RESUMO
We aimed to detect DNA of Borrelia burgdorferi in whole blood and serum samples of patients with clinical symptoms and epidemiology compatible with Brazilian Lyme-like disease. Four patients with positive epidemiological histories were recruited for the study. Blood samples were collected, screened by serologic testing by ELISA and Western blotting and molecular identification of B. burgdorferi by amplifying a fragment of the conserved gene that synthesizes the hook flagellar flgE. The results showed positive serology and for the first time, the presence of B. burgdorferi sensu lato in humans in the Midwest region of Brazil. The resulting sequences were similar to GenBank corresponding sequences of B. burgdorferi flgE gene. By neighbor-joining the phylogenetic analysis, the flgE sequence of the Brazilian strain clustered in a monophyletic group with the sequence of B. burgdorferi sensu lato under 100% bootstrap support. This study opens up promising perspectives and reinforces the need for additional studies to determine the epidemiological characteristics of the disease, as well as the impact of the prevalence of Brazilian borreliosis in Mato Grosso do Sul State, Brazil.
Assuntos
Borrelia burgdorferi/isolamento & purificação , Doença de Lyme/sangue , Adulto , Proteínas de Bactérias/genética , Western Blotting , Brasil/epidemiologia , Estudos de Casos e Controles , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Feminino , Humanos , Doença de Lyme/diagnóstico , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Adulto JovemRESUMO
Os hemoparasitos pertencentes ao gênero Babesia são intensamente estudados devido sua importância na economia da pecuária mundial. Culturas de hemócitos e células embrionárias de carrapatos constituem excelentes substratos para o isolamento e cultivo de hemoparasitos patogênicos, incluindo Babesia spp. Esta metodologia contribui para estudos da biologia, fisiopatologia, bem como controle da espécie. O presente estudo teve como objetivos cultivar in vitro, esporocinetos de Babesia bigemina em hemócitos e em células embrionárias de Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Após desinfecção superficial de fêmeas ingurtitadas, a hemolinfa foi coletada e transferida para frascos de cultura com 25 cm2 e tubo de 10cm² e incubados a 28 °C. Para iniciar o cultivo primário embrionário, fêmeas ingurgitadas de R. (B) microlpus foram incubadas à 28°C e após 13 dias de postura, os ovos foram desinfectados superficialmente, macerados, filtrados e transferidos para meio de cultivo L15 suplementado e em temperatura de 28ºC. Observações foram realizadas diariamente em microscópio de contraste de fase invertido. Realizou-se Citospin e gota espessa das amostras, que foram coradas com Giemsa e observadas em microscopia de luz. Foram realizadas PCR para B. bigemina e Babesia bovis, utilizando dois pares de iniciadores para identificar o gene 18SrRNA para ambas espécies e também foi realizado a morfometria dos esporocinetos para confirmação da espécie. Esporocinetos de B. bigemina criopreservados a partir da cultura de hemócitos, foram descongelados, reativados em hemócitos livres de infecção e em células de linhagem CTVM/BME2. Observou-se o desenvolvimento dos esporocinetos de B. bigemina a partir do primeiro dia do cultivo, após reativação nas células. Os protozoários apresentaram boa motilidade e capacidade de aderência na membrana celular pela extremidade apical. No citoplasma dos hemócitos observou-se formas redondas, móveis e com núcleo vísivel de esporocinetos de B. bigemina. Nas amostras coradas do 3° e 17° dia do cultivo de esporocinetos de B. bigemina em hemócitos foram observadas formas íntegras piriformes de esporocinetos imaturos e maduros, com núcleo corado de vermelho escuro, as vezes, centralizado ou próximo da extremidade apical. Nas amostras do 17° dia de cultivo foram observados muitas formas pequenas redondas e ovais, compatíveis com esporocinetos imaturos. Pela técnica PCR foi possível a amplificação do DNA para o gene 18SrRNA de B. bigemina, assim como pelo estudo comparativo das mensurações dos esporocinetos. Os hemócitos e células embrionárias de R. (B.) microplus constituíram-se em substratos eficientes para cultivo in vitro de esporocinetos de B. bigemina. Foi possível a criopreservação de esporocinetos de B. bigemina em nitrogênio líquido e a sua reativação em cultura de hemócitos de R. (B.) microplus e em células da linhagem BME2
