RESUMO
Wheat comprises one of the main ingredients in human diet, accounting for approximately 20 % of daily calories. Concerning the predominant frequency of deoxynivalenol (DON) producing Fusarium graminearum in wheat, DON occurrence in the State of Paraná (21 samples) and Rio Grande do Sul (15 samples), as well as the risk assessment of daily intake of DON in Londrina-PR, Brazil were evaluated. DON was detected in 72.2 % samples by high performance liquid chromatography (HPLC), which ranged from non-detectable to 1,592.21 ?g/kg, with average of 321.59 ?g/kg (limit of quantification= 87.75 ?g/kg). In order to calculate the estimated daily intake (EDI) of DON, a Food Frequency Questionnaire was applied to 260 persons (64.8 % female and 35.2 % male, from 8 to 76 years-old). The main food ingested were pasta (151 g/week) and bread (267 g/week), and based in these items, the average estimated daily intake (EDI) of DON was 0.308 ?g/kg body weight/day. This EDI was lower than Provisional Tolerable Daily Maximum Intake (PTDMI) settled in 1 ?g/kg b.w./day, although two persons showed estimated DON ingestion above PTDMI. The data ratify the importance of continuous monitoring and risk assessment targeted on DON exposure.
O trigo é um dos alimentos mais consumidos na dieta humana, contribuindo com cerca de 20 % das calorias diárias. Considerando a predominância de Fusarium graminearum neste grão, a contaminação por desoxinivalenol (DON) foi avaliada em trigo dos Estados do Paraná (21 amostras) e do Rio Grande do Sul (15 amostras), assim como se estimou o risco da sua ingestão diária no município de Londrina-PR, Brasil. Utilizando Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), DON foi detectado em 72,2 % das amostras, variando de não detectável a 1592,21 ?g/kg, nível médio 321,59 ?g/kg (limite de quantificação= 87,75 ?g/kg). Para calcular a Ingestão Diária Estimada (IDE) de DON foi aplicado Questionário de Freqüência de Consumo de Alimentos a 260 indivíduos (8-76 anos, 64,8 % do gênero feminino e 35,2 % do masculino). Os derivados mais consumidos foram massas alimentícias (151 g/semana) e pão francês (267 g/semana). Baseado nesses alimentos, a IDE média de DON foi de 0,308 ?g/kg peso corporal/dia, sendo que dois indivíduos (0,8 %) apresentaram IDE superior a Ingestão Diária Máxima Tolerável Provisória (IDMTP) recomendada de 1 ?g/kg p.c./dia. A importância de contínuo monitoramento perante perigo de exposição a DON é evidente, sendo que os níveis máximos em trigo no Brasil foram recentemente publicados pela ANVISA.
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Aflatoxin B1 (AFB1) is a mycotoxin classified as group 1 (human carcinogen) by International Agency for Research on Cancer - IARC, causing hazardous contamination in a wide variety of food and feed, where the monitoring depends on precision and accuracy of analytical method. The culture of AFB1 specific monoclonal antibody (mAb) secreting hybridoma was performed for further development of immunochemical methods. The growth of hybridoma AF2 was carried out in RPMI medium + 15 % fetal bovine serum (FBS), as well as the same medium gradually amended with H-SFM medium (25, 50, 75 and 100 % H-SFM). The protein concentration in the culture supernatant ranged from 1.80 to 10.88 mg/mL. The culture amended with FBS-free synthetic H-SFM medium reached production of reagent with higher degree of purity and lower risk, in addition to lower protein content (2.29 mg/mL reached with 100 % H-SFM), which approaches the real content of pure mAb. The indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) showed anti-AFB1 activity and IgG corresponding bands, respectively, indicating feasible application of mAb produced in 100, 75 and 50 % H-SFM for further use in the development of AFB1 detecting biotools. This mAb production can be an initial step that can supply the self-sufficient immune-reagent in the rapid diagnosis at national
