RESUMO

Resveratrol, a potent antioxidant, can be an alternative semen extender constituent to protect spermatozoa against reactive oxygen species (ROS); however, effects on sperm quality post-thawing and sperm function is not well understood. This study, therefore, was conducted to investigate effects of resveratrol supplementation to semen extender on sperm quality post-thawing. Bull semen was cryopreserved using extenders not supplemented or supplemented with 0.05, 0.1, or 1 mM resveratrol. Supplementation of extender with resveratrol at 0.05 mM resulted in greater (P < 0.05) sperm progressive motility, average path velocity, straight linear velocity, linearity and straightness when compared with no or 1 mM supplementations. Furthermore, effects of 0.05 mM resveratrol supplementations on plasma membrane and acrosome integrity and sperm fertilization capacity using in vitro procedures were investigated. Supplementation of semen extender with resveratrol resulted in a greater (P < 0.05) proportion of frozen-thawed spermatozoa with an intact acrosome and plasma membrane. Results from in vitro fertilization studies indicated there were no differences (P> 0.05) when there was no supplementation or supplementation with 0.05 mM resveratrol on embryo development to the cleavage and blastocyst stages. In conclusion, addition of resveratrol to bull semen extender resulted in greater sperm quality post-thawing in a dose-dependent manner, with values for variables related to sperm quality being greater when there was resveratrol supplementation at the 0.05 mM concentration. Proportion of embryo developing to the cleavage and blastocyst stages after in vitro fertilization was not affected by resveratrol supplementation to semen extenders.

Assuntos

RESUMO

Heat stress compromises bovine oocyte developmental competence, but the effects of high temperature during oocyte maturation on embryo chromatin organization is unknown. In this study bovine oocytes were exposed to heat shock (41°C) for 12 h during in vitro maturation and then submitted to in vitro fertilization. The heat shock did not affect (P > 0.05) the cleavage but reduced (P < 0.01) the blastocyst rate on Day 7 and Day 8. No effect (P > 0.05) on total cell number was found, but the heat shock increased (P < 0.05) the proportion of apoptotic cells in blastocysts at Day 8. Immunofluorescence analysis of H3K9me3 and HP1 was performed in embryos at 52 h post in vitro fertilization. An accumulation of H3K9me3 in the nuclei of embryos derived from heat-shocked oocytes at four-cell and eight-cell stages was found. Also, a non-expected higher proportion (P < 0.05) of four-cell stage embryos displaying nuclei with increased HP1 fluorescence was observed, suggesting an abnormal chromatin compaction in embryos from heat-shocked oocytes. Embryos at eight-cell stage derived from heat-shocked oocytes displayed lower (P < 0.05) relative amount of HSP40 transcripts than control ones. In conclusion, heat shock before fertilization has an effect on embryo chromatin, influencing the accumulation of H3K9me3 and HP1 in early embryos as well as further development.

Assuntos

RESUMO

Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) is an important bovine pathogen that is responsible for causing respiratory diseases and reproductive failures. The presence of BoHV-1 in an in vitro embryo production system affects fertilization, maturation, and embryonic development. The objective of this study was to evaluate the developmental capacity of oocytes from naturally infected cows with no reproductive history. Moreover, this study investigated the presence of viral DNA in cumulus oophorus complexes (COCs). Experimental groups were differentiated by titrating the antibodies detected through seroneutralization assays, establishing three groups: seronegative animals (titer lower than 2), low titer (2 to 8), and animals with a titer above or equal to 16. COCs were obtained from 15 donors during 22 sessions of ultrasound-guided follicular aspiration. DNA was extracted from a pool of COCs obtained from all aspirations from the same donor as well as from whole blood and nested PCR reactions were performed. Only COCs with a compact layer of cumulus cells, an intact zona pellucida, and homogeneous cytoplasm were selected for in vitro culture and evaluation of nuclear maturation rate. After culturing for 24 hours, the oocytes were fixed and stained to evaluate the meiotic cell cycle stage. Oocytes that showed a chromosomal configuration in metaphase II were considered to have reached nuclear maturation. Compared with the other groups, the oocyte nuclear maturation rate in animals with a titer greater than or equal to 16 (50%) was compromised (P<0.05). However, the viral titer did not influence the maturation rate of bovine oocytes in animals exhibiting low titration (62.2%) when compared with the control group (76.7%). Viral DNA was not observed in the blood samples but was detected in the COC pool from three seropositive donors. In view of the results obtained, we conclude that natural infections by the BoHV-1 virus can compromise the nuclear maturation rate in cows, depending on the titration levels of antibodies against the virus. Moreover, viral DNA could be present in COCs, contradicting the hypothesis that seropositive animals with no history of clinical symptomatology pose a negligible risk of transmitting BoHV-1 by COCs.(AU)

Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) é um importante patógeno bovino, responsável por causar doenças respiratórias e falhas reprodutivas. A presença do BoHV-1 em sistema de produção in vitro de embriões afeta a fertilização, a maturação e o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de desenvolvimento de ovócitos oriundos de vacas infectadas naturalmente sem histórico reprodutivo. Além disso, este estudo investigou a presença do DNA viral em Complexos Cumulus Ooforus (COCs). Os tratamentos foram definidos a partir do título de anticorpos detectados pelos ensaios de soroneutralização, sendo estabelecidos três grupos: animais soronegativos (título menor do que 2), título baixo (2 a 8) e animais com título maior ou igual a 16. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras durante 22 sessões de aspiração folicular guiada por ultrassom. A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total para a realização das reações de Nested-PCR. Para avaliação da taxa de maturação nuclear, foram selecionados para o cultivo in vitro somente os COCs com camada compacta de células do cumulus, zona pelúcida íntegra e citoplasma homogêneo. Após 24 horas de cultivo, os ovócitos foram fixados e corados em lâmina para a avaliação do estádio do ciclo celular meiótico. Os ovócitos que apresentaram configuração cromossômica em metáfase II foram considerados como tendo alcançado a maturação nuclear. Verificou-se comprometimento na taxa de maturação nuclear ovocitária (P<0.05) nos animais de título maior ou igual a 16 (50%). No entanto, não houve influência do título viral na taxa de maturação de ovócitos bovinos em animais que apresentaram titulação baixa (62,2%) quando comparados com o grupo controle (76,7%). O DNA viral não foi identificado nas amostras de sangue, mas foi detectado no pool de COCs de três doadoras soropositivas. Diante dos resultados encontrados conclui-se que vacas infectadas naturalmente pelo vírus BoHV-1 apresentam comprometimento na taxa de maturação nuclear, dependendo do grau de titulação de anticorpos contra o vírus. Ademais, o DNA viral pode estar presente em COCs contrariando a hipótese de que animais sorologicamente positivos e sem histórico de sintomatologia clínica oferecem risco negligível de transmissão do BoHV-1 por COCs.(AU)

Assuntos

RESUMO

Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) is an important bovine pathogen that is responsible for causing respiratory diseases and reproductive failures. The presence of BoHV-1 in an in vitro embryo production system affects fertilization, maturation, and embryonic development. The objective of this study was to evaluate the developmental capacity of oocytes from naturally infected cows with no reproductive history. Moreover, this study investigated the presence of viral DNA in cumulus oophorus complexes (COCs). Experimental groups were differentiated by titrating the antibodies detected through seroneutralization assays, establishing three groups: seronegative animals (titer lower than 2), low titer (2 to 8), and animals with a titer above or equal to 16. COCs were obtained from 15 donors during 22 sessions of ultrasound-guided follicular aspiration. DNA was extracted from a pool of COCs obtained from all aspirations from the same donor as well as from whole blood and nested PCR reactions were performed. Only COCs with a compact layer of cumulus cells, an intact zona pellucida, and homogeneous cytoplasm were selected for in vitro culture and evaluation of nuclear maturation rate. After culturing for 24 hours, the oocytes were fixed and stained to evaluate the meiotic cell cycle stage. Oocytes that showed a chromosomal configuration in metaphase II were considered to have reached nuclear maturation. Compared with the other groups, the oocyte nuclear maturation rate in animals with a titer greater than or equal to 16 (50%) was compromised (P<0.05). However, the viral titer did not influence the maturation rate of bovine oocytes in animals exhibiting low titration (62.2%) when compared with the control group (76.7%). Viral DNA was not observed in the blood samples but was detected in the COC pool from three seropositive donors. In view of the results obtained, we conclude that natural infections by the BoHV-1 virus can compromise the nuclear maturation rate in cows, depending on the titration levels of antibodies against the virus. Moreover, viral DNA could be present in COCs, contradicting the hypothesis that seropositive animals with no history of clinical symptomatology pose a negligible risk of transmitting BoHV-1 by COCs.(AU)

Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) é um importante patógeno bovino, responsável por causar doenças respiratórias e falhas reprodutivas. A presença do BoHV-1 em sistema de produção in vitro de embriões afeta a fertilização, a maturação e o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de desenvolvimento de ovócitos oriundos de vacas infectadas naturalmente sem histórico reprodutivo. Além disso, este estudo investigou a presença do DNA viral em Complexos Cumulus Ooforus (COCs). Os tratamentos foram definidos a partir do título de anticorpos detectados pelos ensaios de soroneutralização, sendo estabelecidos três grupos: animais soronegativos (título menor do que 2), título baixo (2 a 8) e animais com título maior ou igual a 16. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras durante 22 sessões de aspiração folicular guiada por ultrassom. A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total para a realização das reações de Nested-PCR. Para avaliação da taxa de maturação nuclear, foram selecionados para o cultivo in vitro somente os COCs com camada compacta de células do cumulus, zona pelúcida íntegra e citoplasma homogêneo. Após 24 horas de cultivo, os ovócitos foram fixados e corados em lâmina para a avaliação do estádio do ciclo celular meiótico. Os ovócitos que apresentaram configuração cromossômica em metáfase II foram considerados como tendo alcançado a maturação nuclear. Verificou-se comprometimento na taxa de maturação nuclear ovocitária (P<0.05) nos animais de título maior ou igual a 16 (50%). No entanto, não houve influência do título viral na taxa de maturação de ovócitos bovinos em animais que apresentaram titulação baixa (62,2%) quando comparados com o grupo controle (76,7%). O DNA viral não foi identificado nas amostras de sangue, mas foi detectado no pool de COCs de três doadoras soropositivas. Diante dos resultados encontrados conclui-se que vacas infectadas naturalmente pelo vírus BoHV-1 apresentam comprometimento na taxa de maturação nuclear, dependendo do grau de titulação de anticorpos contra o vírus. Ademais, o DNA viral pode estar presente em COCs contrariando a hipótese de que animais sorologicamente positivos e sem histórico de sintomatologia clínica oferecem risco negligível de transmissão do BoHV-1 por COCs.(AU)

