RESUMO
Bovine anaplasmosis, caused by the tick-borne rickettsia Anaplasma marginale, is endemic in tropical and subtropical regions of the world and results in economic losses in the cattle industry. Major surface proteins (MSPs) have been used as markers for the genetic characterization of A. marginale strains and demonstrate that many isolates may occur in a given geographic area. However, in Brazil, little is known about the genetic diversity of A. marginale isolates within individual herds. This study was designed to examine the genetic variation among A. marginale infecting calves in a farm in the south of Minas Gerais State, Brazil. Blood samples collected from 100 calves were used to prepare Giemsastained smears that were microscopically examined for the presence of A. marginale. From each blood sample, DNA was extracted and analyzed by a polymerase chain reaction (PCR), followed by sequencing to determine diversity among the isolates. Examination of blood smears showed that 48% of the calves were infected with A. marginale, while the real-time PCR detected 70.2% positivity. Congenital infections were found in four calves. The microsatellite and tandem repeat analyses showed high genetic diversity among the isolates.
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Anaplasma marginale/genética , Anaplasma marginale/isolamento & purificação , Bovinos/microbiologia , Variação Genética , Animais , Brasil , DNA Bacteriano/análiseRESUMO
Recently, we reported the in vitro isolation and the molecular characterization of a new species of Ehrlichia (Ehrlichia mineirensis) from haemolymph of Brazilian Rhipicephalus (Boophilus) microplus ticks. This organism shows an ortholog of Ehrlichia canis major immunogenic protein gp36 with a new structure of tandem repeats. In the present study, we used electron microscopy (high pressure freezing and freeze substitution preparative techniques) to characterize morphologically this new agent growing in IDE8 tick cells. The results showed that E. mineirensis shares ultrastructural features with other members of the genus Ehrlichia (Ehrlichia muris, E. canis and Ehrlichia chaffeensis); typical parasitophorous vacuoles (morulae) contain electron-dense and reticulated Ehrlichiae embedded inside a fibrillar matrix. We observed the characteristic Gram-negative-type cell wall composed of both cytoplasmic and rippled outer membrane. We found organisms undergoing binary fission and rarely altered cells with unusual invagination of the cytoplasmic membrane.
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Ehrlichia/classificação , Ehrlichia/ultraestrutura , Animais , Brasil , Células Cultivadas , Ehrlichiose/microbiologia , Microscopia Eletrônica de Transmissão , Especificidade da Espécie , Carrapatos/microbiologiaRESUMO
Bovine anaplasmosis, caused by the tick-borne rickettsiaAnaplasma marginale, is endemic in tropical and subtropical regions of the world and results in economic losses in the cattle industry. Major surface proteins (MSPs) have been used as markers for the genetic characterization of A. marginale strains and demonstrate that many isolates may occur in a given geographic area. However, in Brazil, little is known about the genetic diversity of A. marginale isolates within individual herds. This study was designed to examine the genetic variation among A. marginale infecting calves in a farm in the south of Minas Gerais State, Brazil. Blood samples collected from 100 calves were used to prepare Giemsastained smears that were microscopically examined for the presence of A. marginale. From each blood sample, DNA was extracted and analyzed by a polymerase chain reaction (PCR), followed by sequencing to determine diversity among the isolates. Examination of blood smears showed that 48% of the calves were infected with A. marginale, while the real-time PCR detected 70.2% positivity. Congenital infections were found in four calves. The microsatellite and tandem repeat analyses showed high genetic diversity among the isolates.
