RESUMO

A infecção por HPV tem se tornado uma das infecções sexualmente transmissíveis mais prevalentes no mundo, sendo a causa primária do câncer cervical. O processo inflamatório cervical causado pelo HPV e subsequente desenvolvimento de lesões pre-malignas são induzidas direta ou indiretamente por um sistema complexo de interação entre oncogenes e fatores do hospedeiro, secretados por queratinócitos, células imunes e matriz extracelular (MEC). O desenvolvimento e modelamento da MEC pode ser regulado através da expressão de metaloproteinases (MMP), que tem sido associada a diversos tipos de tumores. Assim, no presente trabalho objetivamos identificar e associar as expressões de MMP -2, -7 e -9 e seus moduladores TIMP-2, EphA2, EfrinaA1 e TNF-α em lesões de colo uterino. Para isto, incluímos 30 mulheres com idades entre 24 e 57 anos. Destas, 15 apresentaram lesões de colo uterino de alto grau (HSIL) e 15 eram mulheres histerectomizadas sem lesões associadas a infecção pelo HPV. Avaliamos a expressão das MMPs por imunohistoquímica no epitélio e estroma das amostras incluídas. Observamos um aumento de todas as MMPs e seus moduladores no estroma das lesões do grupo com HSIL comparados com o grupo controle, principalmente MMP-2, -9 e EphA2, reforçando papéis no processo de degradação e invasão. Desta forma, concluímos que MMP-2, MMP-9 e EphA2 possuem papel no desenvolvimento de lesões de alto grau. Além do trabalho in vivo, nosso estudo buscou avaliar o papel in vitro da citocina pró-inflamatrória TNF-α na modulação da expressão das MMPs e seus moduladores em linhagens cervicais de queratinócitos infectados (HeLa) ou não (C33A) por HPV. Para tanto, avaliamos a expressão de RNAm destes marcadores por PCR em tempo real (qPCR). Observamos um aumento da expressão do RNAm destes marcadores, exceto MMP-9 e EphA2, em HeLa quando relacionados com a expressão em C33A, sugerindo que a presença do HPV de alto risco em HeLa possa estar influenciando na expressão gênica destes marcadores. Diante disto, concluímos que TNF-α possui papel modulador na expressão de RNAm das MMPs e seus moduladores, exceto EphA2, exclusivamente em linhagens de queratinócitos infectados pelo HPV.

HPV infection has become one of the most prevalent sexually transmitted infections in the world, being the primary cause of cervical cancer. The HPV cervical inflammatory process and subsequent pre-malignant lesions development are induced directly or indirectly by a complex system of interaction between oncogenes and host factors, secreted by keratinocytes, immune cells and extracellular matrix (ECM). The ECM development and modeling can be regulated through the expression of metalloproteinases (MMP), which has been associated with several types of tumors. Thus, in the present work we aimed to identify and associate the MMP-2, -7 and -9 and their modulators TIMP-2, EphA2, EfrinaA1 and TNF-α expressions in cervical lesions. For this, we included 30 volunteers between the ages of 24 and 57 years. Of these, 15 presented with high grade cervical lesions (HSIL) and 15 were hysterectomized volunteers without HPV-associated lesions. We evaluated the MMPs expression by immunohistochemistry in the epithelium and stroma of the included samples. We observed an increase in all MMPs and their modulators in the stromal lesions of the HSIL group compared to the control group, mainly MMP-2, -9 and EphA2, reinforcing roles in the degradation and invasion process. In this way, we concluded that MMP-2, MMP-9 and EphA2 play a role in the outcome of high-grade lesions. In addition to in vivo work, our study aimed to evaluate the in vitro role of the proinflammatory cytokine TNF-α in modulating the MMPs expression and their modulators in cervical keratinocytes lineages infected (HeLa) or not (C33A) by HPV. For this, we evaluated the mRNA expression of these markers by real-time PCR (qPCR). We observed increased mRNA expression of these markers except MMP-9 and EphA2 in HeLa when related to C33A expression, suggesting that the presence of high-risk HPV in HeLa may be influencing the gene expression of these markers. We concluded that TNF-α modulated MMPs mRNA expression and its modulators, excepted by EphA2, only in HPV infected keratinocytes.

