RESUMO
The implementation of Salmonella control programs in the pork production chain demands rapid and cost-effective methods to assess the prevalence of infection in pig herds. The objective of the present study was to develop an in-house enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on S. Typhimurium lipopolysaccharides (LPS) to measure the prevalence of infection caused by Salmonella in swine herds. Coating antigen was produced by phenol extraction of S. Typhimurium culture. After standardization of ELISA test conditions, the assay was validated by testing serum samples on different animal categories: pigs orally inoculated with S. Typhimurium and sentinel animals in contact with them, naturally infected animals, colostrum-deprived piglets, and bacterin-immunized pigs. Seroconversion was observed in inoculated pigs (7 days postinfection [DPI]) and in the sentinels (21 DPI). Nonspecific reactions were not detected in the sera of colostrum-deprived animals. Serum samples from animals immunized with Salmonella Agona, Salmonella Derby, Salmonella Panama, and Salmonella Bredeney bacterins showed marked cross-reaction with the LPS from the serovar Typhimurium. Moreover, positive results obtained with the in-house ELISA were associated with Salmonella isolation in 75 infected pig herds. Comparisons with 2 commercial kits showed a linear correlation coefficient of 0.847 between the in-house ELISA and kit A and 0.922 with kit B but a low agreement in the qualitative results. In conclusion, the newly developed in-house ELISA based on S. Typhimurium LPS can be a useful tool to determine the intensity of Salmonella sp. infection in swine herds.
Assuntos
Anticorpos Antibacterianos/sangue , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , Salmonelose Animal/diagnóstico , Salmonelose Animal/imunologia , Salmonella/classificação , Salmonella/imunologia , Doenças dos Suínos/diagnóstico , Animais , Brasil , Salmonelose Animal/sangue , Salmonelose Animal/microbiologia , Suínos , Doenças dos Suínos/sangue , Doenças dos Suínos/imunologia , Doenças dos Suínos/microbiologia , Fatores de TempoRESUMO
Um estudo transversal foi utilizado para identificar fatores associados à prevalência de suínos sorologicamente positivos para Salmonella nos estados de Santa Catarina e Rio Grande do Sul. Sessenta e cinco granjas foram visitadas uma semana antes do abate dos animais para aplicação de questionário e coletas de ração, água e sangue. A ração foi submetida à pesquisa de Salmonella por isolamento e PCR. Foram testados soros de aproximadamente 40 leitões de cada propriedade utilizando ELISA com antígeno do sorovar Typhimurium. Após a análise de distribuição da prevalência, as granjas foram classificadas em três categorias, baixa (até 40 por cento), média (40-70 por cento) e alta (mais de 70 por cento). Estas categorias constituíram a variável explicada e a pesquisa de Salmonella na ração, colimetria da água e as respostas do questionário, as variáveis explicativas. Inicialmente, a associação entre as variáveis explicativas e a explicada foi estudada pelo teste de c2. As variáveis associadas (P£0,1) foram submetidas à análise fatorial de correspondência múltipla, com a qual foi possível identificar a associação da maior soroprevalência com o seguinte conjunto de variáveis: nas granjas terminadoras, uso de ração peletizada, distribuição de dejetos a menos de 100m do local de captação de água, não utilização de comedouro do modelo comedouro/bebedouro, transporte com freteiro misturando animais de várias granjas; nas granjas de ciclo completo, ingredientes de ração desprotegidos de outros animais, ausência de controle de roedores, ração seca, ausência de cerca, não uso da pintura com cal após lavagem e desinfecção e a entrada de outras pessoas, além do técnico, na granja. Das 65 granjas visitadas, 98,5 por cento foram ELISA positivas com soroprevalência 57,6 por cento (intervalo de confiança entre 56-60 por cento).
