RESUMO
The aim of this study was to evaluate the effect of supplementing serum-containing media with a mixture of cis- and trans-9,11- and -10,12-conjugated isomers of linoleic acid (CLA) during different steps of the in vitro production (IVM, IVC, or IVM + IVC) of bovine embryos on their embryonic development, cryotolerance, and lipid profile. To evaluate the impact of the CLA on membrane lipids, such as phosphatidylcholine (PC) and sphingomyelin (SM), the embryos' lipid profiles were obtained using matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry. The cleavage rates (78.6%-84.8%) and blastocyst development (44.8%-51.2%) remained unaltered. The postthawing reexpansion rates were higher (P < 0.05) when the CLA was added to the IVM medium (82.6%) or to the IVM + IVC medium (83.8%) than the control (69.3%) or IVC medium (63.0%). Changes in the blastocysts' lipid profile occurred when supplementation was restricted to the IVM or IVC medium. However, the most prominent effects of the CLA on the embryonic PC and SM profiles were observed when the supplement was added to IVM + IVC media, which was an increase in the level of highly unsaturated PCs containing 36 or 38 carbons, which are likely to contain CLA residues. These results showed that the molecular mechanism resulting in the improved cryosurvival, observed with CLA supplementation during bovine embryonic in vitro production, was related to the composition of structural lipids of cellular membranes and is dependent on the treatment length. Monitoring the lipid profile of embryonic membranes may improve the CLA supplementation strategy and facilitate the development of new IVC systems to improve the cryopreservation of bovine embryos and those of other domestic species.
Assuntos
Criopreservação/veterinária , Técnicas de Cultura Embrionária/veterinária , Ácido Linoleico/farmacologia , Lipídeos de Membrana/metabolismo , Animais , Bovinos , Criopreservação/métodos , Feminino , Fertilização in vitro/veterinária , Espectrometria de MassasRESUMO
A produção in vitro (PIV) de embriões é uma ferramenta interessante, que pode ser aplicada na tentativade transpor as limitações inerentes à espécie ovina, como a estacionalidade reprodutiva, a inseminação artificialtranscervical, a variabilidade na resposta aos protocolos de superovulação, as falhas na fertilização, bem como anecessidade de cirurgia para coleta e transferência de gametas e embriões. Os embriões produzidos podem sertransferidos para receptoras ou criopreservados para uso futuro. As taxas de desenvolvimento embrionário invitro ainda são significativamente inferiores, quando comparadas à situação in vivo, o que pode ser atribuído adeficiências tanto na maturação nuclear quanto na citoplasmática, além do bloqueio do desenvolvimentoembrionário. A composição dos meios de cultivo e as condições de incubação estabelecidas interferem demaneira contundente no sucesso dessa biotécnica. Nesse contexto, a suplementação com antioxidantes e fatoresde crescimento durante as diferentes etapas da PIV tem sido amplamente utilizada visando ao aprimoramento datécnica e da qualidade dos embriões obtidos. Nesta revisão, serão discutidos os avanços e os desafios dessabiotécnica, aplicada a ovinos, nas diferentes etapas compreendidas.
In vitro production (IVP) of embryos is an interesting tool that can be applied in an attempt toovercome the main limitations of a wider application in ovine reproduction, we can cite the naturally occurringanoestrus period, the variability of response to superovulatory treatments, the fertilization failure and the needfor surgery for the collection and transfer of gametes and embryos. The embryos can be transferred to recipientsor cryopreserved for future use. The in vitro production of embryos is still significantly lower when compared toin vivo, which can be attributed to compromised nuclear and cytoplasmic maturation and embryonicdevelopment failure. The composition of the culture media and the incubation conditions established mayinterfere with the success of this biotechnology. In this context, supplementation with antioxidants and growthfactors during the different stages of IVP production has been widely used in order to improve the technique andquality of embryos. This paper reviews the advances and challenges of this biotechnology in sheep, analyzing thedifferent stages included.
Assuntos
Masculino , Animais , Desenvolvimento Embrionário , Fertilização in vitro , Ovinos/embriologia , Técnicas In Vitro/tendências , Técnicas In Vitro/veterináriaRESUMO
A produção in vitro (PIV) de embriões é uma ferramenta interessante, que pode ser aplicada na tentativade transpor as limitações inerentes à espécie ovina, como a estacionalidade reprodutiva, a inseminação artificialtranscervical, a variabilidade na resposta aos protocolos de superovulação, as falhas na fertilização, bem como anecessidade de cirurgia para coleta e transferência de gametas e embriões. Os embriões produzidos podem sertransferidos para receptoras ou criopreservados para uso futuro. As taxas de desenvolvimento embrionário invitro ainda são significativamente inferiores, quando comparadas à situação in vivo, o que pode ser atribuído adeficiências tanto na maturação nuclear quanto na citoplasmática, além do bloqueio do desenvolvimentoembrionário. A composição dos meios de cultivo e as condições de incubação estabelecidas interferem demaneira contundente no sucesso dessa biotécnica. Nesse contexto, a suplementação com antioxidantes e fatoresde crescimento durante as diferentes etapas da PIV tem sido amplamente utilizada visando ao aprimoramento datécnica e da qualidade dos embriões obtidos. Nesta revisão, serão discutidos os avanços e os desafios dessabiotécnica, aplicada a ovinos, nas diferentes etapas compreendidas.(AU)
In vitro production (IVP) of embryos is an interesting tool that can be applied in an attempt toovercome the main limitations of a wider application in ovine reproduction, we can cite the naturally occurringanoestrus period, the variability of response to superovulatory treatments, the fertilization failure and the needfor surgery for the collection and transfer of gametes and embryos. The embryos can be transferred to recipientsor cryopreserved for future use. The in vitro production of embryos is still significantly lower when compared toin vivo, which can be attributed to compromised nuclear and cytoplasmic maturation and embryonicdevelopment failure. The composition of the culture media and the incubation conditions established mayinterfere with the success of this biotechnology. In this context, supplementation with antioxidants and growthfactors during the different stages of IVP production has been widely used in order to improve the technique andquality of embryos. This paper reviews the advances and challenges of this biotechnology in sheep, analyzing thedifferent stages included.(AU)