RESUMO
This study aimed to determine the in vitro nuclear maturation and cell death by apoptosis in goat oocytes. The ovaries of goats were collected during the dry (October-March) and rainy (April-September) seasons in slaughterhouses and transported to the Laboratory of Reproductive Biotechniques of UFRPE. Twelve repetitions were performed and cumulus oophorus were collected from follicles of 2-6 mm diameter using the technique of "slicing" and selected based on morphology. The experiment contained two groups: Group-1 (not matured), evaluated immediately after collection, and Group-2 (matured in vitro), assessed after 24 hours of maturation in a CO2 incubator, in which 25 oocytes per drop were placed in alkaline maturation (MBM). After collecting the oocytes from G-1 and G-2, the quality was determined by testing the enzyme activity of caspases and DNA fragmentation (TUNEL), using PhiPhiLux-G1D2 reagent, and in group G-2 the quality was only determined after nuclear maturation. During nuclear maturation stages, germinal vesicle, germinal vesicle breakdown and metaphase I and II were evaluated and no significant differences were found (P> 0.05). There was also no significant difference (P> 0.05) in enzymes activity of caspase and DNA fragmentation of oocytes matured and not matured in vitro. Based on the data obtained, it was concluded that rainy and dry seasons have no effect
Este estudo teve como objetivo determinar a maturação nuclear in vitro e a morte celular por apoptose em oócitos caprinos. Os ovários de cabras foram coletados nos períodos seco (outubro a março) e chuvoso (abril a setembro), em abatedouros, e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Foram realizadas 12 repetições e os complexos cumulus oophorus foram colhidos de folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro pela técnica de slicing e selecionados com base na morfologia. O experimento continha dois grupos: Grupo-1 (não maturados), avaliados logo após a colheita, e Grupo-2 (maturados in vitro), avaliados após a maturação de 24 horas em incubadora de CO2, na qual 25 oócitos foram colocados por gota em meio básico de maturação (MBM). Após a coleta dos oócitos do G-1 e G-2, foi determinada a qualidade, por meio dos testes de atividade das enzimas caspases e o de fragmentação de DNA (TUNEL), com reagente PhiPhiLux-G1D2, sendo que no grupo G-2 a qualidade só foi determinada após maturação nuclear. Avaliou-se durante os estádios de maturação nuclear as fases de vesícula germinativa, rompimento da vesícula germinativa, metáfase I e II, não havendo diferença significativa (P > 0,05). Também não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) na atividade das enzimas caspases e na fragmentação do DNA dos oócitos não maturados e maturados in vitro. Com base nos
RESUMO
This study aimed to determine the in vitro nuclear maturation and cell death by apoptosis in goat oocytes. The ovaries of goats were collected during the dry (October-March) and rainy (April-September) seasons in slaughterhouses and transported to the Laboratory of Reproductive Biotechniques of UFRPE. Twelve repetitions were performed and cumulus oophorus were collected from follicles of 2-6 mm diameter using the technique of "slicing" and selected based on morphology. The experiment contained two groups: Group-1 (not matured), evaluated immediately after collection, and Group-2 (matured in vitro), assessed after 24 hours of maturation in a CO2 incubator, in which 25 oocytes per drop were placed in alkaline maturation (MBM). After collecting the oocytes from G-1 and G-2, the quality was determined by testing the enzyme activity of caspases and DNA fragmentation (TUNEL), using PhiPhiLux-G1D2 reagent, and in group G-2 the quality was only determined after nuclear maturation. During nuclear maturation stages, germinal vesicle, germinal vesicle breakdown and metaphase I and II were evaluated and no significant differences were found (P> 0.05). There was also no significant difference (P> 0.05) in enzymes activity of caspase and DNA fragmentation of oocytes matured and not matured in vitro. Based on the data obtained, it was concluded that rainy and dry seasons have no effect