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RESUMO

A infecção pelo HPV é o principal fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma cervical. Contudo, a maioria das mulheres permanece assintomática, desenvolvendo lesões intraepiteliais de baixo e alto grau. Estudos demonstram que polimorfismos nas regiões promotoras de genes de citocinas estão associados com a gravidade de muitas doenças infecciosas. Dentre estas, podemos citar a citocina pró-inflamatória TNF-alfa, onde suas atividades celulares são mediadas pela interação entre a citocina e seus receptores (TNFR1 e R2). Assim, tivemos como objetivo neste estudo, identificar polimorfismos dos receptores de TNF-alfa associar ao aparecimento e progressão da lesão cervical, além de avaliar a expressao da proteína TNFR1 em lesoes cervicais. As técnicas de PCR e RFLP foram realizadas para identificar o polimorfismo de base única (SNP) do gene TNFR1 na posição +36A/G. Para a expressão da proteína foi realizada a imunohistoquimica em fragmentos de tecido parafinado provenientes de lesões cervicais e histerectomias (controle)Foram incluídas 365 mulheres neste estudo, sendo 183 pacientes e 182 controles. O genótipo AA TNFR1+36A/G foi associado com a proteção ao desenvolvimento de lesões de baixo grau (p=0,03) Para a análise da expressão de TNFR1, foram selecionadas 46 mulheres (17 controles, 15 HSIL e 14 LSIL). Foi observado um aumento na expressão deste receptor em células inflamatórias no corion de mulheres portadores de HSIL quando comparadas com o grupo controle (p=0,001). Ao associarmos os genótipos com a expressão da proteina, foi observado que portadoras de TNFR1+36AA não apresentam alterações na expressão TNFR1 independente do grau de lesão cervical. Assim, a presença de TNFR1 pode estar sendo modulada negativamente pela infecção por HPV e este marcador pode ser utilizado como indicador para a progressão de lesões pré-malignas cervicais.

HPV infection is the main risk factor for development of cervical carcinoma. However,most women remain asymptomatic, developing high grade and low intraepitheliallesions. Studies demonstrated that polymorphisms in promoter regions of cytokinesgenes are associated with the severity of many infectious diseases. Among these, wemention the proinflammatory cytokine TNF-alfa, where their cellular activities aremediated by cytokine and their receptors (TNFR1 and R2) interaction. Thus, in thisstudy, we have the aim to identify TNF-alfa receptors polymorphisms and associate withthe onset and progression of cervical lesions, and to evaluate the TNFR1 expression incervical lesions. PCR and RFLP techniques were performed to identify the single basepolymorphism (SNP) TNFR1 gene at position +36 A/G. For protein expression, it wasperformed immunohistochemistry on paraffin tissue fragments from cervical lesionsand hysterectomies (control). Three hundred and sixty five women were included, 183patients and 182 controls. The AA genotype TNFR1 +36 A /G was associated withprotection from developing low-grade lesions (p = 0.03) for the analysis of TNFR1expression, we selected 46 women (17 controls, 15 HSIL and 14 LSIL). It wasobserved an increase in the receptor expression on inflammatory cells from corion ofHSIL women when compared with the control group (p = 0.001). By associatinggenotypes with expression of the protein, it was observed that carriers of TNFR1 +36AA did not show changes in the TNFR1expression, independent cervical lesion degree.Thus, the TNFR1 presence may be negatively being modulated by HPV infection andthis marker can be used as an indicator of premalignant cervical lesions progression.