Assuntos
Animais , Brasil , Prevalência , Salmonella , Suínos/microbiologiaRESUMO
A pleuropneumonia suína (PPS) provoca prejuízos significativos na suinocultura no mundo. O agente etiológico é a bactéria Actinobacillus pleuropneumoniae (App), que apresenta 15 sorotipos descritos, os quais variam consideravelmente em relação a sua patogenicidade. Nesse sentido, a precisa caracterização patotípica desta bactéria é de grande importância para a adoção de medidas de controle e profilaxia. O diagnóstico e a sorotipificação deste patógeno são realizados pelas técnicas microbiológicas convencionais. Entretanto, problemas nestes esquemas podem ser observados, especialmente em isolados de rebanhos sem histórico de PPS. No Brasil, diversos esforços vêm sendo aplicados no sentido de desenvolver técnicas moleculares que auxiliem no diagnóstico da infecção crônica ocasionada por este agente, principalmente em rebanhos presumidamente sadios e com infecção subclínica. Nesta revisão, são discutidos os resultados obtidos na caracterização de isolados de A. pleuropneumoniae e espécies relacionadas provenientes tanto de suínos com PPS, como de animais presumidamente isentos da infecção. Apresentamos, ainda, perspectivas para o desenvolvimento de metodologias que possibilitem o diagnóstico precoce e a melhor compreensão dos mecanismos de virulência deste patógeno.
RESUMO
The pleuropneumonia caused by Actinobacillus pleuropneumoniae (App) is one the most important swine respiratory diseases. Biochemical and serological tests are widely applied for App diagnosis and characterization. However, in some isolates, conflicting results are found. The present work focus on the characterization of 29 isolates biochemically classified as A. pleuropneumoniae, collected from swine in herds with or without a clinical history of pleuropneumonia. Sixteen isolates were from healthy swine, initially classified as nonserotypable A. pleuropneumoniae; they displayed differences in the molecular characterization patterns of App (genes cpx and apxI, II, and III). Those bacteria that could not be serotyped were submitted to rDNA 16S sequencing. All 29 isolates were analyzed by PCR for the presence of the apxIVA gene. Thirteen isolates (45%) were confirmed to be A. pleuropneumoniae by PCR, nine being from diseased animals (31%) and four from healthy animals (14%) with conclusive serotyping. The rDNA 16S sequencing was used to classify the other 16 isolates in related species other than A. pleuropneumoniae, resulting in eleven A. minor, three A. porcinus, and two Pasteurella sp. Because of conflicting results between biochemical tests and rDNA 16S sequencing, the biochemical characterization was repeated, and the new results were in agreement with the rDNA 16S sequencing data. Biochemical characterization proved to be efficient for the majority of the A. pleuropneumoniae isolates. Nevertheless, conventional tests can render conflicting results, and other methodologies, such as amplification of A. pleuropneumoniae specific apxIVA gene and rDNA 16S sequencing, are very useful for improved classification. We also observed a great variety in rDNA 16S sequences from different A. minor isolates.
Assuntos
Actinobacillus pleuropneumoniae/classificação , Actinobacillus pleuropneumoniae/genética , Proteínas de Bactérias/genética , Reação em Cadeia da Polimerase , Actinobacillus/classificação , Actinobacillus/genética , Actinobacillus/isolamento & purificação , Infecções por Actinobacillus/microbiologia , Infecções por Actinobacillus/veterinária , Actinobacillus pleuropneumoniae/isolamento & purificação , Animais , Técnicas de Tipagem Bacteriana , DNA Bacteriano/análise , DNA Bacteriano/química , DNA Bacteriano/isolamento & purificação , Genes Bacterianos , Genes de RNAr/genética , Proteínas Hemolisinas , Hemólise , Pasteurella/classificação , Pasteurella/genética , Pasteurella/isolamento & purificação , Filogenia , RNA Ribossômico 16S/genética , Análise de Sequência de DNA , Sorotipagem , Suínos/microbiologia , Urease/análiseRESUMO
We investigated whether primers able to specifically amplify a 0.7-kb DNA fragment from the conserved cpx genes could be applied to analyze A. pleuropneumoniae field isolates. The specific cpx primers were tested on 120 strains of A. pleuropneumoniae and other NAD-dependent field isolates from healthy and diseased animals to analyze A. pleuropneumoniae isolates from pigs in Brazil. We found that PCR and hybridization were able to discriminate between isolates of A. pleuropneumoniae and other bacteria. The 0.7-kb cpx DNA fragments were amplified from all 63 A. pleuropneumoniae isolates from herds with clinical symptoms and were isolated from lesions of acute cases of swine pleuropneumonia, both serotypable and nonserotypable. The PCR was also applied to 57 field isolates obtained from animals of apparently healthy herds, and the amplified cpx product was present in four serotypable and only two out of eleven A. pleuropneumoniae nonserotypable isolates. All nonserotypable A. pleuropneumoniae isolates revealed the apxA amplification pattern compatible with previously known serotypes. Some nonserotypable isolates might represent a population of isolates that originally were serotypable but lost the ability to react with serotype-specific antisera or might belong to novel serotypes. The PCR method applied is highly sensitive for serotypable A. pleuropneumoniae strains and for nonserotypable strains isolated from acute cases of swine pleuropneumoniae in Brazil.