A anaplasmose bovina, causada pela rickettsia Anaplasma marginale e transmitida por carrapatos, é endêmica em regiões tropicais e subtropicais no mundo e causa grandes perdas econômicas na indústria de bovinos. Proteínas principais de superfície (MSPs) foram usados como marcadores para a caracterização genética de amostras de A. marginale, demonstrando que diferentes isolados podem ocorrer numa certa região geográfica. Porém, no Brasil pouco se sabe sobre a variedade genética de isolados de A. marginale em rebanhos individuais. Este estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de variação genética entre bezerros infectados com A. marginale numa fazenda do sul de Minas Gerais, Brasil. Amostras de sangue coletadas de 100 bezerros foram utilizadas para o preparo de esfregaços sanguíneos, corados pelo Giemsa, para detecção da infecção por A. marginale. Amostras de DNA extraídas de cada amostra foram analisadas através de PCR seguido de sequenciamento. O exame dos esfregaços demonstrou que 48% dos bezerros estavam infectados com A. marginale, enquanto que o PCR detectou 70,2% de positividade. Infecção congênita foi detectada em quatro bezerros. As análises de microsatélites e 'tandem repeats' comprovaram uma grande diversidade genética entre os isolados.
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Animais , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Anaplasma marginale/genética , Anaplasma marginale/isolamento & purificação , Bovinos/microbiologia , Variação Genética , Brasil , DNA Bacteriano/análiseRESUMO
The present study examined occurrences of ectoparasites and identified them on dogs in rural regions in Brazil, and assessed the influence of climate on these parasites. Ectoparasites were randomly collected from 194 dogs living on farms located in Lavras (n = 92) and Nanuque (n = 102) during the dry season. During the subsequent rainy season, the same dogs in Lavras (n = 71) and Nanuque (n = 66) were resampled. During the experiment, fleas, ticks, lice and fly larvae were collected. The flea species Ctenocephalides felis was the most common ectoparasite collected from these dogs. The main tick species that infested the dogs in rural areas of Nanuque and Lavras was Amblyomma cajennense. In Lavras, the dogs had high levels of flea infestation (80.4 and 88.7% in the dry and rainy seasons, respectively) and low levels of tick infestation (19.6 and 28.2% in the dry and rainy seasons, respectively), without any significant differences in infestation rates between the seasons. In Nanuque, moderate levels of flea infestation (68.6 and 43.9% in the dry and rainy seasons, respectively) and A. cajennense (65.7 and 47.0% in the dry and rainy seasons, respectively) were observed, with significantly lower prevalence in the rainy season (p < 0.05). The presence of ectoparasites was evident at both times of the year, but the different temperatures may have influenced the occurrences of parasites in Lavras and Nanuque.
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Doenças do Cão/epidemiologia , Doenças do Cão/parasitologia , Ectoparasitoses/veterinária , Animais , Brasil/epidemiologia , Cães , Ectoparasitoses/epidemiologia , Saúde da População Rural , Estações do AnoRESUMO
The present study examined occurrences of ectoparasites and identified them on dogs in rural regions in Brazil, and assessed the influence of climate on these parasites. Ectoparasites were randomly collected from 194 dogs living on farms located in Lavras (n = 92) and Nanuque (n = 102) during the dry season. During the subsequent rainy season, the same dogs in Lavras (n = 71) and Nanuque (n = 66) were resampled. During the experiment, fleas, ticks, lice and fly larvae were collected. The flea species Ctenocephalides felis was the most common ectoparasite collected from these dogs. The main tick species that infested the dogs in rural areas of Nanuque and Lavras was Amblyomma cajennense. In Lavras, the dogs had high levels of flea infestation (80.4 and 88.7% in the dry and rainy seasons, respectively) and low levels of tick infestation (19.6 and 28.2% in the dry and rainy seasons, respectively), without any significant differences in infestation rates between the seasons. In Nanuque, moderate levels of flea infestation (68.6 and 43.9% in the dry and rainy seasons, respectively) and A. cajennense (65.7 and 47.0% in the dry and rainy seasons, respectively) were observed, with significantly lower prevalence in the rainy season (p < 0.05). The presence of ectoparasites was evident at both times of the year, but the different temperatures may have influenced the occurrences of parasites in Lavras and Nanuque.