Assuntos

RESUMO

The Publisher regrets that this article is a duplication of an article that has already been published in the Journal of Periodontology, 89 (2018) 440-455, doi:10.1902/jop.2017.170363. The duplicate article has therefore been withdrawn. The full Elsevier Policy on Article Withdrawal can be found at https://www.elsevier.com/about/our-business/policies/article-withdrawal

RESUMO

In this study, the polymerase chain reaction (PCR) was used to evaluate the presence of viral DNA in ovarian tissue, in the cumulus-oocyte complex (COC), follicular liquid, and blood of animals naturally infected with bovine herpesvirus-1 (BoHV-1). The serum profile of the sampled animals was also evaluated. Samples of serum, blood, ovarian tissue, follicular liquid, and COC were collected from 147 slaughterhouse animals that were not vaccinated against BoHV-1. Contaminated or insufficient samples were disregarded. Serological tests allowed the identification of serum-positive animals with neutralizing antibodies against BoHV-1. Analysis of samples by PCR revealed the presence of viral DNA in 0.9% (1/115) of the COC samples, in 4.3% (5/117) of the ovarian tissue samples, and in 2.8% (3/108) of the blood samples. Viral DNA was not detected in any of the follicular liquid samples. In serological samples, a positivity of 83.6% (117/140) was observed for BoHV-1. All PCR-positive animals, regardless of the samples analyzed, showed positivity in the serum neutralization test for the detection of BoHV-1-specific antibodies. According to these results, a high prevalence of antibodies against BoHV-1 was detected in naturally infected animals from different herds, and the molecular tests revealed the presence of viral DNA in bovine ovarian tissue, providing evidence that this might be...(AU)

Neste trabalho foi avaliada a presença do DNA viral, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), no tecido ovariano, nos oócitos, líquido folicular e sangue de vacas naturalmente infectadas. Também foi avaliado o perfil sorológico dos animais amostrados. Foram coletadas amostras de soro, sangue, tecido ovariano, líquido folicular e complexo cumulus-oócitos de 147 animais abatidos em frigorífico não vacinados contra o herpesvirus bovino 1 (BoHV-1). Amostras tóxicas ou insuficientes foram descartadas. Os testes sorológicos foram realizados permitindo a identificação dos animais soropositivos para anticorpos neutralizantes contra o BoHV-1. Foram realizadas as PCRs onde foi observada a presença do DNA viral em 0,9% (1/115) dos oócitos, em 4,3% (5/117) do tecido ovariano e em 2,8% (3/108) do sangue. Em nenhuma das amostras de líquido folicular foi detectado o DNA viral. Nas amostras sorológicas observou-se 83,6% (117/140) de positividade para o BoHV-1. Dentre os animais positivos na PCR, independente das amostras, todos apresentavam positividade no teste de soroneutralização para detecção de anticorpos para BoHV-1. Conclui-se que em animais de diferentes rebanhos analisados foi detectada alta prevalência de anticorpos contra o BoHV-1 e que nos testes moleculares houve a presença do DNA viral em amostras de tecidos ovarianos de bovinos, evidenciando que estas estruturas poderia...(AU)

Assuntos

RESUMO

In this study, the polymerase chain reaction (PCR) was used to evaluate the presence of viral DNA in ovarian tissue, in the cumulus-oocyte complex (COC), follicular liquid, and blood of animals naturally infected with bovine herpesvirus-1 (BoHV-1). The serum profile of the sampled animals was also evaluated. Samples of serum, blood, ovarian tissue, follicular liquid, and COC were collected from 147 slaughterhouse animals that were not vaccinated against BoHV-1. Contaminated or insufficient samples were disregarded. Serological tests allowed the identification of serum-positive animals with neutralizing antibodies against BoHV-1. Analysis of samples by PCR revealed the presence of viral DNA in 0.9% (1/115) of the COC samples, in 4.3% (5/117) of the ovarian tissue samples, and in 2.8% (3/108) of the blood samples. Viral DNA was not detected in any of the follicular liquid samples. In serological samples, a positivity of 83.6% (117/140) was observed for BoHV-1. All PCR-positive animals, regardless of the samples analyzed, showed positivity in the serum neutralization test for the detection of BoHV-1-specific antibodies. According to these results, a high prevalence of antibodies against BoHV-1 was detected in naturally infected animals from different herds, and the molecular tests revealed the presence of viral DNA in bovine ovarian tissue, providing evidence that this might be...

