement, the lack of isolation, molecular characterization, absence of competent vectors and the low specificity of the commercial WB kit used herein may have impaired risk factor analysis.(AU)

Resumo Os objetivos do presente estudo foram realizar um levantamento sorológico de cães, cavalos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos para anticorpos anti-B. burgdorferi s.l., identificar as espécies de carrapatos presentes, e determinar os fatores de risco associados a soropositividade em um assentamento rural do Estado do Paraná, sul do Brasil. Oitenta e sete residentes foram amostrados junto com seus respectivos 83 cães e 118 cavalos e questionários individuais foram aplicados. O teste de imunofluorescência indireta (IFI) foi realizado nas amostras sorológicas e as positivas foram submetidas a análise por western blot (WB). Anticorpos anti-B. burgdorferi foram detectados em 4/87 (4,6%) humanos, 26/83 (31,3%) cães e 7/18 (38,9%) cavalos pela IFI, com 4/4 humanos também positivos pelo WB. Os carrapatos identificados foram em sua maioria de cães e incluíram 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale e 1/67 A. cajennense sensu lato. Todos (34/34) carrapatos dos cavalos foram identificados como A. cajennense s.l.. Não foram observadas diferenças estatísticas entre idade, sexo ou presença de carrapatos e soropositividade para Borrelia sp. Em conclusão, embora anticorpos anti-Borrelia tenham sido encontrados em cães, equinos e seus proprietários do assentamento rural, a ausência de isolamento, caracterização molecular, ausência de vetores competentes e baixa especificidade do kit comercial de WB utilizado podem ter limitado a análise de fatores de risco.(AU)

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The leishmaniasis are a group of globally widespread parasitic diseases caused by a protozoa of the genus Leishmania, the state of Paraná accounts for 98% of leishmaniasis human cases in southern Brazil and the dogs might serve as a sentinel of the risk of infection to humans in a given area. The aim of this work was to study the epidemiology of leishmaniasis in dogs residents in two different environments, they are: recycling of solid waste centers (Group 1) and a neighborhood adjacent to a forest (Group 2), both in Londrina, Paraná State, Brazil and to determine epidemiological variables associated to infection in these different realities. Serum samples, randomly collected, from 61 dogs from Group 1 and from 74 dogs from Group 2 were submitted to Indirect Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) to research for anti-Leishmania IgG antibodies. Of the 135 dogs analyzed, 13 animals (9.6%) were positive; nine (14.7%) in Group 1 and four (5.4%) in Group 2, the difference between the groups is not statistically significant. These results suggest the presence of the protozoan Leishmania spp. in both environments studied which indicate potential for infection in the human population.

As leishmanioses são um grupo de doenças parasitárias disseminadas por todo o mundo, causadas por protozoários do gênero Leishmania, o estado do Paraná é responsável por 98% dos casos de leishmaniose em humanos do Sul do Brasil e os cães podem servir como sentinelas para o risco de infecção em humanos em uma dada área. O objetivo desse trabalho foi estudar a epidemiologia da leishmaniose em cães residentes em dois diferentes ambientes, são eles: centros de reciclagem de resíduos sólidos (Grupo 1) e um bairro adjacente a uma floresta (Grupo 2) em Londrina/PR, Brasil e determiner variáveis epidemiológicas asociadas à infecção nessas diferentes realidades. Amostras de soro, randomicamente coletadas, de 61 cães do Grupo 1 e de 74 cães do Grupo 2 foram submetidos à Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para pesquisa de anticorpos IgG anti-Leishmania. Dos 135 cães analisados, 13 (9,6%) foram positivos; 9 (14,7%) no Grupo 1 e 4 (5,4%) no Grupo 2, a diferença entre os grupos não foi estatisticamente significante. Esses resultados sugerem a presença do protozoário Leishmania spp. nos dois ambientes estudados o que indica potencial de infecção na população humana.