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OBJECTIVE: This study compared anthropometric measurements and insulin resistance indexes of individuals with or without metabolic syndrome (MS), stratified by the presence of glycemic abnormalities. SUBJECTS AND METHODS: 454 individuals (66% women, 54% Caucasians) were included, being 155 allocated to group 1 (without MS, without glycemic abnormality), 32 to group 2 (without MS, with glycemic abnormality), 104 to group 3 (with MS, without glycemic abnormality), and 163 to group 4 (with MS, with glycemic abnormality). Groups were compared by ANOVA. RESULTS: Those with MS (3 and 4) showed the worst anthropometric and lipid profiles; in group 2, despite higher plasma glucose levels, the mean values of anthropometric variables and lipids did not differ from group 1. The highest mean values of HOMA-IR were found in the groups with MS, while group 2 showed the lowest HOMA-ß. Triglyceride was the metabolic variable with the highest correlation coefficients with anthropometry. However, the strongest correlations were those of waist circumference (r = 0.503) and waist-to-height ratio (r = 0.513) with HOMA-IR (p < 0.01). CONCLUSION: Our findings indicate that, in a sample of the Brazilian population, any anthropometric measure identifies individuals with MS, but such measurements seem to be unable to differentiate those with glycemic disturbance. We reinforce the strongest relationship of measures of central adiposity with insulin resistance, suggesting utility for the waist-to-height. An autoimmune component may be contributing to the deterioration of glucose metabolism of individuals from group 2.

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OBJETIVO: Este estudo comparou parâmetros antropométricos e de resistência à insulina de indivíduos sem e com síndrome metabólica (SM), subestratificados pela presença de anormalidades glicêmicas. SUJEITOS E MÉTODOS: Foram incluídos 454 indivíduos (66 por cento mulheres, 54 por cento brancos), sendo 155 alocados para o grupo 1 (sem SM, sem anormalidade glicêmica), 32 para o grupo 2 (sem SM, com anormalidade glicêmica), 104 no grupo 3 (com SM, sem anormalidade glicêmica) e 163 no grupo 4 (com SM e anormalidade glicêmica). Os grupos foram comparados por ANOVA. RESULTADOS: Os grupos com SM (3 e 4) apresentaram os piores perfis antropométrico e lipídico; no grupo 2, apesar de glicemias significantemente mais elevadas, as médias das variáveis antropométricas e lipídicas não diferiram do grupo 1. Os maiores valores médios de HOMA-IR foram encontrados nos grupos com SM, enquanto o grupo 2 apresentou o menor HOMA-β. A trigliceridemia foi a variável metabólica com coeficientes de correlação mais elevados com a antropometria. Porém, as correlações mais fortes foram da circunferência da cintura (r = 0,503) e da razão cintura-altura (r = 0,513) com o HOMA-IR (p < 0,01). CONCLUSÃO: Nossos achados revelam que, em amostra da população brasileira, qualquer das medidas antropométricas identifica indivíduos com SM, mas não parece capaz de diferenciar aqueles com distúrbio glicêmico. Reforçamos a relação mais forte das medidas de adiposidade central com resistência à insulina, sugerindo utilidade da razão cintura-altura. É possível que componente autoimune contribua para o comprometimento do metabolismo glicídico dos indivíduos do grupo 2.

OBJECTIVE: This study compared anthropometric measurements and insulin resistance indexes of individuals with or without metabolic syndrome (MS), stratified by the presence of glycemic abnormalities. SUBJECTS AND METHODS: 454 individuals (66 percent women, 54 percent Caucasians) were included, being 155 allocated to group 1 (without MS, without glycemic abnormality), 32 to group 2 (without MS, with glycemic abnormality), 104 to group 3 (with MS, without glycemic abnormality), and 163 to group 4 (with MS, with glycemic abnormality). Groups were compared by ANOVA. RESULTS: Those with MS (3 e 4) showed the worst anthropometric and lipid profiles; in group 2, despite higher plasma glucose levels, the mean values of anthropometric variables and lipids did not differ from group 1. The highest mean values of HOMA-IR were found in the groups with MS, while group 2 showed the lowest HOMA-β. Triglyceride was the metabolic variable with the highest correlation coefficients with anthropometry. However, the strongest correlations were those of waist circumference (r = 0.503) and waist-to-height ratio (r = 0.513) with HOMA-IR (p < 0.01). CONCLUSION: Our findings indicate that, in a sample of the Brazilian population, any anthropometric measure identifies individuals with MS, but such measurements seem to be unable to differentiate those with glycemic disturbance. We reinforce the strongest relationship of measures of central adiposity with insulin resistance, suggesting utility for the waist-to-height. An autoimmune component may be contributing to the deterioration of glucose metabolism of individuals from group 2.

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