RESUMO

The aim of the present study was to evaluate the intracytoplasmic lipid content, development and cryotolerance of in vitro-produced bovine embryos treated with different concentrations of forskolin before vitrification. Embryos were produced from abattoir-derived ovaries and allocated into four groups. In the treatment groups, forskolin was added to the in vitro culture medium on Day 6 and incubated for 24 hours in one of the following concentrations: 2.5µM (Forsk 2.5 group), 5.0µM (Forsk 5.0 group) or 10.0µM (Forsk 10.0 group). Embryos from the control group were cultured without forskolin. On Day 7 of culture, the expanded blastocysts were stained with the lipophilic dye Sudan Black B for determination of the intracytoplasmic lipid content or were cryopreserved via the Vitri-Ingá® procedure. Although there were no significant differences (P>0.05) in the blastocyst rates between the Control group (44.9%) and the other treatments, the embryo production was lower (P<0.05) in Forsk 10.0 group (38.8%) compared to Forsk 2.5 (50.5%) and Forsk 5.0 (54.7%) groups. The intracytoplasmic lipid content (expressed in arbitrary units of pixels) in blastocysts from the Control group (1.00±0.03) was similar (P>0.05) to that found in Forsk 2.5 (0.92±0.03) and Forsk 10.0 groups (1.06±0.03) groups; however the lipid accumulation in blastocysts from Forsk 5.0 group (0.82±0.04) was lower than in the Control group (P<0.05). Based on these results, Forsk 5.0 treatment was tested for cryotolerance and it was observed that the blastocoel re-expansion rate evaluated 24 hours after warming was greater (P<0.05) in Forsk 5.0 group (72.2%) compared to the Control group (46.2%). In conclusion, pre-treatment with forskolin at a concentration of 5.0 µM for 24 hours before vitrification is effective in reducing the intracytoplasmic lipid content and, consequently, improves cryotolerance of IVP bovine embryos.(AU)

Os embriões foram produzidos a partir de ovários obtidos em abatedouro e foram alocados em quatro grupos experimentais. Nos grupos tratados, o forskolin foi adicionado ao meio de cultivo in vitro no dia 6 do cultivo e os embriões foram incubados durante 24 horas com uma das seguintes concentrações: 2,5µM (grupo Forsk 2,5), 5,0µM (grupo Forsk 5,0) ou 10,0µM (grupo Forsk 10,0). Os embriões do grupo controle foram cultivados na ausência de forskolin. No dia 7 do cultivo, os blastocistos expandidos foram corados com o corante lipofílico Sudan Black B para a determinação do teor de lípidos intracitoplasmáticos ou foram criopreservados através do protocolo Vitri-Ingá®. Não foi observada diferença significativa (P>0,05) na taxa de produção de blastocistos entre o grupo Controle (44,9%) e os demais tratamentos, todavia observou-se menor produção de embriões (P<0,05) no grupo Forsk 10,0 (38,8%) em comparação com os grupos Forsk 2,5 (50,5%) e Forsk 5,0 (54,7%). A quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos do grupo Controle (1,00±0,03) foi semelhante (P>0,05) a dos grupos Forsk 2,5 (0,92±0,03) e Forsk 10,0 (1,06±0,03); no entanto, o acúmulo de lípidos nos blastocistos do grupo Forsk 5.0 (0,82 ± 0,04) foi menor do que no grupo controle (P<0,05). A partir destes resultados, o grupo Forsk 5,0 foi testado quanto à criotolerância e foi observado que a taxa de re-expansão da blastocele 24 horas após o aquecimento foi maior (P<0,05) no grupo Forsk 5,0 (72,2%) quando comparado ao grupo Controle (46,2%). Em conclusão, o pré-tratamento com forskolin na concentração de 5,0 µM durante 24 horas antes da vitrificação foi eficiente para promover a redução da quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos e, consequentemente, melhorou a criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro.(AU)