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The leishmaniasis are a group of globally widespread parasitic diseases caused by a protozoa of the genus Leishmania, the state of Paraná accounts for 98% of leishmaniasis human cases in southern Brazil and the dogs might serve as a sentinel of the risk of infection to humans in a given area. The aim of this work was to study the epidemiology of leishmaniasis in dogs residents in two different environments, they are: recycling of solid waste centers (Group 1) and a neighborhood adjacent to a forest (Group 2), both in Londrina, Paraná State, Brazil and to determine epidemiological variables associated to infection in these different realities. Serum samples, randomly collected, from 61 dogs from Group 1 and from 74 dogs from Group 2 were submitted to Indirect Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) to research for anti-Leishmania IgG antibodies. Of the 135 dogs analyzed, 13 animals (9.6%) were positive; nine (14.7%) in Group 1 and four (5.4%) in Group 2, the difference between the groups is not statistically significant. These results suggest the presence of the protozoan Leishmania spp. in both environments studied which indicate potential for infection in the human population.(AU)

As leishmanioses são um grupo de doenças parasitárias disseminadas por todo o mundo, causadas por protozoários do gênero Leishmania, o estado do Paraná é responsável por 98% dos casos de leishmaniose em humanos do Sul do Brasil e os cães podem servir como sentinelas para o risco de infecção em humanos em uma dada área. O objetivo desse trabalho foi estudar a epidemiologia da leishmaniose em cães residentes em dois diferentes ambientes, são eles: centros de reciclagem de resíduos sólidos (Grupo 1) e um bairro adjacente a uma floresta (Grupo 2) em Londrina/PR, Brasil e determiner variáveis epidemiológicas asociadas à infecção nessas diferentes realidades. Amostras de soro, randomicamente coletadas, de 61 cães do Grupo 1 e de 74 cães do Grupo 2 foram submetidos à Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para pesquisa de anticorpos IgG anti-Leishmania. Dos 135 cães analisados, 13 (9,6%) foram positivos; 9 (14,7%) no Grupo 1 e 4 (5,4%) no Grupo 2, a diferença entre os grupos não foi estatisticamente significante. Esses resultados sugerem a presença do protozoário Leishmania spp. nos dois ambientes estudados o que indica potencial de infecção na população humana.(AU)

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The role of rodents in the epidemiology of toxoplasmosis was investigated in Londrina, Paraná State, Brazil. One hundred and eighty-one Rattus rattus and one Mus musculus were caught in 37 places. Blood and tissues were collected and submitted to the indirect fluorescence antibody test (IFAT) and the bioassay. Serum samples from 61 contacting dogs were also collected. Sixteen rats (8.8%) were positive for Toxoplasma gondii, but just two of them were positive by serology and bioassay test. Antibodies were found in nine (4.9%) rats. Tissues of nine rats bioassayed were positive and four isolates were obtained. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis was performed using 12 markers (SAG1, SAG2, SAG2-alt, C22-8, C29-2, L358, PK1, BTUB, GRA6, SAG3, Apico, CS3). Genotyping revealed that the four strains isolated from this study have been isolated before in cats and chickens from Brazil. None of the isolates was identified like clonal archetypal T-types I, II, and III. The rats presented lower serologic Toxoplasma gondii prevalence (8.8%) compared to contacting dogs (70.5%).

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Considering the zoonotic potential of tick-borne disease (TBD) agents and the fact that dogs may act as sentinels for human infection, the aim of the present study was to determine the seroprevalence of TBD agents and risk factors for exposure in two different canine populations from Parana State, Southern Brazil. A total of 138 dog serum samples from urban (UA) (n=68) and rural (RA) (n=70) areas were tested with commercial ELISA rapid test for Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia canis and Borrelia burgdorferi antibodies and indirect immunofluorescence assay (IFAT) for Babesia vogeli. An overall of 92∕138 (66.7%) dogs, being 62∕68 (91.2%) from UA and 30∕70 (42.9%) from RA, were seropositive for at least one TBD agent. From the total number of dogs, sixty-two were positive for E. canis (44.9%), 19 (13.8%) for A. phagocytophilum, and 64 (46.4%) for B. vogeli. Anti-B. burgdorferi antibodies were not detected. Dogs from UA showed a higher percentage of tick infestation (p = 0.0135) and were highly associated with seropositivity to E. canis (p = 0.000005), A. phagocytophilum (p = 0.0001), and B. vogeli (p = 0.0012). In summary, the findings indicate that dogs from urban areas present higher potential risk exposure to TBD pathogens than those from rural areas.

