RESUMO
Solidago chilensis Meyen (Compositae) is a species native to South America (Brazil) popularly known as arnica. In Brazilian popular medicine, inflorescences and rhizomes of this plant have been used since the end of the 19th century to replace the exogenous and hepatotoxic Arnica montana L. in the treatment of edema and inflammatory pathologies. Although the anti-inflammatory activity of S. chilensis is evidenced in the literature, there is a lack of studies with enriched fractions or compounds isolated from it. The objective of the current study was to characterize phytochemically and to evaluate the pharmacological action in vivo and in vitro of the crude extract and the different fractions (hexane, dichloromethane, acetal, butanolic, and aqueous) isolated from the inflorescence of S. chilensis. The inflorescence crude extract (ScIE) and fractions were administered by intraperitoneal route to mice at different doses. In an LPS-induced pleurisy model, inhibition of leukocyte influx was observed for the ScIE and all fractions tested, as compared to controls. Dichloromethane (ScDicF), butanolic (ScButF), and aqueous (ScAquF) were selected for further analysis as they showed the best inhibitory effects in leukocyte migration and inflammatory cytokine and chemokine production: TNF-α, CXCL1/KC, CXCL2/MIP-2, and CCL11/eotaxin-1. In LPS-stimulated J774A.1 cell line, ScIE and the ScDicF exhibited an inhibitory effect on nitric oxide (NO) production and downmodulated the COX-2 expression; ScAquF failed to modulate NO production and COX-2 expression. In phytochemical analysis, HPLC-UV-DAD chromatograms of ScDicF and ScAquF showed the main peaks with UV spectrum characteristics of flavonoids; chlorogenic acid and isoquercetin were the most present phytochemicals identified in the ScAquF, and a high number of n-alkanes was found in ScHexF. Our study was the first to address biological effects and correlate them to phytochemically characterized fractions from inflorescences of S. chilensis.
Assuntos
Anti-Inflamatórios/farmacologia , Inflamação/tratamento farmacológico , Inflorescência/química , Compostos Fitoquímicos/isolamento & purificação , Compostos Fitoquímicos/farmacologia , Extratos Vegetais/farmacologia , Folhas de Planta/química , Solidago/química , Animais , Anti-Inflamatórios/química , Anti-Inflamatórios/isolamento & purificação , Inflamação/patologia , Masculino , Camundongos , Compostos Fitoquímicos/química , Extratos Vegetais/química , Extratos Vegetais/isolamento & purificaçãoRESUMO
Polyomavirus JC (JCPyV) is largely excreted by the human population through the urinary route and has been recognized as a potential viral marker for human waste contamination. This study aims to investigate the dissemination of JCPyV in waste water from a sewage treatment plant (STP) located in Rio de Janeiro, Brazil, and to describe the prevalence of JCPyV subtypes currently present in this population. Raw and treated sewage samples were collected bimonthly during one year, and examined for the presence of JCPyV using nested polymerase chain reaction (nPCR) and quantitative real time PCR (qPCR). JCPyV was detected by nPCR in 96% and 43% of raw and treated sewage samples, respectively. The concentration of JCPyV present in the samples ranged from 1.2x10(3) to 3.2x10(5) and 2.6x10(2) to 6.2x10(3) genome copies per 2 ml of concentrated raw and treated sewage sample, respectively. The strains were characterized and the obtained nucleotide sequences indicated that the detected JCPyV strains clustered with subtypes of East African, West African and European origin. To our knowledge, this is the first study describing the incidence and diversity of JCPyV strains in raw and treated sewage in Brazil.
Assuntos
DNA Viral/análise , Vírus JC/isolamento & purificação , Esgotos/virologia , Microbiologia da Água , Sequência de Bases , Brasil , Monitoramento Ambiental , Humanos , Vírus JC/genética , Filogenia , Reação em Cadeia da Polimerase , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase ReversaRESUMO
A leucoencefalopatia multifocal progressiva (LMP), doença subaguda desmielinizante do sistema nervoso central (SNC), é causada pelo Poliomavirus Humano JC (JCPyV). Devido ao uso de terapias imunossupressoras e à SIDA a frequência de casos de LMP aumentou consideravelmente nas últimas décadas. O padrão ouro para o diagnóstico da LMP é a biópsia cerebral. Entretanto, apesar do elevado poder diagnóstico, este é um método invasivo, com uma taxa custo/benefício elevada. Assim, utiliza-se a tomografia computadorizada ou a ressonância magnética do crânio para o diagnóstico presuntivo de LMP. Métodos moleculares, em especial a reação em cadeia da polimerase (PCR), têm se mostrado eficiente no diagnóstico de várias doenças virais do SNC. A nested-PCR (nPCR) é uma técnica mais eficaz na detecção do DNA do JCPyV no liquidocefalorraqueano (LCR), proporcionando maior sensibilidade e especificidade quando comparada à PCR convencional. Entretanto, aproximadamente 15 por cento dos casos prováveis de LMP podem não se confirmar pela nPCR. Na era da terapia antiretroviral altamente potente (HAART), o percentual de casos não confirmados aumentou, chegando à aproximadamente 42 por cento. Publicações recentes nas quais se utilizou a PCR quantitativa (qPCR) em tempo real demonstram que esta técnica pode ser 10 vezes mais sensível quando comparada à PCR convencional na detecção e quantificação do JCPyV, podendo também ser utilizado como um marcador virológico em pacientes em uso de HAART com diagnóstico de LMP. Neste trabalho, elaboramos uma técnica que permite quantificar a carga viral do JCPyV no LCR de pacientes com LMP em razão de acompanhar a resposta do paciente ao tratamento com a HAART. O princípio da técnica qnPCR em tempo real estabelecida foi semelhante ao da nPCR, sendo constituído por dois passos de amplificação sequenciados. O primeiro passo trata-se de uma PCR convencional seguido de nova amplificação, agora utilizando a técnica de qPCR em tempo real e tendo como molde o produto da primeira amplificação. Foram analisadas amostras de LCR armazenadas pelo Laboratório de Pesquisa Clínica em Neuroinfecções. Destas, 16 eram de pacientes com confirmação diagnóstica pelo método de nPCR e 10 eram de casos compatíveis mas sem diagnóstico. Pela qnPCR em tempo real, nenhum dos casos compatíveis com LMP apresentou quantificação de carga viral e das 16 amostras positivas, apenas 12 apresentaram sinais de carga que ultrapassaram a linha de base apontando a presença do DNA do JCPyV. Em nossa casuística a nPCR teve sensibilidade de 69,6 por cento enquanto a sensibilidade da qnPCR foi de 52,2 por cento. Concluímos que a questão diagnóstica da LMP ainda persiste, pois não conseguimos aumentar a sensibilidade de detecção do JCPyV no LCR, entretanto, desenvolvemos um método quantitativo que poderá auxiliar como dado da resposta do paciente ao tratamento com a HAART.