RESUMO
BACKGROUND: Plasma components of group O blood donations are rarely submitted to ABO antibody titrations even though it is well known that passively acquired antibodies may destroy the recipient's own red cells and tissue grafts. OBJECTIVE: Thus, group O donations stratified by gender and age were randomly titrated to identify the best source of products for apheresis and exsanguinous transfusion. METHODS: Samples from 603 blood donors were tested by ABO antibody titration using the conventional tube technique at room temperature. ABO antibody levels higher than 64 were considered high. After correction for gender, statistical analyses were performed using the Fisher exact and Kruskal-Wallis tests. RESULTS: Most donors in the blood bank were male (65.7%). ABO antibody titers ranged from 1 to 2048. The estimations of prevalence for the titers were: anti-A,B < 128 = 86.9% and = 128 = 2.16%; Anti-A = 128 = 9.29% and anti-B = 128 = 4.81%. Low mean titers for both anti-A and anti-B antibodies were found in over 50-year-old men (p-value = 0.040). High anti-B antibody levels were found in young women (p-value = 0.002). CONCLUSION: This study confirms that over 50-year-old O group men should be selected as blood donors in non-identical ABO transfusion situations. Also, titration of ABO antibodies in blood banks will increase safety in non-identical ABO transfusions.
RESUMO
BACKGROUND: Plasma components of group O blood donations are rarely submitted to ABO antibody titrations even though it is well known that passively acquired antibodies may destroy the recipient's own red cells and tissue grafts. OBJECTIVE: Thus, group O donations stratified by gender and age were randomly titrated to identify the best source of products for apheresis and exsanguinous transfusion. METHODS: Samples from 603 blood donors were tested by ABO antibody titration using the conventional tube technique at room temperature. ABO antibody levels higher than 64 were considered high. After correction for gender, statistical analyses were performed using the Fisher exact and Kruskal-Wallis tests. RESULTS: Most donors in the blood bank were male (65.7 percent). ABO antibody titers ranged from 1 to 2048. The estimations of prevalence for the titers were: anti-A,B < 128 = 86.9 percent and > 128 = 2.16 percent; Anti-A > 128 = 9.29 percent and anti-B > 128 = 4.81 percent. Low mean titers for both anti-A and anti-B antibodies were found in over 50-year-old men (p-value = 0.040). High anti-B antibody levels were found in young women (p-value = 0.002). CONCLUSION: This study confirms that over 50-year-old O group men should be selected as blood donors in non-identical ABO transfusion situations. Also, titration of ABO antibodies in blood banks will increase safety in non-identical ABO transfusions.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Doadores de Sangue , Antígenos de Grupos Sanguíneos , Plaquetas/imunologia , Transfusão de Sangue , Sistema ABO de Grupos Sanguíneos , Testes de Aglutinação/métodos , Titulometria/métodos , Carga Viral , Aglutininas , Reações Antígeno-AnticorpoRESUMO
INTRODUÇÃO: Padrões de metilação aberrante em amostras de DNA de pacientes com câncer são marcadores moleculares sensíveis. A hipermetilação na região promotora de GSTP-1 está presente em mais de 90% dos pacientes com câncer de próstata e pode ser avaliada através de técnicas de PCR. A recuperação autóloga intra-operatória durante cirurgia oncológica não tem sido recomendada devido ao risco de células tumorais estarem circulantes neste sangue. Nosso objetivo é demonstrar que o sangue recuperado de cirurgia oncológica pode estar livre de células tumorais após a utilização de filtros para remoção de leucócitos e irradiação, através da hipermetilação do promotor de GSTP-1 como marcador. MÉTODOS: Realizamos recuperação autóloga intraoperatória em prostatectomia radical sem a reinfusão do sangue. Somente os casos com hipermetilação do promotor de GSTP-1 nas amostras de tumor fresco foram incluídas. Uma amostra de sangue periférico foi colhida na indução anestésica. O sangue recuperado foi colhido ao longo da cirurgia e então submetido à lavagem; filtração e irradiação (25 Gy). As amostras foram estudadas em cada etapa para detectar a presença de células de tumor de próstata contaminantes, através de ensaios qualitativos e de real time PCR metilação específica. RESULTADOS: Detectamos células de tumor de próstata no sangue recuperado através da presença de metilação para GSTP-1 nos ensaios de PCR qualitativos. Após filtração e irradiação as análises de real time PCR confirmaram a ausência de metilação, sugerindo a ausência de células viáveis. DISCUSSÃO: Utilizando uma abordagem epigenética não evidenciamos célula tumoral viável ou DNA no sangue recuperado desses pacientes após filtração e irradiação. Esses resultados apontam para a segurança da recuperação de sangue associando filtração e irradiação em cirurgia oncológica...