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Considering the zoonotic potential of tick-borne disease (TBD) agents and the fact that dogs may act as sentinels for human infection, the aim of the present study was to determine the seroprevalence of TBD agents and risk factors for exposure in two different canine populations from Parana State, Southern Brazil. A total of 138 dog serum samples from urban (UA) (n=68) and rural (RA) (n=70) areas were tested with commercial ELISA rapid test forAnaplasma phagocytophilum, Ehrlichia canisand Borrelia burgdorferi antibodies and indirect immunofluorescence assay (IFAT) for Babesia vogeli. An overall of 92∕138 (66.7%) dogs, being 62∕68 (91.2%) from UA and 30∕70 (42.9%) from RA, were seropositive for at least one TBD agent. From the total number of dogs, sixty-two were positive for E. canis (44.9%), 19 (13.8%) for A. phagocytophilum, and 64 (46.4%) for B. vogeli. Anti-B. burgdorferi antibodies were not detected. Dogs from UA showed a higher percentage of tick infestation (p = 0.0135) and were highly associated with seropositivity to E. canis (p = 0.000005), A. phagocytophilum (p = 0.0001), and B. vogeli (p = 0.0012). In summary, the findings indicate that dogs from urban areas present higher potential risk exposure to TBD pathogens than those from rural areas.

Considerando o potencial zoonótico das doenças transmitidas por carrapatos (DTCs) e que os cães podem atuar como sentinelas para infecções em humanos, os objetivos deste estudo foram determinar a soroprevalência de agentes das DTCs e fatores de risco para a exposição em duas diferentes populações caninas do Estado do Paraná, região Sul do Brasil. Um total de 138 amostras de soro de cães de área urbana (AU) (n = 68) e rural (AR) (n = 70) foram testadas utilizando um teste de ELISA comercial rápido para detecção de anticorpos contra Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia canis e Borrelia burgdorferi e imunofluorescência indireta (IFI) para Babesia vogeli. Um total de 92∕138 (66,7%) cães, sendo 62∕68 (91,2%) da AU e 30∕70 (42,9%) da AR, foram soropositivos para pelo menos um agente. Do número total de amostras, sessenta e duas (44,9%) foram positivas para E. canis, 19 (13,8%) para A. phagocytophilum e 64 (46,4%) para B. canis vogeli. Anticorpos anti-B. burgdorferi não foram detectados. Os cães da AU apresentaram o maior percentual de infestação por carrapatos (p = 0,0135) e foram altamente associados com a positividade para E. canis (p = 0,000005), A. phagocytophilum (p = 0,0001) e B. vogeli (p = 0,0012). Em resumo, nossos achados indicam que cães de áreas urbanas têm um maior risco potencial de exposição a agentes patogênicos das DTCs comparados aos das áreas rurais.