Neste trabalho foi avaliada a presença do DNA viral, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), no tecido ovariano, nos oócitos, líquido folicular e sangue de vacas naturalmente infectadas. Também foi avaliado o perfil sorológico dos animais amostrados. Foram coletadas amostras de soro, sangue, tecido ovariano, líquido folicular e complexo cumulus-oócitos de 147 animais abatidos em frigorífico não vacinados contra o herpesvirus bovino 1 (BoHV-1). Amostras tóxicas ou insuficientes foram descartadas. Os testes sorológicos foram realizados permitindo a identificação dos animais soropositivos para anticorpos neutralizantes contra o BoHV-1. Foram realizadas as PCRs onde foi observada a presença do DNA viral em 0,9% (1/115) dos oócitos, em 4,3% (5/117) do tecido ovariano e em 2,8% (3/108) do sangue. Em nenhuma das amostras de líquido folicular foi detectado o DNA viral. Nas amostras sorológicas observou-se 83,6% (117/140) de positividade para o BoHV-1. Dentre os animais positivos na PCR, independente das amostras, todos apresentavam positividade no teste de soroneutralização para detecção de anticorpos para BoHV-1. Conclui-se que em animais de diferentes rebanhos analisados foi detectada alta prevalência de anticorpos contra o BoHV-1 e que nos testes moleculares houve a presença do DNA viral em amostras de tecidos ovarianos de bovinos, evidenciando que estas estruturas poderia...

Assuntos

RESUMO

Cryopreservation of semen is of great importance for various reproductive biotechnologies such as artificial insemination (IA), In Vitro Embryo Production (PIV) and Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI). The objective of this work was to evaluate the stability and persistence of motility and strength of sperm, as well as changes in the plasma membrane after the addition of Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% or TRIS solution in thawed goat semen. Semen was collected from two Alpine Brown goats, and standard procedures for cryopreservation and seminal analysis were performed. After thawing the semen, the extenders Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% and TRIS solution were added and Thermoresistance (TTR), Supravital and Morphology Tests were carried out. In TTR, only the group received TRIS solution presented motility and strength for a longer period (90 minutes; P 0,05). No influence of the addition of the solutions was found in the morphological analysis, as well as in the Supravital Test, which showed values ??close to those found for motility (P> 0.05). We concluded that the addition of the solutions does not allow a large persistence of motility and strength of thawed sperm, but TRIS solution could be used for expansion of seminal doses used in vitro reproductive biotechnology.(AU)

A criopreservação do sêmen é de grande importância para diversas biotecnologias da reprodução, como Inseminação Artificial (IA), Produção de Embriões In Vitro (PIV) e Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoides (ICSI). Avaliou-se a estabilidade e persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides, assim como alterações da membrana plasmática, após a adição de Ringer com Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS ao sêmen caprino descongelado. O sêmen foi coletado de dois bodes da raça Parda Alpina, realizando-se os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após a descongelação do sêmen, foram adicionados os diluentes Ringer Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS, realizando-se os Testes de Termorresistência (TTR), Supravital e Morfológico. No TTR, somente o grupo a que foi adicionada a Solução TRIS obteve motilidade e vigor por maior período (90 minutos; P 0,05). Não foi encontrada influência da adição das soluções na análise morfológica, assim como no teste Supravital, o qual apresentou valores próximos aos encontrados para motilidade (P> 0,05). Concluiu-se que a adição das soluções não permite uma grande persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides descongelados, porém a solução TRIS poderia ser utilizada para expansão de doses seminais utilizadas em biotecnologias reprodutivas in vitro.(AU)

Assuntos

RESUMO

Cryopreservation of semen is of great importance for various reproductive biotechnologies such as artificial insemination (IA), In Vitro Embryo Production (PIV) and Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI). The objective of this work was to evaluate the stability and persistence of motility and strength of sperm, as well as changes in the plasma membrane after the addition of Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% or TRIS solution in thawed goat semen. Semen was collected from two Alpine Brown goats, and standard procedures for cryopreservation and seminal analysis were performed. After thawing the semen, the extenders Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% and TRIS solution were added and Thermoresistance (TTR), Supravital and Morphology Tests were carried out. In TTR, only the group received TRIS solution presented motility and strength for a longer period (90 minutes; P 0,05). No influence of the addition of the solutions was found in the morphological analysis, as well as in the Supravital Test, which showed values close to those found for motility (P> 0.05). We concluded that the addition of the solutions does not allow a large persistence of motility and strength of thawed sperm, but TRIS solution could be used for expansion of seminal doses used in vitro reproductive biotechnology.

A criopreservação do sêmen é de grande importância para diversas biotecnologias da reprodução, como Inseminação Artificial (IA), Produção de Embriões In Vitro (PIV) e Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoides (ICSI). Avaliou-se a estabilidade e persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides, assim como alterações da membrana plasmática, após a adição de Ringer com Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS ao sêmen caprino descongelado. O sêmen foi coletado de dois bodes da raça Parda Alpina, realizando-se os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após a descongelação do sêmen, foram adicionados os diluentes Ringer Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS, realizando-se os Testes de Termorresistência (TTR), Supravital e Morfológico. No TTR, somente o grupo a que foi adicionada a Solução TRIS obteve motilidade e vigor por maior período (90 minutos; P 0,05). Não foi encontrada influência da adição das soluções na análise morfológica, assim como no teste Supravital, o qual apresentou valores próximos aos encontrados para motilidade (P> 0,05). Concluiu-se que a adição das soluções não permite uma grande persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides descongelados, porém a solução TRIS poderia ser utilizada para expansão de doses seminais utilizadas em biotecnologias reprodutivas in vitro.

