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The mechanisms responsible for the imbalance between oxidants and antioxidants in sheep infected with Haemonchus contortus are not well established. This study aimed to prove the hypothesis that oxidative stress occurring during infection by H. contortus varies according to breed, and that the parasite burden correlates with hypoalbuminaemia and anaemia. Thus, after deworming and confirming the absence of infection, two different sheep breeds, Suffolk (n = 15) and Santa Ines (n = 22), were orally inoculated with a single dose of 5,000 L3 of H. contortus. The egg counts per gram of faeces (EPG), packed cell volume (PCV) and concentrations of several plasma markers of oxidative stress (lipid peroxidation, albumin, uric acid, total bilirubin, total antioxidant capacity [TAC], total oxidant concentration [TOC] and the oxidative stress index [OSI]) were quantified before (control group) and during the experimental infection (28, 34 and 42 days post-inoculation). In both breeds, TOC increased at 28 days and TAC increased at 42 days. In Suffolk sheep, there was a positive correlation of EPG with oxidant components (28 days) and a negative correlation of EPG with PCV (42 days). In Santa Ines sheep, there was a positive correlation of EPG with bilirubin (r = 0.492; p = 0.020). H. contortus infection caused oxidative stress, which varied according to the breed. Parasite burden was not associated with hypoalbuminaemia, whereas there was a negative correlation with PCV. This research provides the first evidence that the antioxidant status contributes more to the resilience to H. contortus in Santa Ines sheep compared to Suffolk sheep.

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Among the uremic toxins proven to affect the neutrophil function in humans with chronic kidney disease(CKD), guanidine compounds stand out. To achieve a clearer understanding of the mechanisms thataffect the immunity of uremic patients, the hypothesis that guanidine acetic acid (GAA) contributesto the inhibition of oxidative metabolism and an increase in neutrophil apoptosis in healthy dogswas investigated in vitro. To this end, neutrophils isolated from ten healthy dogs were incubated inpure RPMI 1640 (control) and enriched with 5 mg/L of GAA. Capillary flow cytometry was usedto quantify superoxide production in neutrophils with the probe (hydroethidine), in the presenceand absence of phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), in order to assess oxidative metabolism.Apoptotic indices were quantified using the Annexin V-PE system, with and without the inductiveeffect of camptothecin. Neutrophils isolated and incubated in a GAA-enriched medium producedsmaller amounts of superoxide (p 0.001) when activated with PMA, however, this inhibition ofoxidative metabolism occurred without significantly altering their viability or rate of apoptosis. Thus, the results show guanidine compounds contribute to immunosuppression in dogs with CKD.(AU)

Dentre as toxinas urêmicas que comprovadamente afetam a função neutrofílica na doença renalcrônica (DRC) em humanos, destacam-se os compostos guanidínicos. A fim de melhor entenderos mecanismos que afetam a imunidade de pacientes urêmicos, no presente estudo foi investigadain vitro a hipótese de que o composto guanidínico ácido guanidinicoacético (AGA) contribui parainibição do metabolismo oxidativo, aumentando a apoptose dos neutrófilos de cães saudáveis. Paratal, neutrófilos isolados de dez cães saudáveis foram incubados em meio de cultura RPMI 1640puro (controle) e enriquecido com 5 mg/L de AGA. Utilizando-se citometria de fluxo capilar paraa avaliação do metabolismo oxidativo, quantificou-se a produção de superóxido dos neutrófilosempregando-se a sonda hidroetidina, com e sem a presença do estímulo com acetato miristato deforbol (PMA). O índice apoptótico foi quantificado utilizando-se o sistema Anexina V-PE, com e semo efeito indutor da camptotecina. Os neutrófilos isolados e incubados em meio enriquecido com AGA,quando ativados com PMA, produziram uma menor quantidade de superóxido (p 0,001), porém talinibição do metabolismo oxidativo ocorreu sem alterar significativamente a viabilidade e a taxa deapoptose. Assim, os resultados evidenciam que os compostos guanidínicos podem contribuir paraimunossupressão de cães com DRC.(AU)

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Abstract Among the uremic toxins proven to affect the neutrophil function in humans with chronic kidney disease (CKD), guanidine compounds stand out. To achieve a clearer understanding of the mechanisms that affect the immunity of uremic patients, the hypothesis that guanidine acetic acid (GAA) contributes to the inhibition of oxidative metabolism and an increase in neutrophil apoptosis in healthy dogs was investigated in vitro. To this end, neutrophils isolated from ten healthy dogs were incubated in pure RPMI 1640 (control) and enriched with 5 mg/L of GAA. Capillary flow cytometry was used to quantify superoxide production in neutrophils with the probe (hydroethidine), in the presence and absence of phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), in order to assess oxidative metabolism. Apoptotic indices were quantified using the Annexin V-PE system, with and without the inductive effect of camptothecin. Neutrophils isolated and incubated in a GAA-enriched medium produced smaller amounts of superoxide (p 0.001) when activated with PMA, however, this inhibition of oxidative metabolism occurred without significantly altering their viability or rate of apoptosis. Thus, the results show guanidine compounds contribute to immunosuppression in dogs with CKD.