Assuntos

RESUMO

The aim of the present study was to evaluate the intracytoplasmic lipid content, development and cryotolerance of in vitro-produced bovine embryos treated with different concentrations of forskolin before vitrification. Embryos were produced from abattoir-derived ovaries and allocated into four groups. In the treatment groups, forskolin was added to the in vitro culture medium on Day 6 and incubated for 24 hours in one of the following concentrations: 2.5µM (Forsk 2.5 group), 5.0µM (Forsk 5.0 group) or 10.0µM (Forsk 10.0 group). Embryos from the control group were cultured without forskolin. On Day 7 of culture, the expanded blastocysts were stained with the lipophilic dye Sudan Black B for determination of the intracytoplasmic lipid content or were cryopreserved via the Vitri-Ingá® procedure. Although there were no significant differences (P>0.05) in the blastocyst rates between the Control group (44.9%) and the other treatments, the embryo production was lower (P<0.05) in Forsk 10.0 group (38.8%) compared to Forsk 2.5 (50.5%) and Forsk 5.0 (54.7%) groups. The intracytoplasmic lipid content (expressed in arbitrary units of pixels) in blastocysts from the Control group (1.00±0.03) was similar (P>0.05) to that found in Forsk 2.5 (0.92±0.03) and Forsk 10.0 groups (1.06±0.03) groups; however the lipid accumulation in blastocysts from Forsk 5.0 group (0.82±0.04) was lower than in the Control group (P<0.05). Based on these results, Forsk 5.0 treatment was tested for cryotolerance and it was observed that the blastocoel re-expansion rate evaluated 24 hours after warming was greater (P<0.05) in Forsk 5.0 group (72.2%) compared to the Control group (46.2%). In conclusion, pre-treatment with forskolin at a concentration of 5.0 µM for 24 hours before vitrification is effective in reducing the intracytoplasmic lipid content and, consequently, improves cryotolerance of IVP bovine embryos.(AU)

Os embriões foram produzidos a partir de ovários obtidos em abatedouro e foram alocados em quatro grupos experimentais. Nos grupos tratados, o forskolin foi adicionado ao meio de cultivo in vitro no dia 6 do cultivo e os embriões foram incubados durante 24 horas com uma das seguintes concentrações: 2,5µM (grupo Forsk 2,5), 5,0µM (grupo Forsk 5,0) ou 10,0µM (grupo Forsk 10,0). Os embriões do grupo controle foram cultivados na ausência de forskolin. No dia 7 do cultivo, os blastocistos expandidos foram corados com o corante lipofílico Sudan Black B para a determinação do teor de lípidos intracitoplasmáticos ou foram criopreservados através do protocolo Vitri-Ingá®. Não foi observada diferença significativa (P>0,05) na taxa de produção de blastocistos entre o grupo Controle (44,9%) e os demais tratamentos, todavia observou-se menor produção de embriões (P<0,05) no grupo Forsk 10,0 (38,8%) em comparação com os grupos Forsk 2,5 (50,5%) e Forsk 5,0 (54,7%). A quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos do grupo Controle (1,00±0,03) foi semelhante (P>0,05) a dos grupos Forsk 2,5 (0,92±0,03) e Forsk 10,0 (1,06±0,03); no entanto, o acúmulo de lípidos nos blastocistos do grupo Forsk 5.0 (0,82 ± 0,04) foi menor do que no grupo controle (P<0,05). A partir destes resultados, o grupo Forsk 5,0 foi testado quanto à criotolerância e foi observado que a taxa de re-expansão da blastocele 24 horas após o aquecimento foi maior (P<0,05) no grupo Forsk 5,0 (72,2%) quando comparado ao grupo Controle (46,2%). Em conclusão, o pré-tratamento com forskolin na concentração de 5,0 µM durante 24 horas antes da vitrificação foi eficiente para promover a redução da quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos e, consequentemente, melhorou a criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro.(AU)