RESUMO

Cryopreservation of semen is of great importance for various reproductive biotechnologies such as artificial insemination (IA), In Vitro Embryo Production (PIV) and Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI). The objective of this work was to evaluate the stability and persistence of motility and strength of sperm, as well as changes in the plasma membrane after the addition of Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% or TRIS solution in thawed goat semen. Semen was collected from two Alpine Brown goats, and standard procedures for cryopreservation and seminal analysis were performed. After thawing the semen, the extenders Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% and TRIS solution were added and Thermoresistance (TTR), Supravital and Morphology Tests were carried out. In TTR, only the group received TRIS solution presented motility and strength for a longer period (90 minutes; P 0,05). No influence of the addition of the solutions was found in the morphological analysis, as well as in the Supravital Test, which showed values ??close to those found for motility (P> 0.05). We concluded that the addition of the solutions does not allow a large persistence of motility and strength of thawed sperm, but TRIS solution could be used for expansion of seminal doses used in vitro reproductive biotechnology.

A criopreservação do sêmen é de grande importância para diversas biotecnologias da reprodução, como Inseminação Artificial (IA), Produção de Embriões In Vitro (PIV) e Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoides (ICSI). Avaliou-se a estabilidade e persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides, assim como alterações da membrana plasmática, após a adição de Ringer com Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS ao sêmen caprino descongelado. O sêmen foi coletado de dois bodes da raça Parda Alpina, realizando-se os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após a descongelação do sêmen, foram adicionados os diluentes Ringer Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS, realizando-se os Testes de Termorresistência (TTR), Supravital e Morfológico. No TTR, somente o grupo a que foi adicionada a Solução TRIS obteve motilidade e vigor por maior período (90 minutos; P 0,05). Não foi encontrada influência da adição das soluções na análise morfológica, assim como no teste Supravital, o qual apresentou valores próximos aos encontrados para motilidade (P> 0,05). Concluiu-se que a adição das soluções não permite uma grande persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides descongelados, porém a solução TRIS poderia ser utilizada para expansão de doses seminais utilizadas em biotecnologias reprodutivas in vitro.

Assuntos

RESUMO

The aim of this study was to investigate the effects of the insulin-like growth factor -I (IGF-I) on survival, activation (transition from primordial to primary follicles) and growth of caprine preantral follicles cultured in vitro. Fragments of ovarian cortex were cultured for one and seven days in the absence or presence of IGF-I (0, 50 and 100ng/ml). The non-cultured and cultured tissues were processed and analyzed by histology and transmission electron microscopy. The culture for one day in a medium with 100ng/ml of IGF-I showed 86.7% of morphologically normal follicles. These results were similar (P>0.05) to the percentage of normal follicles found in the control (96.7%). It was also found that this medium increased the percentage of follicular activation (developing follicles) with one day of culture. The oocyte and follicular diameters remained similar to the control by culturing for one day in a medium containing 100ng/ml of IGF-I. The ultrastructural analysis did not confirm the integrity of the follicular fragments in a medium containing IGF-I (100ng/ml) after one and seven days of culture. In conclusion, this study demonstrated that the addition of 100 ng/ml of IGF-I in the culture medium enables the development of preantral follicles of goats with one day of culture. However, it is not sufficient to maintain the follicular integrity and the follicular survival rate after seven days of culture.(AU)

O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do fator de crescimento semelhante a insulina-I (IGF-I) na sobrevivência, ativação (transição de folículos primordiais para primários) e crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro. Fragmentos de córtex ovariano foram cultivados por um e sete dias na ausência ou presença de IGF-I (0, 50 e 100ng/mL). Os tecidos não cultivados e cultivados foram processados e analisados por histologia e microscopia eletrônica de transmissão. O cultivo por um dia em meio com 100ng/mL de IGF-I apresentou 86,7% de folículos morfologicamente normais. Estes resultados foram semelhantes (P>0,05) ao percentual de folículos normais encontrados no controle (96,7%). Verificou-se ainda que este meio aumentou o percentual de ativação folicular (folículos em desenvolvimento) com um dia de cultivo. Os diâmetros ovocitário e folicular mantiveram-se semelhantes ao controle ao cultivar por um dia em meio contendo 100ng/mL de IGF-I. As análises ultraestruturais não confirmaram a integridade folicular dos fragmentos em meio contendo IGF-I (100 ng/mL) após um e sete dias de cultivo. Em conclusão, esse estudo demonstrou que a adição de 100 ng/mL de IGF-I no meio de cultivo ativa o desenvolvimento de folículos pré-antrais de caprinos com um dia de cultivo. Entretanto, não é suficiente para manter a integridade folicular e a taxa de sobrevivência folicular após sete dias de cultivo.(AU)

Assuntos

RESUMO

The aim of this study was to investigate the effects of the insulin-like growth factor -I (IGF-I) on survival, activation (transition from primordial to primary follicles) and growth of caprine preantral follicles cultured in vitro. Fragments of ovarian cortex were cultured for one and seven days in the absence or presence of IGF-I (0, 50 and 100ng/ml). The non-cultured and cultured tissues were processed and analyzed by histology and transmission electron microscopy. The culture for one day in a medium with 100ng/ml of IGF-I showed 86.7% of morphologically normal follicles. These results were similar (P>0.05) to the percentage of normal follicles found in the control (96.7%). It was also found that this medium increased the percentage of follicular activation (developing follicles) with one day of culture. The oocyte and follicular diameters remained similar to the control by culturing for one day in a medium containing 100ng/ml of IGF-I. The ultrastructural analysis did not confirm the integrity of the follicular fragments in a medium containing IGF-I (100ng/ml) after one and seven days of culture. In conclusion, this study demonstrated that the addition of 100 ng/ml of IGF-I in the culture medium enables the development of preantral follicles of goats with one day of culture. However, it is not sufficient to maintain the follicular integrity and the follicular survival rate after seven days of culture.