O presente estudo examinou a ocorrência e identificação de ectoparasitas em cães de áreas rurais no Brasil, e a influência do clima sobre esses parasitas. Ectoparasitas foram aleatoriamente coletados de 194 cães provenientes de fazendas localizadas em Lavras (n = 92) e Nanuque (n = 102) durante o período seco. No período chuvoso subsequente, os mesmos cães de Lavras (n = 71) e Nanuque (n = 66) foram re-amostrados. Durante o experimento, pulgas, carrapatos, piolhos e larvas de diptera foram coletados. A espécie de pulga Ctenocephalides felis foi o ectoparasita mais comumente encontrado desses cães. A principal espécie de carrapato que infestava os cães nas áreas rurais de Nanuque e Lavras foi Amblyomma cajennense. Em Lavras, os cães tinham altos níveis de infestação de pulgas (80,4 e 88,7% nas estações seca e chuvosa, respectivamente) e baixos níveis de infestação por carrapatos (19,6 e 28,2% nas estações seca e chuvosa, respectivamente), não sendo observada diferença significativa nas taxas de infestação entre as estações. Em Nanuque, níveis moderados de infestação por pulgas (68,6 e 43,9% nas estações seca e chuvosa, respectivamente) e A. cajennense (65,7 e 47,0% na estação seca e chuvosa, respectivamente) foram observadas, com prevalência significativamente menor na estação chuvosa (p < 0,05). A presença de ectoparasitas foi evidente em ambas as épocas do ano, mas as diferentes temperaturas poderiam ter influenciado a ocorrência de parasitas em Lavras e Nanuque.
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Animais , Cães , Doenças do Cão/epidemiologia , Doenças do Cão/parasitologia , Ectoparasitoses/veterinária , Brasil/epidemiologia , Ectoparasitoses/epidemiologia , Saúde da População Rural , Estações do AnoRESUMO
The present study examined occurrences of ectoparasites and identified them on dogs in rural regions in Brazil, and assessed the influence of climate on these parasites. Ectoparasites were randomly collected from 194 dogs living on farms located in Lavras (n = 92) and Nanuque (n = 102) during the dry season. During the subsequent rainy season, the same dogs in Lavras (n = 71) and Nanuque (n = 66) were resampled. During the experiment, fleas, ticks, lice and fly larvae were collected. The flea species Ctenocephalides felis was the most common ectoparasite collected from these dogs. The main tick species that infested the dogs in rural areas of Nanuque and Lavras was Amblyomma cajennense. In Lavras, the dogs had high levels of flea infestation (80.4 and 88.7% in the dry and rainy seasons, respectively) and low levels of tick infestation (19.6 and 28.2% in the dry and rainy seasons, respectively), without any significant differences in infestation rates between the seasons. In Nanuque, moderate levels of flea infestation (68.6 and 43.9% in the dry and rainy seasons, respectively) and A. cajennense (65.7 and 47.0% in the dry and rainy seasons, respectively) were observed, with significantly lower prevalence in the rainy season (p < 0.05). The presence of ectoparasites was evident at both times of the year, but the different temperatures may have influenced the occurrences of parasites in Lavras and Nanuque.(AU)
O presente estudo examinou a ocorrência e identificação de ectoparasitas em cães de áreas rurais no Brasil, e a influência do clima sobre esses parasitas. Ectoparasitas foram aleatoriamente coletados de 194 cães provenientes de fazendas localizadas em Lavras (n = 92) e Nanuque (n = 102) durante o período seco. No período chuvoso subsequente, os mesmos cães de Lavras (n = 71) e Nanuque (n = 66) foram re-amostrados. Durante o experimento, pulgas, carrapatos, piolhos e larvas de diptera foram coletados. A espécie de pulga Ctenocephalides felis foi o ectoparasita mais comumente encontrado desses cães. A principal espécie de carrapato que infestava os cães nas áreas rurais de Nanuque e Lavras foi Amblyomma cajennense. Em Lavras, os cães tinham altos níveis de infestação de pulgas (80,4 e 88,7% nas estações seca e chuvosa, respectivamente) e baixos níveis de infestação por carrapatos (19,6 e 28,2% nas estações seca e chuvosa, respectivamente), não sendo observada diferença significativa nas taxas de infestação entre as estações. Em Nanuque, níveis moderados de infestação por pulgas (68,6 e 43,9% nas estações seca e chuvosa, respectivamente) e A. cajennense (65,7 e 47,0% na estação seca e chuvosa, respectivamente) foram observadas, com prevalência significativamente menor na estação chuvosa (p < 0,05). A presença de ectoparasitas foi evidente em ambas as épocas do ano, mas as diferentes temperaturas poderiam ter influenciado a ocorrência de parasitas em Lavras e Nanuque.(AU)