Este estudo teve como objetivo determinar a maturação nuclear in vitro e a morte celular por apoptose em oócitos caprinos. Os ovários de cabras foram coletados nos períodos seco (outubro a março) e chuvoso (abril a setembro), em abatedouros, e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Foram realizadas 12 repetições e os complexos cumulus oophorus foram colhidos de folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro pela técnica de slicing e selecionados com base na morfologia. O experimento continha dois grupos: Grupo-1 (não maturados), avaliados logo após a colheita, e Grupo-2 (maturados in vitro), avaliados após a maturação de 24 horas em incubadora de CO2, na qual 25 oócitos foram colocados por gota em meio básico de maturação (MBM). Após a coleta dos oócitos do G-1 e G-2, foi determinada a qualidade, por meio dos testes de atividade das enzimas caspases e o de fragmentação de DNA (TUNEL), com reagente PhiPhiLux-G1D2, sendo que no grupo G-2 a qualidade só foi determinada após maturação nuclear. Avaliou-se durante os estádios de maturação nuclear as fases de vesícula germinativa, rompimento da vesícula germinativa, metáfase I e II, não havendo diferença significativa (P > 0,05). Também não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) na atividade das enzimas caspases e na fragmentação do DNA dos oócitos não maturados e maturados in vitro. Com base nos
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This study had the objective to distinguish spermatic and seminal parameters in animals born during the dry (n=11) and rainy (n=11) seasons. In the rainy season, the spermatic concentration ranging from 0.90 to 2.7 x 109/mL, the progressive motility from 16.0% to 62.0%, the mass movement from 0.3 to 2.6, vigor from 1.1 to 2.8, major sperm defects of 18.3% to 3 % and minor sperm defects from 16.1% to 3.4% . In the dry season, the spermatic concentration varied from 0.96 to 2.15 x 109/mL, the progressive motility from 35.4% to 64.1%, the mass movement form 1.7 to 3.1, vigor from 2.0 to 3.0, major sperm defects from 16.9% to 4.2% and minor sperm defects from 17.5% to 3.2%. It was observed positive correlation between spermatic motility versus spermatic mass movement, spermatic motility versus spermatic vigor as well as a negative correlation between motility versus major sperm defects of the spermatozoa and between motility and spermatozoa smaller defects respectively, in the rainy and dry seasons. Based on these results we conclude that Boer male goats born in dry season have sexual retardation of three months in comparison to those born in the rainy station. Key words: Birth season, boer, goat, puberty, sperm morphology.
Este trabalho objetivou determinar motilidade, turbilhonamento, vigor, defeitos maiores e menores dos espermatozoides de caprinos da raça Boer durante a estação chuvosa (n = 11) e seca (n = 11). Na estação chuvosa, a concentração espermática variou de 0,90 ± 1,46 x 109/mL a 2,7 x 109/mL, a motilidade progressiva de 16,0% a 62,0%, o turbilhonamento de 0,3 a 2,6 , vigor de 1,1 a 2,8 , defeitos maiores de 18,3% a 3% e menores de 16,1% a 3,4%. Na estação seca, a concentração espermática variou de 0,96 x 109/mL a 2,15 x 109/mL, a motilidade progressiva de 35,4% a 64,1%, o turbilhonamento de 1,7 a 3,1, vigor de 2,0 a 3,0, defeitos maiores de 16,9% a 4,2% e menores de 17,5% a 3,2%. Foi registrada correlação positiva (P 0,05) entre motilidade espermática vs turbilhonamento espermático, respectivamente, para a estação chuvosa e seca, motilidade espermática vs vigor espermático bem como negativa entre motilidade progressiva vs defeitos maiores dos espermatozoides e entre motilidade progressiva e defeitos menores dos espermatozoides. Dessa forma, pode-se concluir que machos caprinos da raça Boer nascidos na estação seca têm atraso de três meses do início da maturidade sexual em comparação àqueles nascidos na estação chuvosa. Palavras-chaveS: Boer, caprino, época do nascimento, espermograma.
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This study had the objective to distinguish spermatic and seminal parameters in animals born during the dry (n=11) and rainy (n=11) seasons. In the rainy season, the spermatic concentration ranging from 0.90 to 2.7 x 109/mL, the progressive motility from 16.0% to 62.0%, the mass movement from 0.3 to 2.6, vigor from 1.1 to 2.8, major sperm defects of 18.3% to 3 % and minor sperm defects from 16.1% to 3.4% . In the dry season, the spermatic concentration varied from 0.96 to 2.15 x 109/mL, the progressive motility from 35.4% to 64.1%, the mass movement form 1.7 to 3.1, vigor from 2.0 to 3.0, major sperm defects from 16.9% to 4.2% and minor sperm defects from 17.5% to 3.2%. It was observed positive correlation between spermatic motility versus spermatic mass movement, spermatic motility versus spermatic vigor as well as a negative correlation between motility versus major sperm defects of the spermatozoa and between motility and spermatozoa smaller defects respectively, in the rainy and dry seasons. Based on these results we conclude that Boer male goats born in dry season have sexual retardation of three months in comparison to those born in the rainy station. Key words: Birth season, boer, goat, puberty, sperm morphology.