Assuntos
Infecções por Actinobacillus/veterinária , Actinobacillus pleuropneumoniae/isolamento & purificação , Pleuropneumonia Contagiosa/microbiologia , Suínos/microbiologia , Infecções por Actinobacillus/diagnóstico , Infecções por Actinobacillus/microbiologia , Actinobacillus pleuropneumoniae/genética , Animais , Southern Blotting/veterinária , DNA Bacteriano/química , DNA Bacteriano/genética , Pleuropneumonia Contagiosa/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Sensibilidade e Especificidade , Análise de Sequência de DNA , Sorotipagem/veterinária , Doenças dos SuínosRESUMO
Com o objetivo de identificar a patogenicidade e resistência a antimicrobianos da cepa de E. coli BK99, foram utilizados alguns testes: aglutinaçäo em lâmina para detecçäo da fímbria F5, produçäo de STa, ensaios para hemolisinas e colicinas, patogenicidade em leitöes e antibiograma. A cepa BK99 apresentou o seguinte perfil: F1(+), F5(+), STa(+), Col V(+), Hly(-), ST(R), KA(R), NO(R), TT(R) SF(R) e foi capaz de provocar a doença clínica e morte em leitöes inoculados; também foi possível o resgate dessa cepa de fezes diarréicas e do conteúdo intestinal dos leitöes revelando, assim, alto índice de recuperaçäo de colônias portadoras da fímbria F5(+). Os resultados permitem concluir que a cepa de E. coli BK99 é produtora de fatores de virulência e reproduz experimentalmente a colibacilose suína neonatal.
Assuntos
Animais , Diarreia/veterinária , Doenças dos Suínos/virologia , Escherichia coli , Infecções por Escherichia coli/veterinária , Infecções por Escherichia coli/virologia , Suínos , VirulênciaRESUMO
In order to evaluate the pathogenicity and antimicrobial resistance pattern of BK 125 Escherichia coli strain, several tests were assessed: serotype, slide agglutination for detection of the fimbriae F18, presence of the gene Stx2e, verotoxin production, hemolytic activity, pathogenicity assessement using piglet inoculation and antimicrobial resistance to drugs. The strain BK125 showed the following profile: F18+, Stx2e+, Hly+, resistance to streptomicin, tetraciclin, sulfonamides. It produced clinical disease and death of infected piglets. Moreover, it was possible to recover the BK125 strain from diarrheic feces and from the gut contents of the piglet, with high rate of recovery of colonies expressing fimbriae F18. The present results suggest that the E. coli BK125 (O139:K82) strain could produce virulence factors and experimentally reproduce oedema disease in pigs.
Com o objetivo de identificar a patogenicidade e resistência a antimicrobianos da cepa de Escherichia coli BK125, foram utilizados os seguintes testes: sorotipagem, aglutinação em lâmina para detecção da fímbria F18, PCR para verificar a presença do gene Stx2e e teste de citoxicidade para avaliar a expressão da verotoxina, ensaio para detecção de hemolisinas, patogenicidade em leitões e antibiograma. A cepa BK125 apresentou o seguinte perfil: F18+, Stx2e+, Hly+, resistente a estreptomicina, tetraciclina, sulfonamida e foi capaz de provocar a doença clínica e morte em leitões inoculados. Também foi possível o resgate dessa cepa de fezes diarréicas e do conteúdo intestinal dos leitões revelando assim, alto índice de recuperação de colônias inoculadas. Os resultados permitem concluir que a E. coli BK125 (O139:K82) é produtora de fatores de virulência e reproduz experimentalmente a doença do edema em suínos.