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Animais , Cães , Doenças do Cão/epidemiologia , Doenças do Cão/parasitologia , Ectoparasitoses/veterinária , Brasil/epidemiologia , Ectoparasitoses/epidemiologia , Saúde da População Rural , Estações do AnoRESUMO
Continuous cell lines have been established from several ixodid and argasid tick species, representing an excellent tool suitable for the isolation of pathogens and their subsequent propagation, which in turn allows the production of antigenic material for diagnostic tests, antibody and vaccine production, and also for studies on host-vector-pathogen relationships. This paper reviews the use of tick cells for culture initiation and maintenance of two obligate intracellular bacterial pathogens, Anaplasma marginale and Anaplasma phagocytophilum. These in vitro cultivation systems have been used in a wide range of studies, covering morphological ultrastructural analysis, genetics, proteomics and biological differences between strains, including genome transcriptional and protein expression approaches, enabling comparisons between host and vector cells. Thus, such systems open a new window for a better understanding of interactions between pathogens and tick cells. Last but not least, such systems contribute to the reduction in usage of animals for experimental research, as antigenic material can be produced in reasonably large quantities without the use of in vivo species-specific systems.
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Anaplasma marginale/crescimento & desenvolvimento , Anaplasma phagocytophilum/crescimento & desenvolvimento , Animais , Técnicas Bacteriológicas/métodos , Linhagem Celular , Carrapatos/citologiaRESUMO
Continuous cell lines have been established from several ixodid and argasid tick species, representing an excellent tool suitable for the isolation of pathogens and their subsequent propagation, which in turn allows the production of antigenic material for diagnostic tests, antibody and vaccine production, and also for studies on host-vector-pathogen relationships. This paper reviews the use of tick cells for culture initiation and maintenance of two obligate intracellular bacterial pathogens, Anaplasma marginale and Anaplasma phagocytophilum. These in vitro cultivation systems have been used in a wide range of studies, covering morphological ultrastructural analysis, genetics, proteomics and biological differences between strains, including genome transcriptional and protein expression approaches, enabling comparisons between host and vector cells. Thus, such systems open a new window for a better understanding of interactions between pathogens and tick cells. Last but not least, such systems contribute to the reduction in usage of animals for experimental research, as antigenic material can be produced in reasonably large quantities without the use of in vivo species-specific systems.
Linhagens contínuas de células já foram estabelecidas a partir de várias espécies de carrapatos ixodídeos e argasídeos e representam uma ferramenta excelente para o isolamento e propagação de patógenos, permitindo a produção de material antigênico para testes diagnósticos, produção de anticorpos e vacinas, e também para estudos das relações entre hospedeiro-vetor-patógenos. Este artigo revisa o uso de células de carrapatos para estabelecimento e manutenção in vitro de dois patógenos intracelulares, Anaplasma marginale e Anaplasma phagocytophilum. Estes sistemas de cultivo in vitro, têm sido utilizados em vários estudos, tais como análises morfológicas, genéticas, proteômicas e estudos diferenciais entre isolados, incluindo genômica transcricional e expressões proteicas, permitindo comparações entre células dos hospedeiros e dos vetores. Tais sistemas constituem, portanto, uma nova abordagem para melhor entendimento das relações entre patógenos e células de carrapatos. Além disso, tais sistemas contribuem para a redução do uso de animais de experimentação, uma vez que permitem a produção de grandes quantidades de material antigênico sem o uso de sistemas espécie-específicos in vivo.