O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do fator de crescimento semelhante a insulina-I (IGF-I) na sobrevivência, ativação (transição de folículos primordiais para primários) e crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro. Fragmentos de córtex ovariano foram cultivados por um e sete dias na ausência ou presença de IGF-I (0, 50 e 100ng/mL). Os tecidos não cultivados e cultivados foram processados e analisados por histologia e microscopia eletrônica de transmissão. O cultivo por um dia em meio com 100ng/mL de IGF-I apresentou 86,7% de folículos morfologicamente normais. Estes resultados foram semelhantes (P>0,05) ao percentual de folículos normais encontrados no controle (96,7%). Verificou-se ainda que este meio aumentou o percentual de ativação folicular (folículos em desenvolvimento) com um dia de cultivo. Os diâmetros ovocitário e folicular mantiveram-se semelhantes ao controle ao cultivar por um dia em meio contendo 100ng/mL de IGF-I. As análises ultraestruturais não confirmaram a integridade folicular dos fragmentos em meio contendo IGF-I (100 ng/mL) após um e sete dias de cultivo. Em conclusão, esse estudo demonstrou que a adição de 100 ng/mL de IGF-I no meio de cultivo ativa o desenvolvimento de folículos pré-antrais de caprinos com um dia de cultivo. Entretanto, não é suficiente para manter a integridade folicular e a taxa de sobrevivência folicular após sete dias de cultivo.

Assuntos

RESUMO

This study was carried out to verify the presence of DNA of the bovine herpesvirus 1 (BoHV1) in Cumulus Oophorus Complexes (COCs) and blood from the cows naturally infected by BoHV1. COCs from 15 donors were obtained through Follicular Aspiration Guided by Ultrassom (OPU). The DNA extraction was accomplished in a pool of COCs of all aspirations from the same donor and in the total blood. After this procedure, the Nested-PCR reactions were accomplished. The DNA of BoHV1 was identified in the pool of COCs from three serumpositive donors, but it was not detected in none of the serum-negative samples. However, no viral DNA was found in sanguine samples, even in those from the serum-positive animals. All samples were subjected to Nested-PCR for detection of BoHV5, but no positive result was found. The obtained results allow concluding the viral DNA could be present in ovarian structures of the cows naturally infected by BoHV1.(AU)

O objetivo deste estudo foi verificar a presença do DNA do herpesvirus bovino 1 (BoHV1) em Complexos Cumulus Oóforus (COCs) e sangue de vacas naturalmente infectadas. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras por meio de aspiração folicular guiada por ultrassom (OPU). A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total. Após este procedimento, seguiu-se a realização das reações de Nested-PCR. O DNA do BoHV1 foi identificado no pool de COCs de três doadoras soropositivas, não sendo detectado em nenhuma das amostras soronegativas. Entretanto, não foi encontrado DNA viral em amostras sanguíneas, mesmo nas oriundas de animais soropositivos. Todas as amostras de sangue e COCs foram submetidas à Nested-PCR para a detecção do BoHV5, não sendo encontrado nenhum resultado positivo. Os resultados obtidos permitem concluir que o DNA viral pode estar presente em estruturas ovarianas de vacas infectadas naturalmente pelo BoHV1.(AU)

Assuntos

RESUMO

The follicle stimulating hormone (FSH) is a heterodimeric glycoprotein synthesized and secreted in the pituitary anterior portion (adenohypophysis). The FSH performs important actions in the later stages of follicular development and maturation. The FSH exerts multiple functions such as the activation of more than 100 genes encoding different answers. The action of FSH is restricted to the granulosa cells. This gonadotropin acts through the activation of the enzyme adenylate cyclase in the plasma membrane, which forms AMPc from ATP. The AMPc promotes metabolic changes that characterize the gonadotropic action, usually through the phosphorylation of protein kinases. During the physiological process of ovulation, estrogens enhance the stimulatory effect of FSH and cause the release of FSH/LH required for ovulation. The mature follicle itself is responsible for ovulation, as it secrets estradiol, hormone responsible for the pre-ovulatory peak of LH, resulting in ovulation. Thus, the addition of FSH to the culture media characterizes important actions, as the follicular development and the ovulation process. Thus, the revision of the objective was to describe the role of FSH and its mechanism of action and receptor in ovarian follicular development. And as well as the effect of this on survival, activation and follicular growth.

O hormônio folículo estimulante (FSH) é uma glicoproteína heterodímera sintetizada e secretada na porção anterior da hipófise (adenohipófise). O FSH desempenha ações relevantes nos estádios mais avançados do desenvolvimento e maturação folicular. O FSH exerce múltiplas funções como a ativação de mais de 100 genes que codificam diferentes respostas. A ação do FSH está restrita as células da granulosa. Esta gonadotrofina atua por meio da ativação da enzima adenilciclase na membrana plasmática, a qual forma AMPc a partir de ATP. O AMPc promove as mudanças metabólicas que caracterizam a ação gonadotrópica, normalmente por meio da fosforilação de proteínas-quinases. Durante o processo fisiológico da ovulação, os estrógenos melhoram o efeito estimulador do FSH e provocam a liberação de FSH/LH necessária para a ovulação. O próprio folículo maduro é responsável pela ovulação, pois secreta estradiol, hormônio responsável pelo pico pré-ovulatório de LH, resultando na ovulação. Diante disso, a adição de FSH aos meios de cultivo caracteriza ações importantes, como, o desenvolvimento folicular e o processo de ovulação. Desta forma, o objetivo da revisão foi descrever o papel do FSH e seu mecanismo de ação e receptores no desenvolvimento folicular ovariano. E bem como, o efeito deste sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento folicular.