Este trabalho objetivou determinar motilidade, turbilhonamento, vigor, defeitos maiores e menores dos espermatozoides de caprinos da raça Boer durante a estação chuvosa (n = 11) e seca (n = 11). Na estação chuvosa, a concentração espermática variou de 0,90 ± 1,46 x 109/mL a 2,7 x 109/mL, a motilidade progressiva de 16,0% a 62,0%, o turbilhonamento de 0,3 a 2,6 , vigor de 1,1 a 2,8 , defeitos maiores de 18,3% a 3% e menores de 16,1% a 3,4%. Na estação seca, a concentração espermática variou de 0,96 x 109/mL a 2,15 x 109/mL, a motilidade progressiva de 35,4% a 64,1%, o turbilhonamento de 1,7 a 3,1, vigor de 2,0 a 3,0, defeitos maiores de 16,9% a 4,2% e menores de 17,5% a 3,2%. Foi registrada correlação positiva (P 0,05) entre motilidade espermática vs turbilhonamento espermático, respectivamente, para a estação chuvosa e seca, motilidade espermática vs vigor espermático bem como negativa entre motilidade progressiva vs defeitos maiores dos espermatozoides e entre motilidade progressiva e defeitos menores dos espermatozoides. Dessa forma, pode-se concluir que machos caprinos da raça Boer nascidos na estação seca têm atraso de três meses do início da maturidade sexual em comparação àqueles nascidos na estação chuvosa. Palavras-chaveS: Boer, caprino, época do nascimento, espermograma.
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The present study aimed to identify the sex and to determine the day of genital tubercle (GT) migration of ovine fetuses using real time ultrasonography. The sex was identified in Experiment (EI) taking into consideration the localization of GT and in Experiment II (EII) the presence of penis, prepuce and scrotal bag in male fetus and nipples, genital swelling and clitoris in female fetus. In EI, the females (n=17) were monitored with 12 hour intervals from the 35th to the 46th day of pregnancy, by transrectal via with linear transducer (6.0 and 8.0MHz). In EII, the females (n=30) with pregnancy period from 55 to 75 days were examined once only, using the same transducer and via used in EI. Among 17 females in EI, 11 (64.6%) fetuses were correctly sexed independent of single (7/11), twin (3/11) or triple (1/11) pregnancy In 6 (35.4%) pregnancies, 3 (17.7%) were twins, being impossible to sex one fetus of each pregnancy. In other 3 (17.7%) pregnancies the fetuses were correctly sexed, although the birth did not coincide with the quantification. In a male fetus of a single pregnancy, the migration of the GT began on day 37 of pregnancy and on the 46th day all the fetuses of the other pregnancies were correctly sexed. Among 30 females in EII, 16 (53.4%) pregnancies were single being sexed with accuracy of 100%. In other 14 (46.6%) remainder the pregnancies were twins, being impossible, in four cases, to be determined the sex of one of each twin. The incorrect diagnoses were fetuses sexed as females, however born as males. From the all born fetuses the total accuracy was 88.0% (EI) and 90.9% (EII), being not observed difference (P>0.05) between both experiments. The results allow to conclude that ultrasonography in real time is an efficient method to diagnose the fetal sex by visualization of GT, as well as by identification of penis, prepuce and scrotal bag in male fetus and nipples, genital swelling and clitoris in female fetus, since the scanning are performed from Day 50 of pregnancy
O presente estudo teve a finalidade de identificar o sexo e de determinar o dia da migração do tubérculo genital (TG) de fetos ovinos através da ultra-sonografia em tempo real. O sexo foi identificado no Experimento I (EI) levando-se em consideração a localização do TG e no Experimento II (EII), a presença do pênis, prepúcio e bolsa escrotal no feto macho e das tetas, vulva e clitóris no feto fêmea. No EI, as fêmeas (n=17) foram monitoradas em intervalos de 12 horas, do 35o ao 46o dia de gestação, por via transretal com transdutor linear (6,0 e 8,0 MHz). No EII, as fêmeas (n=30) com gestação de 55 a 75 dias foram examinadas apenas uma vez, utilizando-se o mesmo transdutor e via de exame do EI. Das 17 fêmeas do EI, 11 (64,6%) tiveram seus fetos corretamente sexados, independente da gestação ter sido simples (7/11), dupla (3/11) ou tríplice (1/11). Nas 6 (35,4%) gestações restantes, 3 (17,7%) foram duplas, sendo impossível sexar um feto de cada gestação. Nas outras 3 (17,7%) gestações, os fetos foram corretamente sexados, apesar dos nascimentos não coincidirem com a quantificação. Num feto macho de uma gestação simples, a migração ocorreu no 37° dia e até o 46°, todos os fetos das outras gestações estavam corretamente sexados. Das 30 fêmeas do EII, 16 (53,4%) apresentaram gestações simples e a acurácia da sexagem foi de 100%. Nas 14 (46,6%) restantes, as gestações foram duplas, sendo impossível, em quatro casos, determinar o sexo de, pelo menos, um dos gêmeos. De todos os fetos nascidos, a acurácia geral da sexagem foi de 88,0% (EI) e 90,9% (EII), não sendo observada diferença (P>0,05) entre ambos os experimentos. Os resultados permitem concluir que a ultra-sonografia em tempo real é um método eficiente para diagnosticar o sexo fetal pela visualização do TG, assim como pela identificação do pênis, prepúcio e bolsa escrotal no feto macho e das tetas, vulva e clitóris no feto fêmea, desde que os exames sejam realizados a partir do 50o dia de gestação.