INTRODUCTION: Aberrant DNA methylation patterns provide a powerful sensitive detection molecular marker to cancer. GSTP-1 hypermethylation is present in more than 90% of prostate cancer patients and can be measured by PCR-based techniques. Blood salvage during cancer surgery is limited due to the potential presence of circulating tumour cells. We aimed to show that intraoperative salvaged blood can be freed of tumour cells after leucodepletion filters and irradiation of washed blood using GSTP-1 hypermethylation as a biomarker. METHODS: We performed intraoperative blood recovery in radical prostatectomy without reinfusion. Only cases with GSTP-1 hypermethylation in the fresh tumour samples were included. A peripheral blood sample was collected during anaesthesia induction. Salvaged blood was collected throughout the surgery and then submitted to washing, leukoreduction and irradiation. Samples were studied stepwise for the presence of prostate tumour cell contamination using qualitative and realtime methylation specific PCR. RESULTS: Prostate tumour cells detected by positive results for GSTP-1 in washed salvaged blood became negative after filtration and irradiation in qualitative PCR. It was confirmed by quantitative assay, thus suggesting the absence of viable cells. DISCUSSION: Using an epigenetic approach no tumour viable cell or DNA was found in the salvaged blood of these patients after filtration and irradiation (25Gy). These results point to the safety of blood salvage with filtration and irradiation in cancer surgery (AU)
Assuntos
Humanos , Masculino , Glutationa Transferase , Biomarcadores Tumorais , Neoplasias da Próstata , Neoplasias da Próstata/diagnóstico , Neoplasias/cirurgia , Transfusão de Sangue Autóloga , Glutationa Transferase/sangue , Neoplasias da Próstata/sangueRESUMO
Introdução: O desafio da Medicina Transfusional moderna é a produção de hemocomponentes livres de agentes infecciosos e células indesejáveis contaminantes, além de desenvolver e praticar técnicas conservadoras de sangue. Neste momento, a transfusão autóloga ganha importância com o conhecimento de que algumas moléculas e células estocadas no sangue, como os leucócitos, possuem efeitos adversos no receptor da transfusão. Os pacientes oncológicos têm um grande consumo de transfusão, principalmente em cirurgia, e são impedidos de participar de programas de autotransfusão pela anemia do câncer ou pelo risco de disseminação do tumor com a utilização de recuperação autóloga intra-operatória. Entretanto, estes mesmos pacientes são submetidos a transplante autólogo de células progenitoras periféricas com o mesmo potencial de reinfusão de células tumorais. Objetivo: Estudar a qualidade do concentrado de hemácias, artificialmente adicionado de células tumorais, submetido a lavagem, leucorredução e irradiação, através de viabilidade celular e a presença de DNA genômico. Materiais e métodos: Cultura de linhagens representativas de tumores sólidos mais freqüentes: carcinoma (HeLa), melanoma (SK-MEL) e sarcoma (SaOS) foram inoculadas em 10 unidades de sangue total frescas colhidas no banco de sangue do Hospital do Câncer - São Paulo, em quantidades de 10, 102 e 106 células/ml após o teste de exclusão pelo trypan blue. Cada doação foi fracionada em 4 para receber as três diferentes quantidades de células tumorais, permanecendo um controle negativo. Submetidas seqüencialmente à lavagem com 1000 ml de solução salina, leucorredução com filtro PALL, Purecell Neo e irradiadas com 25 Gy em uma fonte de césio do Gammacell 3000. A cada etapa, amostras foram coletadas para estudo em triplicata de viabilidade celular com solução equimolar de acridine orange e iodeto de propídeo e quantificadas em câmara de Neubauer ao microscópio de imunofluorescência. As amostras também foram submetidas à purificação do DNA genômico e à reações de PCR/Multiplex visando