Assuntos

RESUMO

ABSTRACT: The aim of the present study was to evaluate the intracytoplasmic lipid content, development and cryotolerance of in vitro-produced bovine embryos treated with different concentrations of forskolin before vitrification. Embryos were produced from abattoir-derived ovaries and allocated into four groups. In the treatment groups, forskolin was added to the in vitro culture medium on Day 6 and incubated for 24 hours in one of the following concentrations: 2.5M (Forsk 2.5 group), 5.0M (Forsk 5.0 group) or 10.0M (Forsk 10.0 group). Embryos from the control group were cultured without forskolin. On Day 7 of culture, the expanded blastocysts were stained with the lipophilic dye Sudan Black B for determination of the intracytoplasmic lipid content or were cryopreserved via the Vitri-Ingá® procedure. Although there were no significant differences (P>0.05) in the blastocyst rates between the Control group (44.9%) and the other treatments, the embryo production was lower (P 0.05) in Forsk 10.0 group (38.8%) compared to Forsk 2.5 (50.5%) and Forsk 5.0 (54.7%) groups. The intracytoplasmic lipid content (expressed in arbitrary units of pixels) in blastocysts from the Control group (1.00±0.03) was similar (P>0.05) to that found in Forsk 2.5 (0.92±0.03) and Forsk 10.0 groups (1.06±0.03) groups; however the lipid accumulation in blastocysts from Forsk 5.0 group (0.82±0.04) was lower than in the Control group (P 0.05). Based on these results, Forsk 5.0 treatment was tested for cryotolerance and it was observed that the blastocoel re-expansion rate evaluated 24 hours after warming was greater (P 0.05) in Forsk 5.0 group (72.2%) compared to the Control group (46.2%). In conclusion, pre-treatment with forskolin at a concentration of 5.0 M for 24 hours before vitrification is effective in reducing the intracytoplasmic lipid content and, consequently, improves cryotolerance of IVP bovine embryos.

RESUMO: Os embriões foram produzidos a partir de ovários obtidos em abatedouro e foram alocados em quatro grupos experimentais. Nos grupos tratados, o forskolin foi adicionado ao meio de cultivo in vitro no dia 6 do cultivo e os embriões foram incubados durante 24 horas com uma das seguintes concentrações: 2,5M (grupo Forsk 2,5), 5,0M (grupo Forsk 5,0) ou 10,0M (grupo Forsk 10,0). Os embriões do grupo controle foram cultivados na ausência de forskolin. No dia 7 do cultivo, os blastocistos expandidos foram corados com o corante lipofílico Sudan Black B para a determinação do teor de lípidos intracitoplasmáticos ou foram criopreservados através do protocolo Vitri-Ingá®. Não foi observada diferença significativa (P>0,05) na taxa de produção de blastocistos entre o grupo Controle (44,9%) e os demais tratamentos, todavia observou-se menor produção de embriões (P 0,05) no grupo Forsk 10,0 (38,8%) em comparação com os grupos Forsk 2,5 (50,5%) e Forsk 5,0 (54,7%). A quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos do grupo Controle (1,00±0,03) foi semelhante (P>0,05) a dos grupos Forsk 2,5 (0,92±0,03) e Forsk 10,0 (1,06±0,03); no entanto, o acúmulo de lípidos nos blastocistos do grupo Forsk 5.0 (0,82 ± 0,04) foi menor do que no grupo controle (P 0,05). A partir destes resultados, o grupo Forsk 5,0 foi testado quanto à criotolerância e foi observado que a taxa de re-expansão da blastocele 24 horas após o aquecimento foi maior (P 0,05) no grupo Forsk 5,0 (72,2%) quando comparado ao grupo Controle (46,2%). Em conclusão, o pré-tratamento com forskolin na concentração de 5,0 M durante 24 horas antes da vitrificação foi eficiente para promover a redução da quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos e, consequentemente, melhorou a criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro.

RESUMO

Low quality embryos (Grade 3) represent a considerable proportion of all the embryos produced after collection of superovulated cows. Usually, those embryos are rarely transferred into recipients because the pregnancy rate is low. The aim of this study was to evaluate if blastocysts arising from in vitro culture of Grade 3 bovine morulae produced in vivo can promote acceptable pregnancy rates when transferred into recipients. Embryos (morulae and blastocysts Grades 1, 2 and 3) were recovered from superovulated B. taurus and B. indicus donors and transferred immediately into recipient heifers. Grade 3 morulae were cultured in either phosphate buffered saline (PBS added of 10% bovine fetal serum) or in Holding PlusTM media for 24 hours at 38 oC. The resulting blastocysts were morphologically classified (Grades 1, 2 and 3) and transferred into recipients. Pregnancy diagnosis was carried out 60 days after transfer and data were analyzed by logistic regression. Quality of the embryo was the only variable showing significant effect on the pregnancy rate. Blastocysts-derived from Grade 3 morulae showed a pregnancy rate (45.7%) higher (P 0.05) than Grade 3 morulae (17.7%) transferred after collection. Pregnancy rate of Grade 1 and Grade 2 cultured blastocist was 75.0% and 57.9% respectively, while those classified as Grade 3 was 21.0% (P 0.05). It was concluded that low quality m