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Animais , Anaplasma marginale/crescimento & desenvolvimento , Anaplasma phagocytophilum/crescimento & desenvolvimento , Técnicas Bacteriológicas/métodos , Linhagem Celular , Carrapatos/citologiaRESUMO
Continuous cell lines have been established from several ixodid and argasid tick species, representing an excellent tool suitable for the isolation of pathogens and their subsequent propagation, which in turn allows the production of antigenic material for diagnostic tests, antibody and vaccine production, and also for studies on host-vector-pathogen relationships. This paper reviews the use of tick cells for culture initiation and maintenance of two obligate intracellular bacterial pathogens, Anaplasma marginale and Anaplasma phagocytophilum. These in vitro cultivation systems have been used in a wide range of studies, covering morphological ultrastructural analysis, genetics, proteomics and biological differences between strains, including genome transcriptional and protein expression approaches, enabling comparisons between host and vector cells. Thus, such systems open a new window for a better understanding of interactions between pathogens and tick cells. Last but not least, such systems contribute to the reduction in usage of animals for experimental research, as antigenic material can be produced in reasonably large quantities without the use of in vivo species-specific systems.(AU)
Linhagens contínuas de células já foram estabelecidas a partir de várias espécies de carrapatos ixodídeos e argasídeos e representam uma ferramenta excelente para o isolamento e propagação de patógenos, permitindo a produção de material antigênico para testes diagnósticos, produção de anticorpos e vacinas, e também para estudos das relações entre hospedeiro-vetor-patógenos. Este artigo revisa o uso de células de carrapatos para estabelecimento e manutenção in vitro de dois patógenos intracelulares, Anaplasma marginale e Anaplasma phagocytophilum. Estes sistemas de cultivo in vitro, têm sido utilizados em vários estudos, tais como análises morfológicas, genéticas, proteômicas e estudos diferenciais entre isolados, incluindo genômica transcricional e expressões proteicas, permitindo comparações entre células dos hospedeiros e dos vetores. Tais sistemas constituem, portanto, uma nova abordagem para melhor entendimento das relações entre patógenos e células de carrapatos. Além disso, tais sistemas contribuem para a redução do uso de animais de experimentação, uma vez que permitem a produção de grandes quantidades de material antigênico sem o uso de sistemas espécie-específicos in vivo.(AU)
Assuntos
Animais , Anaplasma marginale/crescimento & desenvolvimento , Anaplasma phagocytophilum/crescimento & desenvolvimento , /métodos , Linhagem Celular , Carrapatos/citologiaRESUMO
Ehrlichia canis has a worldwide geographic distribution, occurring particularly in tropical and subtropical areas. In Brazil, the main vector in urban areas is believed to be the brown dog tick Rhipicephalus sanguineus, but little is known about the occurrence, transmission and other epidemiological aspects of canine ehrlichiosis in rural areas, where Amblyomma ticks are found more frequently than R. sanguineus. A sero-prevalence study of canine ehrlichiosis was carried out in three distinct rural regions of the State of Minas Gerais, Brazil. Serum samples were collected from 226 dogs living on farms in Lavras (n=85), Belo Horizonte (n=45), and Nanuque (n=96) and were analyzed by an indirect fluorescent antibody test for the detection of anti-Ehrlichia canis antibodies. Age, breed, sex, presence of ticks and packed cell volume were also recorded. There were 65.6% positive dogs in Nanuque, 37.8% in Belo Horizonte, and 24.7% in Lavras. Animals living in Nanuque were 4.6 times more likely to be serologically positive than dogs living in the other two regions and antibody titres were considerable higher in this area. Male dogs, dogs >5 years of age, those infested with ticks, and mongrels all showed higher rates of positivity. The results point to the importance of canine ehrlichiosis in rural areas and indicate the need for further studies on natural transmission and maintenance of the disease.