Assuntos

RESUMO

This study was carried out to verify the presence of DNA of the bovine herpesvirus 1 (BoHV1) in Cumulus Oophorus Complexes (COCs) and blood from the cows naturally infected by BoHV1. COCs from 15 donors were obtained through Follicular Aspiration Guided by Ultrassom (OPU). The DNA extraction was accomplished in a pool of COCs of all aspirations from the same donor and in the total blood. After this procedure, the Nested-PCR reactions were accomplished. The DNA of BoHV1 was identified in the pool of COCs from three serumpositive donors, but it was not detected in none of the serum-negative samples. However, no viral DNA was found in sanguine samples, even in those from the serum-positive animals. All samples were subjected to Nested-PCR for detection of BoHV5, but no positive result was found. The obtained results allow concluding the viral DNA could be present in ovarian structures of the cows naturally infected by BoHV1.

O objetivo deste estudo foi verificar a presença do DNA do herpesvirus bovino 1 (BoHV1) em Complexos Cumulus Oóforus (COCs) e sangue de vacas naturalmente infectadas. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras por meio de aspiração folicular guiada por ultrassom (OPU). A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total. Após este procedimento, seguiu-se a realização das reações de Nested-PCR. O DNA do BoHV1 foi identificado no pool de COCs de três doadoras soropositivas, não sendo detectado em nenhuma das amostras soronegativas. Entretanto, não foi encontrado DNA viral em amostras sanguíneas, mesmo nas oriundas de animais soropositivos. Todas as amostras de sangue e COCs foram submetidas à Nested-PCR para a detecção do BoHV5, não sendo encontrado nenhum resultado positivo. Os resultados obtidos permitem concluir que o DNA viral pode estar presente em estruturas ovarianas de vacas infectadas naturalmente pelo BoHV1.

Assuntos

RESUMO

The follicle stimulating hormone (FSH) is a heterodimeric glycoprotein synthesized and secreted in the pituitary anterior portion (adenohypophysis). The FSH performs important actions in the later stages of follicular development and maturation. The FSH exerts multiple functions such as the activation of more than 100 genes encoding different answers. The action of FSH is restricted to the granulosa cells. This gonadotropin acts through the activation of the enzyme adenylate cyclase in the plasma membrane, which forms AMPc from ATP. The AMPc promotes metabolic changes that characterize the gonadotropic action, usually through the phosphorylation of protein kinases. During the physiological process of ovulation, estrogens enhance the stimulatory effect of FSH and cause the release of FSH/LH required for ovulation. The mature follicle itself is responsible for ovulation, as it secrets estradiol, hormone responsible for the pre-ovulatory peak of LH, resulting in ovulation. Thus, the addition of FSH to the culture media characterizes important actions, as the follicular development and the ovulation process. Thus, the revision of the objective was to describe the role of FSH and its mechanism of action and receptor in ovarian follicular development. And as well as the effect of this on survival, activation and follicular growth.(AU)

O hormônio folículo estimulante (FSH) é uma glicoproteína heterodímera sintetizada e secretada na porção anterior da hipófise (adenohipófise). O FSH desempenha ações relevantes nos estádios mais avançados do desenvolvimento e maturação folicular. O FSH exerce múltiplas funções como a ativação de mais de 100 genes que codificam diferentes respostas. A ação do FSH está restrita as células da granulosa. Esta gonadotrofina atua por meio da ativação da enzima adenilciclase na membrana plasmática, a qual forma AMPc a partir de ATP. O AMPc promove as mudanças metabólicas que caracterizam a ação gonadotrópica, normalmente por meio da fosforilação de proteínas-quinases. Durante o processo fisiológico da ovulação, os estrógenos melhoram o efeito estimulador do FSH e provocam a liberação de FSH/LH necessária para a ovulação. O próprio folículo maduro é responsável pela ovulação, pois secreta estradiol, hormônio responsável pelo pico pré-ovulatório de LH, resultando na ovulação. Diante disso, a adição de FSH aos meios de cultivo caracteriza ações importantes, como, o desenvolvimento folicular e o processo de ovulação. Desta forma, o objetivo da revisão foi descrever o papel do FSH e seu mecanismo de ação e receptores no desenvolvimento folicular ovariano. E bem como, o efeito deste sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento folicular.(AU)