Assuntos
Animais , Babesia/crescimento & desenvolvimento , Economia/estatística & dados numéricos , Economia/tendênciasRESUMO
This study assesses the weight gain of partially engorged Rhipicephalus sanguineus females that were artificially fed via capillary tubes and the influence of capillary tube feeding on the biological parameters of the non-parasitic stage of the species. The ticks were sorted into four groups, each containing ten females of a homogeneous weight. The groups were each treated for different feeding times, 2, 6, 12 and 24 hours. The weight gain of the artificially fed females was measured, and the biological parameters of the non-parasitic stage of the tick were observed for each treatment group. The statistical non-parametrical Dunn and Kruskal-Wallis tests were used to compare the results. The mean weights (mg) were 0.2±2.4; 4.3±5.8; 7.4±5.8 and 12.0±11.2 for the 2, 6, 12 and 24 hours feeding groups, respectively. The weight of the fed groups increased as the capillary feeding time increased, and this relationship was highly significant (P<0.05) between the groups fed for 2 and 24 hours. No statistically significant differences (P>0.05) were observed in the parameters of the non-parasitic stage for the artificially fed groups. It can be concluded that artificial feeding via capillary tubes provides an efficient and easy method for the artificial intake of blood by R. sanguineus. Furthermore, it was noted that the ticks fed in vitro were able to establish a new generation. The experimental method shows great promise in studies that aim to investigate biological disease agents.
O objetivo deste trabalho foi avaliar o ganho de peso de fêmeas Rhipicephalus sanguineus parcialmente ingurgitadas alimentadas artificialmente por meio de tubos capilares e verificar a sua influência nos parâmetros biológicos da fase não parasitária. Os carrapatos foram separados em quatro grupos de peso homogêneo compostos por 10 fêmeas cada. Os grupos foram submetidos a diferentes tempos de alimentação: 2, 6, 12 e 24 horas. Para comparação dos resultados, foram utilizados os testes estatísticos não paramétricos Dunn e Kruskal-Wallis. Os pesos médios (mg) adquiridos foram de 0,2±2,4; 4,3±5,8; 7,4±5,8 e 12,0±11,2 nos grupos de 2, 6, 12 e 24 horas, respectivamente. O peso dos grupos alimentados foi maior à medida que o tempo de exposição ao tubo capilar aumentou, observando-se diferença significativa (P<0,05) entre os grupos alimentados por 2 e 24 horas. Não houve diferenças estatísticas significativas (P>0,05) nos parâmetros relativos à fase não parasitária entre os grupos submetidos à alimentação artificial. Concluiu-se que a alimentação artificial por meio de tubos capilares é um método de fácil execução e eficiente para ingestão de sangue por carrapatos R. sanguineus. Além disso, verificou-se que os carrapatos alimentados in vitro foram capazes de estabelecer uma nova geração. Esse método tem potencial para o desenvolvimento de estudos que visem a transmissão de bioagentes.
RESUMO
O presente trabalho teve como objetivo reportar a ocorrência de Borrelia spp. em culturas de células embrionárias de Boophilus microplus infectados naturalmente. Sete dias após o início de uma nova cultura primária de células embrionárias do carrapato B. microplus, incubadas a 31ºC, notou-se que as células começaram a degenerar. Ao exame em microscópio de contraste de fase detectou-se a presença de microrganismos alongado e com grande mobilidade. Lâminas de microscópio confeccionadas com amostras do sobrenadante da cultura, hemolinfa e massa de ovos, coradas pelo May Grünwald-Giemsa, permitiram a visualização de espiroquetas. O exame morfológico do microrganismo e sua visualização em B. microplus sugere ser Borrelia spp.
The aim of the present work was to report the occurrence of Borrelia spp. in embryonic cell cultures from naturally infected Boophilus microplus. Seven days after the beginning of a primary culture of embryonic cells of B. microplus at 31ºC was noted that the cells start suffering degeneration. Under examination at phase contrast microscope, the presence of prolongated microorganisms with great mobility was detected. Microscopic slides of the culture supernatant, hemolymph and egg mass, were stained by May Grünwald-Giemsa, allowing the visualization of the spirochetes. The morphologic examination of the microorganism and its visualization in. B. microplus, suggest to be Borrelia spp.