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Brazilian Spotted Fever is a disease caused by Rickettsia rickettsii, and is transmitted to humans and animals by Amblyomma spp. The objective of this work was to study the epidemiology of spotted fever group rickettsiae in rural areas of Northern Parana. In Alvorada do Sul municipality, 88 humans, 83 dogs, and 18 horses were sampled, and in Arapongas municipality, 138 humans, 90 dogs and 18 horses were studied. All the sera were tested by IFA in which R. rickettsii and R. parkeri were used as antigens, considering titers ≥ 64 positive. Ticks collected from dogs and horses were tested by PCR. In Alvorada do Sul, 24% and 16.1% of humans, 55.6% and 22.2% of horses and, 22.9% and 18.1% of dogs were seropositive for R rickettsii and R. parkeri, respectively. In Arapongas, 9.4% and 4.3% of the humans, 5.6% and 5.6% of horses and, 13.3% and 12.2% of the dogs were seropositive for R. rickettsii and R. parkeri, respectively. PCR detected seven ticks with gltA sequences that showed similarity with R. bellii. The presence of antibodies to R. parkeri and R. rickettsii in dogs, horses and humans demonstrates a potential risk for spotted fever group rickettsiae in these areas.

Febre Maculosa Brasileira é uma doença causada por Rickettsia rickettsii, e é transmitida para humanos e animais por Amblyomma spp. O objetivo deste trabalho foi estudar a epidemiologia de riquétsias do grupo da febre em áreas rurais do Norte do Paraná. No município de Alvorada do Sul, 88 pessoas, 83 cães e 18 cavalos foram amostrados, e no município de Arapongas, 138 seres humanos, 90 cães e 18 cavalos foram estudados. Todos os soros foram testados por IFI com R. rickettsii e R. parkeri como antígenos, considerando-se os títulos ≥ 64 positivos. Carrapatos coletados de cães e cavalos foram testados por PCR. Em Alvorada do Sul, 24% e 16,1% dos seres humanos, 55,6% e 22,2% de cavalos e, 22,9% e 18,1% de cães foram soropositivos para R. rickettsii e R. parkeri, respectivamente. Em Arapongas, 9,4% e 4,3% dos seres humanos, 5,6% e 5,6% de cavalos e, 13,3% e 12,2% dos cães foram soropositivos para R. rickettsi e R. parkeri, respectivamente. A PCR detectou 7 carrapatos com seqüências gltA que mostrou semelhança com R. bellii. A presença de anticorpos para R. rickettsii e R. parkeri em cães, cavalos e seres humanos demonstra um risco potencial para riquétsias do grupo da febre maculosa nestas áreas.

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Brazilian spotted fever (BSF) is an emerging disease most likely caused by Rickettsia rickettsii. The objective of the present study was to estimate the seroprevalence of BSF rickettsia infections in equines from six horse farms located in Londrina County, Paraná, Southern Brazil. Six owners of horse farms situated in Cambé, Santa Fé, Guaraci and Londrina municipalities participated in the study. All farms were located in areas where BSF has not been reported. A total of 273 horses were sampled and their sera were tested by indirect immunofluorescence assay (IFA) using R. rickettsii and R. parkeri antigens. Titers equal to and greater than 64 were considered positive. Of 273 sera tested, 15 (5.5%) reacted to R. rickettsii and 5 (1.8%) to R. parkeri. Five out of the six farms studied revealed seropositive animals and seropositivity rate ranged from 0 to 13%. The titers ranged from 64 to 512, and four samples had a titer of 512. Nine animals reacted to R. rickettsii with titers four-fold higher than those for R. parkeri. These results suggest that horses in Northern Paraná may have been exposed to rickettsiae identical or closely related to R. rickettsii.

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Brazilian spotted fever (BSF) is an emerging disease most likely caused by Rickettsia rickettsii. The objective of the present study was to estimate the seroprevalence of BSF rickettsia infections in equines from six horse farms located in Londrina County, Paraná, Southern Brazil. Six owners of horse farms situated in Cambé, Santa Fé, Guaraci and Londrina municipalities participated in the study. All farms were located in areas where BSF has not been reported. A total of 273 horses were sampled and their sera were tested by indirect Immunofluorescence assay (IFA) using R. rickettsii and R. parkeri antigens. Titers equal to and greater than 64 were considered positive. Of 273 sera tested, 15 (5.5 percent) reacted to R. rickettsii and 5 (1.8 percent) to R. parkeri. Five out of the six farms studied revealed seropositive animals and seropositivity rate ranged from 0 to 13 percent. The titers ranged from 64 to 512, and four samples had a titer of 512. Nine animals reacted to R. rickettsii with titers four-fold higher than those for R. parkeri. These results suggest that horses in Northern Paraná may have been exposed to rickettsiae identical or closely related to R. rickettsii.

Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença emergente, sendo Rickettsia rickettsii o seu principal agente etiológico. O objetivo deste estudo foi determinar a soroprevalência de rickettsia do grupo da febre maculosa em equinos de seis haras localizados nos municípios de Cambé, Santa Fé, Guaraci e Londrina. As propriedades eram localizadas na região Norte do Paraná onde casos de FMB ainda não foram diagnosticados. Foram colhidas amostras de sangue de 273 equinos, e os soros foram testados pela RIFI, usando R. rickettsii e R. parkeri como antígenos, considerando-se como positivos títulos >64. Entre 273 soros, 15 (5,5 por cento) reagiram contra R. rickettsii e 5 (1,8 por cento) para R. parkeri. Cinco de seis haras estudados tinham animais reativos, e a taxa de sororreatividade variou de 0 a 13 por cento. Os títulos variaram de 64 para 512, e três amostras apresentaram título de 512. Nove animais reagiram para R. rickettsii com títulos quatro vezes maiores que para R. parkeri. Esses resultados sugerem que equinos no Norte do Estado do Paraná, Brasil, podem ter sido expostos a uma rickettsia idêntica ou muito próxima a R. rickettsii.

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Brazilian spotted fever (BSF) is an emerging disease most likely caused by Rickettsia rickettsii. The objective of the present study was to estimate the seroprevalence of BSF rickettsia infections in equines from six horse farms located in Londrina County, Paraná, Southern Brazil. Six owners of horse farms situated in Cambé, Santa Fé, Guaraci and Londrina municipalities participated in the study. All farms were located in areas where BSF has not been reported. A total of 273 horses were sampled and their sera were tested by indirect Immunofluorescence assay (IFA) using R. rickettsii and R. parkeri antigens. Titers equal to and greater than 64 were considered positive. Of 273 sera tested, 15 (5.5%) reacted to R. rickettsii and 5 (1.8%) to R. parkeri. Five out of the six farms studied revealed seropositive animals and seropositivity rate ranged from 0 to 13%. The titers ranged from 64 to 512, and four samples had a titer of 512. Nine animals reacted to R. rickettsii with titers four-fold higher than those for R. parkeri. These results suggest that horses in Northern Paraná may have been exposed to rickettsiae identical or closely related to R. rickettsii.(AU)

Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença emergente, sendo Rickettsia rickettsii o seu principal agente etiológico. O objetivo deste estudo foi determinar a soroprevalência de rickettsia do grupo da febre maculosa em equinos de seis haras localizados nos municípios de Cambé, Santa Fé, Guaraci e Londrina. As propriedades eram localizadas na região Norte do Paraná onde casos de FMB ainda não foram diagnosticados. Foram colhidas amostras de sangue de 273 equinos, e os soros foram testados pela RIFI, usando R. rickettsii e R. parkeri como antígenos, considerando-se como positivos títulos ≥64. Entre 273 soros, 15 (5,5%) reagiram contra R. rickettsii e 5 (1,8%) para R. parkeri. Cinco de seis haras estudados tinham animais reativos, e a taxa de sororreatividade variou de 0 a 13%. Os títulos variaram de 64 para 512, e três amostras apresentaram título de 512. Nove animais reagiram para R. rickettsii com títulos quatro vezes maiores que para R. parkeri. Esses resultados sugerem que equinos no Norte do Estado do Paraná, Brasil, podem ter sido expostos a uma rickettsia idêntica ou muito próxima a R. rickettsii.(AU)

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