a amplificação de um gene humano (Globina). Os produtos de DNA obtidos foram analisados através de eletroforese em gel de agarose 1% corados com brometo de etídio. Resultados: A média em porcentagem de células nucleadas viáveis, sem qualquer tratamento, analisadas em imunofluorescência foi 83%, independente do número e do tipo de células inoculadas. Após a lavagem, a média de células viáveis foi de 64% nos diferentes inóculos. As amostras submetidas à lavagem e leucorredução apresentaram ausência de células viáveis e o mesmo ocorreu nas amostras que prosseguiram até a irradiação. As análises de PCR/Multiplex confirmaram os achados de ausência de células e DNA para fragmentos de 268 pares de bases nas várias amostras submetidas a leucorredução e irradiação com 25 Gy, independente da linhagem ou da quantidade de células inoculadas. Conclusão: Através do emprego de um método de alta sensibilidade, como o PCR, verificou-se a ausência de DNA de pequeno tamanho após a leucorredução e a irradiação com 25 Gy. Dada a complexidade do assunto, a diversidade dos tumores e a ausência de estudos in vivo, esta proposta abre a perspectiva para estudos adicionais que permitam a sua aplicação na cirurgia oncológica.
Introduction: The challenge of Transfusion Medicine is to infuse high purity products without infectious agents, undesirable cells and to practice conservative techniques to save blood. The knowledge about some molecules and cells stored in blood components, like leucocytes, have effects in immune system increases the role of autologous transfusion. Oncologic patients need many transfusions and are very difficult to participate in autologous program because they are anemic patients or dissemination risk with cell saver device. Nevertheless, those same patients could be submitted to autologous peripheral stem cell collection and reinfusion with the same potential risk to return tumoral cells. Objective: To study the red blood cells quality with tumor cells mixed, submitted to washing, leucorreduction and irradiation by viability cell and genomic DNA analysis. Materials and methods: Representative cell lines of solid tumors more frequent: carcinoma (HeLa), melanoma (SK-MEL) and sarcoma (SaOS), were mixed in 10 whole fresh blood bags harvested in Hospital do Cancer blood bank, São Paulo. Each donation was shared into 4 to receive 0, 10, 102 and 106 cells/ml after trypan blue exclusion test. Submitted in sequence to saline washing, leucorreduction with PALL, Purecell Neo and 25 Gy irradiation dose with Cesium source Gammacell 3000. Each step, samples were collected for triplicate viability assays with a stock solution of acridine orange and propidium iodide, loaded into a Neubauer hemocytometer and scored with a Nikon compound fluorescence microscope. Then, genomic DNA purification and PCR/Multiplex reaction were done in all samples to amplification human gen (Globin). DNA products obtained were separated by 1% agarose gel electrophoresis stained by ethidium bromide. Results: The mean percentage of nuclear cells analyzed by fluorescence microscope was 83%, without any treatment, independent of number or type of tumor cells. After washing, 64% of viable nuclear cells were demonstrated in different numbers of tumor cell lines. Samples submitted to washing and leucorreduction revealed negative results and the same happened for those samples that continued until irradiation. PCR/Multiplex confirmed the absence of cells and 268 base pairs long DNA products when leucorreduction and irradiation were completed, in all samples. Conclusions: A high sensibility test like PCR showed absence of small size DNA after leucorreduction and 25 Gy irradiation. As a result of subject complexity, tumors diversity and absence of in vivo studies, this proposal opens an expectance for another studies to allow the application in oncology surgery