Aflatoxina B1 (AFB1) é uma micotoxina classificada pela International Agency for Research on Cancer - IARC no Grupo 1 (carcinógeno ao humano), responsável pelo perigo de contaminação em ampla variedade de alimento e ração, cujo monitoramento depende de metodologia analítica precisa e exata. O trabalho visou cultivo do hibridoma secretor de anticorpo monoclonal (AcM) específico para AFB1 visando desenvolvimento de métodos imunoquímicos. Hibridoma AF2 foi cultivado em meio RPMI + 15 % de soro fetal bovino (SFB), assim como o mesmo meio com adição gradual de meio H-SFM (25, 50, 75 e 100 % H-SFM). A concentração proteica obtida no sobrenadante de cultura variou de 1,80 a 10,88 mg/mL. A introdução de meio sintético H-SFM isento de SFB permitiu obtenção de reagente com maior pureza e menor perigo, já que cultivos com maior proporção de H-SFM apresentou menor teor proteico (2,29 mg/mL em 100 % de H-SFM), sendo este provavelmente próximo ao teor real de AcM puro. O ensaio imunoenzimático competitivo indireto (ic-ELISA) e eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS (SDS-PAGE) demonstraram atividade antiAFB1 e bandas correspondentes ao IgG, respectivamente, indicando viabilidade da aplicação de AcM produzido em 100, 75 e 50 % H-SFM para o desenvolvimento de bioferramentas para detecção de AFB1. Esta produção de AcM abre perspectiva perante autossuficiência de reagentes essenciais no d
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Aflatoxin B1 (AFB1) is a mycotoxin classified as group 1 (human carcinogen) by International Agency for Research on Cancer - IARC, causing hazardous contamination in a wide variety of food and feed, where the monitoring depends on precision and accuracy of analytical method. The culture of AFB1 specific monoclonal antibody (mAb) secreting hybridoma was performed for further development of immunochemical methods. The growth of hybridoma AF2 was carried out in RPMI medium + 15 % fetal bovine serum (FBS), as well as the same medium gradually amended with H-SFM medium (25, 50, 75 and 100 % H-SFM). The protein concentration in the culture supernatant ranged from 1.80 to 10.88 mg/mL. The culture amended with FBS-free synthetic H-SFM medium reached production of reagent with higher degree of purity and lower risk, in addition to lower protein content (2.29 mg/mL reached with 100 % H-SFM), which approaches the real content of pure mAb. The indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) showed anti-AFB1 activity and IgG corresponding bands, respectively, indicating feasible application of mAb produced in 100, 75 and 50 % H-SFM for further use in the development of AFB1 detecting biotools. This mAb production can be an initial step that can supply the self-sufficient immune-reagent in the rapid diagnosis at national
Aflatoxina B1 (AFB1) é uma micotoxina classificada pela International Agency for Research on Cancer - IARC no Grupo 1 (carcinógeno ao humano), responsável pelo perigo de contaminação em ampla variedade de alimento e ração, cujo monitoramento depende de metodologia analítica precisa e exata. O trabalho visou cultivo do hibridoma secretor de anticorpo monoclonal (AcM) específico para AFB1 visando desenvolvimento de métodos imunoquímicos. Hibridoma AF2 foi cultivado em meio RPMI + 15 % de soro fetal bovino (SFB), assim como o mesmo meio com adição gradual de meio H-SFM (25, 50, 75 e 100 % H-SFM). A concentração proteica obtida no sobrenadante de cultura variou de 1,80 a 10,88 mg/mL. A introdução de meio sintético H-SFM isento de SFB permitiu obtenção de reagente com maior pureza e menor perigo, já que cultivos com maior proporção de H-SFM apresentou menor teor proteico (2,29 mg/mL em 100 % de H-SFM), sendo este provavelmente próximo ao teor real de AcM puro. O ensaio imunoenzimático competitivo indireto (ic-ELISA) e eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS (SDS-PAGE) demonstraram atividade antiAFB1 e bandas correspondentes ao IgG, respectivamente, indicando viabilidade da aplicação de AcM produzido em 100, 75 e 50 % H-SFM para o desenvolvimento de bioferramentas para detecção de AFB1. Esta produção de AcM abre perspectiva perante autossuficiência de reagentes essenciais no d
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Paracoccidioidomycosis, caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, is the most prevalent human systemic mycosis in Latin America. Paracoccidioidomycosis affects mainly male rural workers, causing granulomatous lesions in organs such as lungs, liver and spleen. The participation of other animal species in the fungus eco-epidemiology in not well understood. The aim of this study was to evaluate the infection by P. brasiliensis in horses from the Northern Region of Paraná State. The serum samples from 100 horses were assayed by ELISA and Immunodiffusion test, using gp43 and exoantigen as antigens, respectively. A seropositivity of 30% was observed by ELISA test, although all samples were negative by immunodiffusion test. These results suggest that horses can be indicator of fungus presence in the ambient.
