RESUMO
The detection of replicative intermediate RNAs as markers of active replication of RNA viruses is an essential tool to investigate pathogenesis in acute viral infections, as well as in their long-term sequelae. In this regard, strand-specific PCR has been used widely to distinguish (-) and (+) enteroviral RNAs in pathogenesis studies of diseases such as dilated cardiomyopathy. It has been generally assumed that oligonucleotide-primed reverse transcription of a given RNA generates only the corresponding specific cDNA, thus assuring the specificity of a PCR product amplified from it. Nevertheless, such assumed strand-specificity is a fallacy, because falsely primed cDNAs can be produced by RNA reverse transcription in the absence of exogenously added primers, (cDNA(primer)(-)), and such falsely primed cDNAs are amplifiable by PCR in the same way as the correctly primed cDNAs. Using as a prototype the coxsackievirus B5 (CVB5), a (+) strand RNA virus, it was shown that cDNA(primer)(-) renders the differential detection of viral (-) and (+) RNAs by conventional PCR virtually impossible, due to gross non-specificity. Using in vitro transcribed CVB5 RNAs (+) and (-), it was shown that cDNA(primer)(-) could be removed effectively by magnetic physical separation of correctly primed biotinylated cDNA. Such strategy enabled truly strand-specific detection of RNA (-) and (+), not only for CVB5, but also for other non-polio enteroviruses. These findings indicate that previous conclusions supporting a role for the persistence of actively replicating enterovirus in the pathogenesis of chronic myocarditis should be regarded with strong skepticism and purification of correctly primed cDNA should be used for strand-specific PCR of viral RNA in order to obtain reliable information on this important subject.
Assuntos
DNA Complementar/isolamento & purificação , Enterovirus Humano B/isolamento & purificação , RNA Viral/genética , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa/métodos , Animais , Chlorocebus aethiops , Enterovirus Humano B/genética , Humanos , Magnetismo , RNA Viral/isolamento & purificação , Sensibilidade e Especificidade , Células VeroRESUMO
Os autores avaliaram a eficácia do osso bovino do tipo cone alveolar, na estimulação da neoformação óssea em alvéolos dentários de humanos. Foram executadas 15 exodontias, com enxertia do osso bovino nos alvéolos envolvidos. Realizaram-se dois tipos de avaliações radiográficas da região enxertada com auxílio da computação: mensuração entre dois pontos determinados e histograma dos valores da densidade óptica a cada mês até completar 6 meses. Decorrido esse período, os alvéolos foram reabertos e o conteúdo da porção central colhido para ser submetido a estudo histológico. Verificou-se que no período de 6 meses a matriz mineral bovina apresentou-se sem vitalidade, radiograficamente sua densidade óptica não comprovou a neoformação óssea e, por meio de mensuração entre dois pontos, não ocorreu reabsorção óssea alveolar estatisticamente significante. Esses fatos não comprovaram a eficiência do uso de enxerto para melhorar o leito receptor de futuro implante.