Resumo Dentre as toxinas urêmicas que comprovadamente afetam a função neutrofílica na doença renal crônica (DRC) em humanos, destacam-se os compostos guanidínicos. A fim de melhor entender os mecanismos que afetam a imunidade de pacientes urêmicos, no presente estudo foi investigada in vitro a hipótese de que o composto guanidínico ácido guanidinicoacético (AGA) contribui para inibição do metabolismo oxidativo, aumentando a apoptose dos neutrófilos de cães saudáveis. Para tal, neutrófilos isolados de dez cães saudáveis foram incubados em meio de cultura RPMI 1640 puro (controle) e enriquecido com 5 mg/L de AGA. Utilizando-se citometria de fluxo capilar para a avaliação do metabolismo oxidativo, quantificou-se a produção de superóxido dos neutrófilos empregando-se a sonda hidroetidina, com e sem a presença do estímulo com acetato miristato de forbol (PMA). O índice apoptótico foi quantificado utilizando-se o sistema Anexina V-PE, com e sem o efeito indutor da camptotecina. Os neutrófilos isolados e incubados em meio enriquecido com AGA, quando ativados com PMA, produziram uma menor quantidade de superóxido (p 0,001), porém tal inibição do metabolismo oxidativo ocorreu sem alterar significativamente a viabilidade e a taxa de apoptose. Assim, os resultados evidenciam que os compostos guanidínicos podem contribuir para imunossupressão de cães com DRC.

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Among the uremic toxins proven to affect the neutrophil function in humans with chronic kidney disease(CKD), guanidine compounds stand out. To achieve a clearer understanding of the mechanisms thataffect the immunity of uremic patients, the hypothesis that guanidine acetic acid (GAA) contributesto the inhibition of oxidative metabolism and an increase in neutrophil apoptosis in healthy dogswas investigated in vitro. To this end, neutrophils isolated from ten healthy dogs were incubated inpure RPMI 1640 (control) and enriched with 5 mg/L of GAA. Capillary flow cytometry was usedto quantify superoxide production in neutrophils with the probe (hydroethidine), in the presenceand absence of phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), in order to assess oxidative metabolism.Apoptotic indices were quantified using the Annexin V-PE system, with and without the inductiveeffect of camptothecin. Neutrophils isolated and incubated in a GAA-enriched medium producedsmaller amounts of superoxide (p 0.001) when activated with PMA, however, this inhibition ofoxidative metabolism occurred without significantly altering their viability or rate of apoptosis. Thus, the results show guanidine compounds contribute to immunosuppression in dogs with CKD.

Dentre as toxinas urêmicas que comprovadamente afetam a função neutrofílica na doença renalcrônica (DRC) em humanos, destacam-se os compostos guanidínicos. A fim de melhor entenderos mecanismos que afetam a imunidade de pacientes urêmicos, no presente estudo foi investigadain vitro a hipótese de que o composto guanidínico ácido guanidinicoacético (AGA) contribui parainibição do metabolismo oxidativo, aumentando a apoptose dos neutrófilos de cães saudáveis. Paratal, neutrófilos isolados de dez cães saudáveis foram incubados em meio de cultura RPMI 1640puro (controle) e enriquecido com 5 mg/L de AGA. Utilizando-se citometria de fluxo capilar paraa avaliação do metabolismo oxidativo, quantificou-se a produção de superóxido dos neutrófilosempregando-se a sonda hidroetidina, com e sem a presença do estímulo com acetato miristato deforbol (PMA). O índice apoptótico foi quantificado utilizando-se o sistema Anexina V-PE, com e semo efeito indutor da camptotecina. Os neutrófilos isolados e incubados em meio enriquecido com AGA,quando ativados com PMA, produziram uma menor quantidade de superóxido (p 0,001), porém talinibição do metabolismo oxidativo ocorreu sem alterar significativamente a viabilidade e a taxa deapoptose. Assim, os resultados evidenciam que os compostos guanidínicos podem contribuir paraimunossupressão de cães com DRC.

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