A paracoccidioidomicose, causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, é a micose sistêmica de maior prevalência em humanos na América Latina. A paracoccidioidomicose afeta principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino, provocando lesões granulomatosas em órgãos como pulmões, fígado e baço. A participação de outras espécies de animais na eco-epidemiologia do fungo não é bem compreendida. Este trabalho teve como objetivo avaliar a infecção por P. brasiliensis em cavalos da Região Norte do Estado do Paraná. Foram analisadas 100 amostras de soros de cavalos por ELISA e por Imunodifusão em gel de agar, utilizando como antígenos a gp43 e o exoantígeno de P. brasiliensis, respectivamente. A soropositividade observada foi de 30% por ELISA enquanto que por imunodifusão todos os soros foram negativos. Os resultados obtidos sugerem que cavalos podem ser indicadores da presença do fungo no meio ambiente.
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Paracoccidioidomycosis, caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, is the most prevalent human systemic mycosis in Latin America. Paracoccidioidomycosis affects mainly male rural workers, causing granulomatous lesions in organs such as lungs, liver and spleen. The participation of other animal species in the fungus eco-epidemiology in not well understood. The aim of this study was to evaluate the infection by P. brasiliensis in horses from the Northern Region of Paraná State. The serum samples from 100 horses were assayed by ELISA and Immunodiffusion test, using gp43 and exoantigen as antigens, respectively. A seropositivity of 30% was observed by ELISA test, although all samples were negative by immunodiffusion test. These results suggest that horses can be indicator of fungus presence in the ambient.
A paracoccidioidomicose, causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, é a micose sistêmica de maior prevalência em humanos na América Latina. A paracoccidioidomicose afeta principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino, provocando lesões granulomatosas em órgãos como pulmões, fígado e baço. A participação de outras espécies de animais na eco-epidemiologia do fungo não é bem compreendida. Este trabalho teve como objetivo avaliar a infecção por P. brasiliensis em cavalos da Região Norte do Estado do Paraná. Foram analisadas 100 amostras de soros de cavalos por ELISA e por Imunodifusão em gel de agar, utilizando como antígenos a gp43 e o exoantígeno de P. brasiliensis, respectivamente. A soropositividade observada foi de 30% por ELISA enquanto que por imunodifusão todos os soros foram negativos. Os resultados obtidos sugerem que cavalos podem ser indicadores da presença do fungo no meio ambiente.
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The deterioration of the water quality due to aquaculture is associated with eutrophication, with bloom of cyanobacteria. Microcystis aeruginosa is distinguished as main producer of microcystins (MCs), group of hepatotoxins with tumor promoter potential. In the present work immunohistochemical method for detection of MC in tilápia (Oreochromis niloticus), fish submitted to intraperitoneal injection (i.p.) or immersion in extract of M. aeruginosa BCCBUSP 262 was developed, using monoclonal antibody anti - MC (M8H5) and polymer peroxidase system. The tilápias (N=42) had been submitted to the seven treatments, three groups inoculated i.p. with 2.0x105, 4.0x105 and 1.0x106 cells. Kg-1 of M. aeruginosa BCCBUSP 262 and four groups exposed to the immersion in different extract concentrations of cyanobacterium. Analyzing liver and muscular tissue for immunohistochemical assay, muscular tissue was not stained. All the animals inoculated i.p. presented positive marking for MC in the liver, but in immersion test, only the ones exposed in the highest dose (1,0x105 cels.mL-1) presented positive marking. Although MC was not detected in muscular tissue, as well as in the liver of animals immersed in extract of M. aeruginosa BCCBUSP 262 in concentrations less than 1.0x105 cels.mL-1, the results would constitute in the base for the methodological development aiming the application of the immuno