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Doenças do Cão/epidemiologia , Ehrlichiose/veterinária , Animais , Brasil , Doenças do Cão/diagnóstico , Cães , Ehrlichiose/diagnóstico , Ehrlichiose/epidemiologia , Risco , Estudos SoroepidemiológicosRESUMO
The present work describes the detection and first molecular characterization of Babesia vogeli in dogs, naturally infected in Brazil and even in South America. Microscopic examination of Giemsa-stained peripheral blood smears collected from dogs originating from four different locations in Brazil revealed the presence of large Babesia merozoites and trophozoites (>2.5 microm). DNA was extracted from infected blood samples and PCR amplifications of the 18S rDNA were carried out. As a reference, DNA from an isolate of B. vogeli originated from Egypt was used. PCR products were purified and sequenced. The DNA sequences demonstrated 100% identity among the Brazilian isolates. Comparisons with the 18S rDNA sequence of the B. vogeli isolate from Egypt and with other B. vogeli sequences from Spain, France, Japan, Australia and South Africa confirmed the affiliation of all Brazilian isolates to the species B. vogeli.
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Babesia/genética , Babesia/isolamento & purificação , Babesiose/veterinária , Doenças do Cão/parasitologia , Animais , Babesiose/sangue , Babesiose/parasitologia , Sequência de Bases , Brasil , DNA de Protozoário/química , DNA de Protozoário/genética , Doenças do Cão/sangue , Cães , Dados de Sequência Molecular , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Polimorfismo Genético , RNA Ribossômico 18S/química , RNA Ribossômico 18S/genética , Alinhamento de Sequência , Análise de Sequência de DNARESUMO
The present work describes a retrospective study of clinical cases of babesiosis in dogs examined at the Veterinary Hospital (Universidade Federal de Minas Gerais) from March 1998 to September 2001. From the clinical records of dogs with laboratory-confirmed Babesia canis infections, we analyzed: demography (age, breed, sex, time of year, and origin; clinical manifestations (concomitant infections, body temperature, presence of ticks, and clinical signs); and hematological alterations. From 194 records from animals with suspicious cases of hemoparasites, 145 were confirmed to be infected and among those 61 dogs (42%) were infected with B. canis. The results point to the importance of canine babesiosis in Brazil.
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Babesiose/patologia , Babesiose/veterinária , Doenças do Cão/microbiologia , Doenças do Cão/patologia , Dor Abdominal/etiologia , Animais , Brasil , Desidratação/etiologia , Cães , Feminino , Febre/etiologia , Masculino , Estudos Retrospectivos , Doenças Transmitidas por Carrapatos , Redução de PesoRESUMO
Com o objetivo de se avaliar a eficácia de algumas medidas de controle da coccidiose de coelhos domésticos, 14 fêmeas adultas foram inoculadas com Eimeria (E. flavescens, E. media, E. magna, E. coecicola) e dividas em três grupos submetidos aos seguintes tratamentos: Grupo I - com quatro fêmeas recebendo sulfaquinoxalina administrada na água durante 20 dias antes do parto; Grupo II - com quatro fêmeas foi feita desinfecçäo física (lança-chamas) a cada 15 dias nas gaiolas e nos ninhos dois a três dias antes do parto; Grupo III - seis fêmeas como controle, que näo receberam nenhum tratamento. Os animais foram mantidos em gaiolas individuais, de arame galvanizado, com comedouros automáticos e bebedouros tipo chupeta. Na avaliaçäo foi considerado o nível de infecçäo por Eimeria, através da contagem de oocistos por grama de fezes (oopg) nas matrizes e suas ninhadas, em intervalos de 15 dias e pesagens das ninhadas ao nascimento, à desmama e ao abate. Os Grupos I e II (matrizes e filhotes) apresentaram níveis de infecçäo menores que o Grupo III, sendo que nas ninhadas diferença significativa (P < 0,05). O peso médio ao abate das ninhadas foi, respectivamente: Grupo I, 2.080 g; Grupo II, 1.915 g e Grupo III, 1.867 g, sendo que o Grupo I apresentou diferença significativa em relaçäo ao Grupo III (P< 0,05). Concluiu-se que a adoçäo das medidas avaliadas reduz a infecçäo por Eimeria nas matrizes e, consequentemente, nas suas ninhadas e que o uso de sulfaquinoxalina antes do parto foi o mais eficaz tanto na reduçäo da infecçäo como no aumento do ganho de peso