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The present study aimed to identify the sex and to determine the day of genital tubercle (GT) migration of ovine fetuses using real time ultrasonography. The sex was identified in Experiment (EI) taking into consideration the localization of GT and in Experiment II (EII) the presence of penis, prepuce and scrotal bag in male fetus and nipples, genital swelling and clitoris in female fetus. In EI, the females (n=17) were monitored with 12 hour intervals from the 35th to the 46th day of pregnancy, by transrectal via with linear transducer (6.0 and 8.0MHz). In EII, the females (n=30) with pregnancy period from 55 to 75 days were examined once only, using the same transducer and via used in EI. Among 17 females in EI, 11 (64.6%) fetuses were correctly sexed independent of single (7/11), twin (3/11) or triple (1/11) pregnancy In 6 (35.4%) pregnancies, 3 (17.7%) were twins, being impossible to sex one fetus of each pregnancy. In other 3 (17.7%) pregnancies the fetuses were correctly sexed, although the birth did not coincide with the quantification. In a male fetus of a single pregnancy, the migration of the GT began on day 37 of pregnancy and on the 46th day all the fetuses of the other pregnancies were correctly sexed. Among 30 females in EII, 16 (53.4%) pregnancies were single being sexed with accuracy of 100%. In other 14 (46.6%) remainder the pregnancies were twins, being impossible, in four cases, to be determined the sex of one of each twin. The incorrect diagnoses were fetuses sexed as females, however born as males. From the all born fetuses the total accuracy was 88.0% (EI) and 90.9% (EII), being not observed difference (P>0.05) between both experiments. The results allow to conclude that ultrasonography in real time is an efficient method to diagnose the fetal sex by visualization of GT, as well as by identification of penis, prepuce and scrotal bag in male fetus and nipples, genital swelling and clitoris in female fetus, since the scanning are performed from Day 50 of pregnancy
O presente estudo teve a finalidade de identificar o sexo e de determinar o dia da migração do tubérculo genital (TG) de fetos ovinos através da ultra-sonografia em tempo real. O sexo foi identificado no Experimento I (EI) levando-se em consideração a localização do TG e no Experimento II (EII), a presença do pênis, prepúcio e bolsa escrotal no feto macho e das tetas, vulva e clitóris no feto fêmea. No EI, as fêmeas (n=17) foram monitoradas em intervalos de 12 horas, do 35o ao 46o dia de gestação, por via transretal com transdutor linear (6,0 e 8,0 MHz). No EII, as fêmeas (n=30) com gestação de 55 a 75 dias foram examinadas apenas uma vez, utilizando-se o mesmo transdutor e via de exame do EI. Das 17 fêmeas do EI, 11 (64,6%) tiveram seus fetos corretamente sexados, independente da gestação ter sido simples (7/11), dupla (3/11) ou tríplice (1/11). Nas 6 (35,4%) gestações restantes, 3 (17,7%) foram duplas, sendo impossível sexar um feto de cada gestação. Nas outras 3 (17,7%) gestações, os fetos foram corretamente sexados, apesar dos nascimentos não coincidirem com a quantificação. Num feto macho de uma gestação simples, a migração ocorreu no 37° dia e até o 46°, todos os fetos das outras gestações estavam corretamente sexados. Das 30 fêmeas do EII, 16 (53,4%) apresentaram gestações simples e a acurácia da sexagem foi de 100%. Nas 14 (46,6%) restantes, as gestações foram duplas, sendo impossível, em quatro casos, determinar o sexo de, pelo menos, um dos gêmeos. De todos os fetos nascidos, a acurácia geral da sexagem foi de 88,0% (EI) e 90,9% (EII), não sendo observada diferença (P>0,05) entre ambos os experimentos. Os resultados permitem concluir que a ultra-sonografia em tempo real é um método eficiente para diagnosticar o sexo fetal pela visualização do TG, assim como pela identificação do pênis, prepúcio e bolsa escrotal no feto macho e das tetas, vulva e clitóris no feto fêmea, desde que os exames sejam realizados a partir do 50o dia de gestação.