RESUMO
Angiotensin I-converting enzyme (ACE) plays a key role in the renin-angiotesin aldosterone cascade. We analysed the secondary structure and structural organization of a purified 65kDa N-domain ACE (nACE) from Wistar rat mesangial cells, a 90 kDa nACE from spontaneously hypertensive rats and a 130 kDa somatic ACE. The C-terminal alignment of the 65 kDa nACE with rat ACE revealed that the former was truncated at Ser(482), and the sequence of the 90 kDa nACE ended at Pro(629). Protein's secondary structure consisted predominantly of alpha-helices. The 90 and 65 kDa isoforms were the most stable in guanidine and at low pH, respectively. Enzymatic activity decreased with loss in secondary structure, except in the case of guanidine HCl where the 90 kDa fragment loses its secondary structure faster than its enzymatic activity. We identified and characterized the activity and stability of these isoforms and these findings would be helpful on the understanding of the role of nACE isoforms in hypertension.
Assuntos
Células Mesangiais/enzimologia , Peptidil Dipeptidase A/química , Análise Espectral , Sequência de Aminoácidos , Animais , Ativação Enzimática , Estabilidade Enzimática/efeitos dos fármacos , Guanidina/farmacologia , Humanos , Concentração de Íons de Hidrogênio , Hipertensão/enzimologia , Isoenzimas/química , Isoenzimas/isolamento & purificação , Isoenzimas/metabolismo , Modelos Moleculares , Dados de Sequência Molecular , Peptidil Dipeptidase A/isolamento & purificação , Peptidil Dipeptidase A/metabolismo , Estrutura Secundária de Proteína , Estrutura Terciária de Proteína , Ratos , Ratos Endogâmicos SHR , Ratos Wistar , TemperaturaRESUMO
Resumo: O ensino de Medicina na Unifesp vem sendo reformulado, com a implantação em 1997 de nova estrutura curricular (Currículo Nuclear). Aspecto fundamental da reformulação é o desenvolvimento de sistemática de avaliação, coerente com a mudança realizada. Três parâmetros vêm sendo utilizados para avaliação do aprendizado: pontuação obtida pelo aluno durante o curso, desempenho do formado na prova de seleção à Residência Médica e o Teste do Progresso. Durante o curso, os alunos vão acumulando pontos, de acordo com notas e conceitos obtidos em atividades teóricas e práticas. A prova de acesso à Residência não é obrigatória, mas todos os formados pela Unifesp dela participam; pode ser considerada uma avaliação final de curso. O Teste do Progresso é um teste de suficiência e consiste na aplicação de uma mesma prova, simultaneamente, a alunos das seis séries do curso. A análise de quatro turmas (377 alunos graduados no período 1994-1997) mostrou significativa relação (p < 0,0001) entre a pontuação obtida durante os seis anos do curso e o desempenho no exame de acesso à Residência Médica. Em 1998, o Teste do Progresso, em sua terceira aplicação, revelou-se instrumento capaz de discriminar as 5a e 6a séries (Internato) das demais.
Summary In 1997 the Universidade Federal de São Paulo modified its medical curriculum with the introduction of a Core Curriculum. The reform was accompanied by an evaluation program that used three parameters: the punctuation achieved by the student both at the end of six years's course and at the access exam to the Residency Program, and also the Progress Test. Analysis of four graduated cohorts (1994-1997) showed a significant correlation (p < 0.0001) between both punctuation scores. The Progress Test on its third edition (1998), proved to be an useful instrument, capable to discriminate the internship (5th and 6th years) from the previous ones.