Os embriões de baixa qualidade (Grau 3) representam uma considerável percentagem do total de embriões recuperados de vacas superovuladas. Esses embriões são raramente transferidos em receptoras, pois a taxa de prenhez é baixa. O presente estudo objetivou avaliar se blastocistos originados de mórulas Grau 3 cultivadas in vitro podem promover índices aceitáveis de prenhez quando transferidos em receptoras. Embriões (mórulas e blastocistos Graus 1, 2 e 3) foram recuperados de doadoras B. taurus taurus e B. taurus indicus superovuladas e transferidos em receptoras imediatamente após a coleta. Mórulas Grau 3 foram cultivadas nos meios PBS (adicionado de 10% de soro fetal bovino) ou Holding PlusTM durante 24 horas a 38 oC. Os blastocistos originados neste período foram igualmente transferidos em receptoras. O diagnóstico de prenhez foi realizado 60 dias após a transferência e os dados foram analisados por regressão logística. A qualidade do embrião foi a única variável que mostrou efeito significativo (P 0,05) no índice de prenhez. Blastocistos originados de mórulas Grau 3 apresentaram taxa de prenhez de 45,7% contra 17,7% de mórulas Grau 3 transferidas imediatamente após a coleta (P 0,05). A taxa de prenhez dos blastocistos cultivados classificados como Grau 1 e 2 foi de 75,0% e 57,9% respectivamente, enquanto que os classificados como Grau 3 foi de 21,0% (P 0,05). Foi conc

RESUMO

Low quality embryos (Grade 3) represent a considerable proportion of all the embryos produced after collection of superovulated cows. Usually, those embryos are rarely transferred into recipients because the pregnancy rate is low. The aim of this study was to evaluate if blastocysts arising from in vitro culture of Grade 3 bovine morulae produced in vivo can promote acceptable pregnancy rates when transferred into recipients. Embryos (morulae and blastocysts Grades 1, 2 and 3) were recovered from superovulated B. taurus and B. indicus donors and transferred immediately into recipient heifers. Grade 3 morulae were cultured in either phosphate buffered saline (PBS added of 10% bovine fetal serum) or in Holding PlusTM media for 24 hours at 38 oC. The resulting blastocysts were morphologically classified (Grades 1, 2 and 3) and transferred into recipients. Pregnancy diagnosis was carried out 60 days after transfer and data were analyzed by logistic regression. Quality of the embryo was the only variable showing significant effect on the pregnancy rate. Blastocysts-derived from Grade 3 morulae showed a pregnancy rate (45.7%) higher (P 0.05) than Grade 3 morulae (17.7%) transferred after collection. Pregnancy rate of Grade 1 and Grade 2 cultured blastocist was 75.0% and 57.9% respectively, while those classified as Grade 3 was 21.0% (P 0.05). It was concluded that low quality m

Os embriões de baixa qualidade (Grau 3) representam uma considerável percentagem do total de embriões recuperados de vacas superovuladas. Esses embriões são raramente transferidos em receptoras, pois a taxa de prenhez é baixa. O presente estudo objetivou avaliar se blastocistos originados de mórulas Grau 3 cultivadas in vitro podem promover índices aceitáveis de prenhez quando transferidos em receptoras. Embriões (mórulas e blastocistos Graus 1, 2 e 3) foram recuperados de doadoras B. taurus taurus e B. taurus indicus superovuladas e transferidos em receptoras imediatamente após a coleta. Mórulas Grau 3 foram cultivadas nos meios PBS (adicionado de 10% de soro fetal bovino) ou Holding PlusTM durante 24 horas a 38 oC. Os blastocistos originados neste período foram igualmente transferidos em receptoras. O diagnóstico de prenhez foi realizado 60 dias após a transferência e os dados foram analisados por regressão logística. A qualidade do embrião foi a única variável que mostrou efeito significativo (P 0,05) no índice de prenhez. Blastocistos originados de mórulas Grau 3 apresentaram taxa de prenhez de 45,7% contra 17,7% de mórulas Grau 3 transferidas imediatamente após a coleta (P 0,05). A taxa de prenhez dos blastocistos cultivados classificados como Grau 1 e 2 foi de 75,0% e 57,9% respectivamente, enquanto que os classificados como Grau 3 foi de 21,0% (P 0,05). Foi conc