RESUMO
Post-splicing activities have been described for a subset of shuttling serine/arginine-rich splicing regulatory proteins, among them SF2/ASF. We showed that growth factors activate a Ras-PI 3-kinase-Akt/PKB signaling pathway that not only modifies alternative splicing of the fibronectin EDA exon, but also alters in vivo translation of reporter mRNAs containing the EDA binding motif for SF2/ASF, providing two co-regulated levels of isoform-specific amplification. Translation of most eukaryotic mRNAs is initiated via the scanning mechanism, which implicates recognition of the m7G cap at the mRNA 5'-terminus by the eIF4F protein complex. Several viral and cellular mRNAs are translated in a cap-independent manner by the action of cis-acting mRNA elements named internal ribosome entry sites that direct internal ribosome binding to the mRNA. Here we use bicistronic reporters that generate mRNAs carrying two open reading frames, one translated in a cap-dependent manner while the other by internal ribosome entry site-dependent initiation, to show that in vivo over-expression of SF2/ASF increases the ratio between cap-dependent and internal ribosome entry site-dependent translation. Consistently, knocking-down of SF2/ASF causes the opposite effect. Changes in expression levels of SF2/ASF also affect alternative translation of an endogenous mRNA, that one coding for fibroblast growth factor-2. These results strongly suggest a role for SF2/ASF as a regulator of alternative translation, meaning the generation of different proteins by the balance among these two translation initiation mechanisms, and expand the known potential of SF2/ASF to regulate proteomic diversity to the translation field.
Assuntos
Processamento Alternativo , Proteínas Nucleares/fisiologia , Iniciação Traducional da Cadeia Peptídica , Biossíntese de Proteínas/genética , Proteoma/genética , Linhagem Celular , Fator 2 de Crescimento de Fibroblastos/genética , Humanos , Fases de Leitura Aberta , RNA Mensageiro/metabolismo , RNA Interferente Pequeno/farmacologia , Proteínas de Ligação a RNA , Ribossomos/metabolismo , Fatores de Processamento de Serina-ArgininaRESUMO
En el presente trabajo se generaron células dendríticas (DC) a partir de precursores de médula ósea de ratas en presencia de GM-CSF e IL-4. Bajo estas condiciones experimentales obtuvimos gran número de DC maduras con típica morfología dendrítica y con elevada expresión de moléculas MHC clase II. También se aislaron DC de bazo de ratas mediante una técnica basada en propiedades características de estas células. La pureza de las DC fue superior al 90 por ciento de acuerdo a la morfología y la expresión de moléculas MHC clase II. Posteriormente se estudió la capacidad de inducir respuesta inmune primaria contra ovoalbúmina (OVA) de DC derivadas de médula ósea, DC esplénicas inmaduras y DC esplénicas cultivadas 24h en presencia de GM-CSF (maduras), incubadas con OVA. Tanto las DC de bazo como las de médula ósea fueron capaces de inducir respuestas de hipersensibilidad tipo demorada (DTH) positivas. Las DC maduras de bazo mostraron una capacidad de inducir respuesta inmune primaria mayor que las DC inmaduras, ya que mostraron valores más altos de DTH (p<0,05). Esta diferencia correlacionó con una mayor expresión de moléculas del MHC clase II por parte de las DC maduras.
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Ratos , Células da Medula Óssea , Células Dendríticas , Baço , Células da Medula Óssea , Células Dendríticas , Antígenos de Histocompatibilidade Classe II , Ovalbumina , Fenótipo , Ratos WistarRESUMO
En el presente trabajo se generaron células dendríticas (DC) a partir de precursores de médula ósea de ratas en presencia de GM-CSF e IL-4. Bajo estas condiciones experimentales obtuvimos gran número de DC maduras con típica morfología dendrítica y con elevada expresión de moléculas MHC clase II. También se aislaron DC de bazo de ratas mediante una técnica basada en propiedades características de estas células. La pureza de las DC fue superior al 90 por ciento de acuerdo a la morfología y la expresión de moléculas MHC clase II. Posteriormente se estudió la capacidad de inducir respuesta inmune primaria contra ovoalbúmina (OVA) de DC derivadas de médula ósea, DC esplénicas inmaduras y DC esplénicas cultivadas 24h en presencia de GM-CSF (maduras), incubadas con OVA. Tanto las DC de bazo como las de médula ósea fueron capaces de inducir respuestas de hipersensibilidad tipo demorada (DTH) positivas. Las DC maduras de bazo mostraron una capacidad de inducir respuesta inmune primaria mayor que las DC inmaduras, ya que mostraron valores más altos de DTH (p<0,05). Esta diferencia correlacionó con una mayor expresión de moléculas del MHC clase II por parte de las DC maduras. (Au)