A deterioração da qualidade de água pela piscicultura associa-se à eutrofização, com florescimento de cianobactérias. Microcystis aeruginosa destaca-se como principal produtora de microcistinas (MCs), grupo de hepatotoxinas com potencial promotor de tumor. No presente trabalho desenvolveu-se método imunoistoquímico para a detecção de MC em tilápias (Oreochromis niloticus) submetidas à injeção intraperitoneal (i.p.) ou imersão em extrato de M. aeruginosa BCCBUSP 262, empregando anticorpo monoclonal anti-MC (M8H5) e sistema polímero-peroxidase. As tilápias (N=42) foram submetidas a sete tratamentos, sendo três grupos inoculados i.p. com 2,0x105, 4,0x105 e 1,0x106 cels.Kg-1 de M. aeruginosa BCCBUSP 262 e quatro submetidos à imersão em diferentes concentrações do extrato da cianobactéria (variando de 1,0x104 a 1,0x105cel.mL-1). Analisando fígado e tecido muscular pelo ensaio imunoistoquímico, não se detectou marcação em tecido muscular. Todos os animais inoculados i.p. apresentaram marcação positiva para MC no fígado, mas em teste de imersão, apenas os expostos a maior dose (1,0x105 cels.mL-1) apresentaram marcação positiva. Embora MC não seja detectada em tecido muscular, assim como no fígado de animais imersos em extrato de M. aeruginosa CCBUSP 262 em concentrações menores que 1,0x105 cels.mL-1, os resultados constituíram-se base para o desenvolvimento metodológico objetivando a
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Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis, restrict to Latin America, with higher incidence in Brazil. ddY mice have been used as experimental PCM model, although there is no data regarding immune response. The aim of the present study was evaluated specific humoral response against the main specific antigen of the fungal Paracoccidioides brasiliensis, the gp43, in ddY mice infected with virulent Pb 18. Antigenemia analysis and histophatological exam in several organs were performed in different time postinfection The results showed increased levels of anti-gp43 IgG on days 14, 17, 21, 24, 28 and 56 post-infection and increased levels of soluble gp-43 on day 28 post-infection. The fungal cells were detected in all organs analyzed (brain, heart, lung, liver, spleen and kidney) in all investigated periods. The granulomatous lesions became predominant 14 days after infection. The results evidence that ddY mice produce humoral immune response to main P. brasiliensis antigen, with high levels until 56 days after infection. Further studies are needed to show that reduction of soluble gp43 in chronic phase correlates with infection control.
A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, restrita à América Latina, com maior incidência no Brasil. O camundongo ddY tem sido empregado como modelo murino de PCM e, no entanto, não há informações a respeito da resposta imune desse animal frente à infecção. O presente estudo tem como objetivo avaliar a resposta imune humoral específica para o principal antígeno, gp43, do fungo Paracoccidioides brasiliensis, em camundongos ddY infectados com a cepa virulenta Pb 18. Foram realizadas análises da antigenemia e histopatológico em vários órgãos e em diferentes tempos pós-infecção. Os resultados obtidos demonstraram aumento nos níveis de IgG anti-gp43 nos dias 14, 17, 21, 24, 28 e 56 pós-infecção e aumento no nível de gp43 solúvel aos 28 dias pós-infecção. As células fúngicas foram detectadas em todos os órgãos analisados (cérebro, coração, pulmão, fígado, baço e rim) e em todos os períodos. As lesões granulomatosas tornaramse predominantes 14 dias pós-infecção. Os resultados evidenciaram que o camundongo ddY produz resposta imune humoral frente ao principal antígeno de P. brasiliensis, apresentando-se elevado até 56 dias pósinfecção. A redução do nível de gp43 solúvel na fase crônica, supostamente devido ao início do controle da infecção, requer estudos complementares adicionais.
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Actinobacillus actinomycetemcomitans produces a protease to human immunoglobulin G that is an important evasion mechanism. In this study, the proteolytic activity of A. actinomycetemcomitans strain ATCC 43718 on human immunoglobulin G associated with culture supernatant concentrations, the growth period and the period of incubation with immunoglobulin G were evaluated by an enzyme linked immunosorbent assay. The protease fraction was detected by Sephadex G 150 chromatography. The results showed that A. actinomycetemcomitans produced a protease to human immunoglobulin G in the culture supernatant, and the highest activity was achieved witen the concentration was 27.5 mug protein/mL, after culturing for 72 hours and incubating with IgG for 24 hours. The molecular mass of the protease active fraction was from 43 to 150 kDa.