Assuntos

RESUMO

Com o presente estudo se verificou através do Teste de Ligação dos Espermatozoides à Membrana Perivitelina da Gema de Ovo a capacidade fecundante dessas células após o descongelamento e adição das soluções Ringer com Lactato, Citrato de Sódio 2,92% e TRIS. O sêmen dos animais foi coletado e realizado os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após o descongelamento foi adicionado os diluentes Ringer com Lactato, Citrato de Sódio 2,92 % e Solução TRIS, os quais continham substâncias protetoras aos espermatozoides. Logo após, foram realizados os Testes de Ligação do Espermatozoide à Membrana Perivitelina da Gema de Ovo e Morfológico. Os parâmetros seminais do sêmen fresco ficaram de acordo com preconizado pela legislação vigente (CBRA,1998). A capacidade de ligação dos espermatozoides à membrana perivitelina da gema do ovo foi semelhante entre os tratamentos (P>0,05), mas foi observada correlação positiva entre a motilidade espermática e a capacidade de ligação (P<0,05). A diluição do sêmen criopreservado com soluções isoosmóticas após o descongelamento pode ser útil na manutenção da qualidade espermática e no aumento do volume existente a fim de otimizar a realização de testes e biotecnologias reprodutivas in vitro.(AU)

The present study was verified by testing for binding of sperm to the perivitelline membrane of the egg yolk fertilizing capacity of these cells after thawing and addition of Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS Solution. The semen of animals was collected and performed the standard procedures of analysis and cryopreservation seminal. After thawing was added the solutions Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS, which contained protective substances to sperm and performed the tests in vitro Sperm-Perivitelline Membrane egg Binding and Morphology. The seminal parameters of fresh semen were recommended according to current legislation. The binding capacity of the sperm membrane perivitelline egg yolk was similar between treatments(P>0,05), but there was a positive correlation between sperm motility and binding capacity (P<0,05). Thus, the dilution of semen cryopreserved with solutions isoosmóticas after thawing can be useful in maintaining the quality of sperm and increase existing volume to optimize the testing and reproductive biotechnologies in vitro.(AU)

Assuntos

RESUMO

Com o presente estudo se verificou através do Teste de Ligação dos Espermatozoides à Membrana Perivitelina da Gema de Ovo a capacidade fecundante dessas células após o descongelamento e adição das soluções Ringer com Lactato, Citrato de Sódio 2,92% e TRIS. O sêmen dos animais foi coletado e realizado os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após o descongelamento foi adicionado os diluentes Ringer com Lactato, Citrato de Sódio 2,92 % e Solução TRIS, os quais continham substâncias protetoras aos espermatozoides. Logo após, foram realizados os Testes de Ligação do Espermatozoide à Membrana Perivitelina da Gema de Ovo e Morfológico. Os parâmetros seminais do sêmen fresco ficaram de acordo com preconizado pela legislação vigente (CBRA,1998). A capacidade de ligação dos espermatozoides à membrana perivitelina da gema do ovo foi semelhante entre os tratamentos (P>0,05), mas foi observada correlação positiva entre a motilidade espermática e a capacidade de ligação (P<0,05). A diluição do sêmen criopreservado com soluções isoosmóticas após o descongelamento pode ser útil na manutenção da qualidade espermática e no aumento do volume existente a fim de otimizar a realização de testes e biotecnologias reprodutivas in vitro.

The present study was verified by testing for binding of sperm to the perivitelline membrane of the egg yolk fertilizing capacity of these cells after thawing and addition of Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS Solution. The semen of animals was collected and performed the standard procedures of analysis and cryopreservation seminal. After thawing was added the solutions Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS, which contained protective substances to sperm and performed the tests in vitro Sperm-Perivitelline Membrane egg Binding and Morphology. The seminal parameters of fresh semen were recommended according to current legislation. The binding capacity of the sperm membrane perivitelline egg yolk was similar between treatments(P>0,05), but there was a positive correlation between sperm motility and binding capacity (P<0,05). Thus, the dilution of semen cryopreserved with solutions isoosmóticas after thawing can be useful in maintaining the quality of sperm and increase existing volume to optimize the testing and reproductive biotechnologies in vitro.

Assuntos

RESUMO

A contagem de células somáticas (CCS) determina a quantidade de leucócitos e células epiteliais presentes no leite. Em caso de inflamação (mastite subclínica ou clínica), há um aumento considerável na CCS, principalmente de neutrófilos. É importante quantificar e qualificar os tipos celulares presentes para conhecer o grau de inflamação e caracterizar como aguda ou crônica. O objetivo deste trabalho foi testar quatro métodos de coloração de células somáticas; broadhurst-Paley, hematoxilina-eosina, corante Panótico® e May Grunwald-Giemsa por meio da microscopia óptica e determinar a mais adequada para nossas condições de laboratório. Diante dos dados obtidos, elegeu-se a coloração de associação de eosina e azul de metileno (May Grunwald-Giemsa) com a qual se obteve resultados variando entre 60.000 e 58.690.000 células/mL em diferentes amostras de leite bovino. Não foi possível quantificar as células pelos outros três métodos de coloração devido às alterações morfológicas exacerbadas das mesmas.

The somatic cell count (SCC) determines the amount of leukocytes and epithelial cells present in milk. In case of inflammation (subclinical or clinical), there is a considerable increase in SCC, especially neutrophils. It is important to quantify and qualify the cell types present to know the degree of inflammation and characterized as acute or chronic. The objective was to test four staining methods of somatic cells; Broadhurst-Paley, hematoxylin-eosin stain Panoptic and May Grunwald-Giemsa by light microscopy and determine the most suitable for our laboratory conditions. Considering the available data, was elected the association of eosin staining and methylene blue (May-Grunwald Giemsa) with which they obtained results ranging from 60,000 to 58,690,000 cells / ml in different samples of bovine milk. It was not possible to quantify the cells by the other three staining methods due to morphological changes exacerbated them.

Assuntos