RESUMO
Tritrichomonas foetus is a pathogenic protozoan that causes a venereal disease in cattle known as bovine genital tricomonosis. In spite of the efficacy to recognize the target genomic DNA, the protocols so far developed for the diagnosis of this organism by PCR promote some inespecific amplifications or they are unable to discriminate T. foetus against other species within the genus. The objective of this study was to assess and optimize PCR and nested-PCR assays for the specific diagnosis of T. foetus, using novel primers selected from the alignment of sequences of the genes 18S rRNA, 5.8S rRNA, 28S rRNA and of the internal transcribed spacers of the rDNA (ITS1 and ITS2). A pair of primers was constructed for the genus-specific amplification of a 648 bp fragment and two others to amplify T. foetus species-specific fragments of 343 and 429 bp. No cross amplification was observed against Bos taurus genomic DNA neither against the DNA of usual bovine genital pathogens. Both, single and nested-PCR assays, presented analytical sensitivity to detect at least two T. foetus organisms.
Tritrichomonas foetus é um protozoário patogênico responsável por doença venérea em bovinos conhecida por tricomonose genital bovina. A tricomonose bovina é uma doença venérea causada pelo protozoário cujo habitat natural é o trato genital. Os protocolos já desenvolvidos para o diagnóstico deste parasito por PCR, apesar de serem eficazes na identificação do DNA genômico alvo, promovem algumas amplificações inespecíficas ou são incapazes de distinguir T. foetus das outras espécies do gênero. O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de estabelecer e otimizar protocolos de ensaio de PCR e nested-PCR para o diagnóstico específico de T. foetus, empregando-se novos iniciadores, selecionados do alinhamento das seqüências dos genes 18S rRNA, 5,8S rRNA, 28S rRNA e dos espaços transcritos do rDNA (ITS1 e ITS2). Um par de iniciadores foi construído para amplificação gênero-específica de um fragmento de 648 pares de base e outros dois para a obtenção de produtos espécie- específicos de 343 e 429 pb. Nenhuma reação cruzada foi observada frente ao DNA genômico de Bos taurus ou de microrganismos responsáveis por infecções genitais. A sensibilidade dos ensaios de PCR e de nested-PCR apresentados neste estudo permitiu um limiar de detecção de até dois parasitos.
RESUMO
The bovine tripanosomiasis by Trypanosoma vivax was reported for the first time in Brazil by Shaw & Lainson, in 1972, in Pará. Recently it has been reported in several areas of the Pantanal Mato-Grossense Region. The objective of the present paper was to report, for the first time, the occurrence of T. vivax in the State of Tocantins, in a Brahman herd of 250 animals, which had been introduced into a property in the municipality of Formoso do Araguaia, coming from São Paulo. From animals presenting signs of weakness, 9 was randomly chosen for detailed clinical assessment and laboratory exams such as blood smears and hematocrit. These animals presented weigh loss, edema, fever and mucous membrane paleness. The microscopic smear examination revealed high parasitemias for T. vivax in samples of three animals, with the packet cell volumes ranging between 15 and 20%. The herd history, the ecosystem of the area and the results of the clinical and laboratory exams confirmed the occurrence of an outbreak of trypanosomiasis by T. vivax in a bovine herd in the State of Tocantins. KEY WORDS: Trypanosoma vivax, bovine trypanosomiasis, Tocantins, epidemiology.
A tripanossomíase bovina por Trypanosoma vivax foi registrada pela primeira vez no Brasil por SHAW & LAINSON, em 1972, no Pará. Recentemente, tem sido reportada em várias regiões do Pantanal Mato-Grossense. O presente trabalho teve como objetivo relatar, pela primeira vez, a ocorrência de T. vivax no Estado do Tocantins, em um rebanho composto de 250 animais da raça Brahman, recém-introduzido em uma propriedade no município de Formoso do Araguaia, procedente de São Paulo. Esc olheram- se ao acaso nove animais que apresentavam sinais de debilidade para a execução de exames clínicos detalhados e colheita de sangue para preparo de esfregaços sangüíneos e determinação do hematócrito. Entre os animais examinados observaram-see emagrecimento, edema de barbela, febre e palidez de mucosa. O exame microscópico revelou parasitemias elevadas por T. vivax em amostras de três animais, cujos hematócritos apresentavam valores entre 15% e 20%. O histórico do rebanho, o ecossistema da região e os resultados dos exames clínicos e laboratoriais confirmaram a ocorrência de um surto de tripanossomíase por T. vivax em um rebanho no Estado do Tocantins. PALAVRAS-CHAVE: Epidemiologia, Trypanosoma vivax, Tocantins, tripanossomíase bovina.
RESUMO
The bovine tripanosomiasis by Trypanosoma vivax was reported for the first time in Brazil by Shaw & Lainson, in 1972, in Pará. Recently it has been reported in several areas of the Pantanal Mato-Grossense Region. The objective of the present paper was to report, for the first time, the occurrence of T. vivax in the State of Tocantins, in a Brahman herd of 250 animals, which had been introduced into a property in the municipality of Formoso do Araguaia, coming from São Paulo. From animals presenting signs of weakness, 9 was randomly chosen for detailed clinical assessment and laboratory exams such as blood smears and hematocrit. These animals presented weigh loss, edema, fever and mucous membrane paleness. The microscopic smear examination revealed high parasitemias for T. vivax in samples of three animals, with the packet cell volumes ranging between 15 and 20%. The herd history, the ecosystem of the area and the results of the clinical and laboratory exams confirmed the occurrence of an outbreak of trypanosomiasis by T. vivax in a bovine herd in the State of Tocantins. KEY WORDS: Trypanosoma vivax, bovine trypanosomiasis, Tocantins, epidemiology.
A tripanossomíase bovina por Trypanosoma vivax foi registrada pela primeira vez no Brasil por SHAW & LAINSON, em 1972, no Pará. Recentemente, tem sido reportada em várias regiões do Pantanal Mato-Grossense. O presente trabalho teve como objetivo relatar, pela primeira vez, a ocorrência de T. vivax no Estado do Tocantins, em um rebanho composto de 250 animais da raça Brahman, recém-introduzido em uma propriedade no município de Formoso do Araguaia, procedente de São Paulo. Esc olheram- se ao acaso nove animais que apresentavam sinais de debilidade para a execução de exames clínicos detalhados e colheita de sangue para preparo de esfregaços sangüíneos e determinação do hematócrito. Entre os animais examinados observaram-see emagrecimento, edema de barbela, febre e palidez de mucosa. O exame microscópico revelou parasitemias elevadas por T. vivax em amostras de três animais, cujos hematócritos apresentavam valores entre 15% e 20%. O histórico do rebanho, o ecossistema da região e os resultados dos exames clínicos e laboratoriais confirmaram a ocorrência de um surto de tripanossomíase por T. vivax em um rebanho no Estado do Tocantins. PALAVRAS-CHAVE: Epidemiologia, Trypanosoma vivax, Tocantins, tripanossomíase bovina.