Actinobacillus actinomycetemcomitans produz protease ativa sobre imunoglobulina G humana, sendo um dos mecanismos importantes de escape do microrganismo. No presente trabalho, foi analisada a atividade proteolítica de sobrenadante de cultivo de A. actinomycetemcomitans ATCC 43718 sobre imunoglobulina G humana em função de concentração, tempo de cultivo do microrganismo e tempo de incubação com IgG, por ensaio imunoenzimático. Adicionalmente, foi determinada a fração com atividade de protease por meio de análise de eluatos de cromatografia em coluna de Sephadex G 150. Os resultados obtidos demonstraram que A. actinomycetemcomitans liberou protease ativa sobre imunoglobulina G humana em sobrenadante de cultivo, sendo a sua maior atividade evidenciada na concentração de 27,5 mig proteína/mL, com tempo de cultivo de 72 horas e com 24 horas de incubação com IgG. A massa molecular da fração ativa de protease foi compreendida entre 43 a 150 kDa.
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Bacillus thuringiensis is a Gram positive, sporangial bacterium, known for its insecticidal habilities. Survival and conjugation ability of B. thuringiensis strains were investigated; vegetative cells were evaluated in non-sterile soil. Vegetative cells decreased rapidly in number, and after 48 hours the population was predominantly spores. No plasmid transfer was observed in non-sterile soil, probably because the cells died and the remaining cells sporulated quickly. Soil is not a favorable environment for B. thuringiensis multiplication and conjugation. The fate of purified B. thuringiensis toxin was analyzed by extractable toxin quantification using ELISA. The extractable toxin probably declined due to binding on surface-active particles in the soil.
O comportamento de células vegetativas do Bacillus thuringiensis foi estudado em solo não esterilizado. Após o inóculo grande parte das células morrem e o restante esporula em 24 horas. Não foi observada conjugação provavelmente porque poucas células sobrevivem no solo e rapidamente esporulam, mostrando que este não é o ambiente propício para a multiplicação e conjugação desta bactéria. A toxina purificada, portanto livre de células, diminui rapidamente sua quantidade em solo não esterilizado. Provavelmente a ligação da toxina na fração argilosa do solo é a principal responsável por este fenômeno.
RESUMO
Bacillus thuringiensis is a Gram positive, sporangial bacterium, known for its insecticidal habilities. Survival and conjugation ability of B. thuringiensis strains were investigated; vegetative cells were evaluated in non-sterile soil. Vegetative cells decreased rapidly in number, and after 48 hours the population was predominantly spores. No plasmid transfer was observed in non-sterile soil, probably because the cells died and the remaining cells sporulated quickly. Soil is not a favorable environment for B. thuringiensis multiplication and conjugation. The fate of purified B. thuringiensis toxin was analyzed by extractable toxin quantification using ELISA. The extractable toxin probably declined due to binding on surface-active particles in the soil.
O comportamento de células vegetativas do Bacillus thuringiensis foi estudado em solo não esterilizado. Após o inóculo grande parte das células morrem e o restante esporula em 24 horas. Não foi observada conjugação provavelmente porque poucas células sobrevivem no solo e rapidamente esporulam, mostrando que este não é o ambiente propício para a multiplicação e conjugação desta bactéria. A toxina purificada, portanto livre de células, diminui rapidamente sua quantidade em solo não esterilizado. Provavelmente a ligação da toxina na fração argilosa do solo é a principal responsável por este fenômeno.
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Paracoccidioidomycosis (PCM) is a deep mycosis caused by the thermo-dependent dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis and is prevalent in Latin American countries. Diagnosis of PCM is sometimes difficult outside the endemic countries, thus a rapid and conclusive method for diagnosis of PCM has been anticipated. We compared the sensitivities of a nested PCR method for detecting the gp43 gene and a commercial kit for detecting (1-3)-beta-D-glucan in the blood of experimentally infected mice. Blood samples were collected from mice at 0 (soon after inoculation), 6, 12, 24, 48, and 72 hours and 5, 7, 10, 14, 17, 21, 24, 28 and 56 days after the intravenous inoculation of 10(6) yeast cells of P. brasiliensis, and were separated into clots and plasma. The (1-3)-beta-D-glucan detection kit in the plasma showed positive reactions in some samples within 7 days and 28 and 56 days after infections. In contrast, the PCR method was more sensitive than the (1-3)-beta-D-glucan detection kit throughout the observation period. The clot samples yielded more sensitive PCR-results than did the plasma samples. Although 24 hours is required for the PCR detection, it was confirmed to provide an accurate diagnosis of PCM.