RESUMO
Leptospirosis is an important zoonosis that causes reproductive disorders in swine. The isolation of leptospires from aborted fetuses, stillbirths and weak piglets was obtained in several occasions, however, the bacteria was never isolated from apparently healthy piglets born from apparently healthy infected dams. Six sows of the Landrace breed with a known date of service and pregnancy confirmed by ultrasonography were infected intravenously with 5ml of Leptospira interrogans serovar Canicola inoculum between 76 and 90 days of gestation, and one week after farrowing, at least one piglet per sow was euthanized and samples of liver, kidneys, lungs, heart, spleen and gastric content were taken and examined by PCR. Reproductive disorders or any clinical sign of infection were not observed in the inoculated sows. The piglets born from these animals presented no clinical signs or macroscopic lesions that could be attributed to leptospirosis. All inoculated sows presented anti-leptospires antibodies by microscopic serum-agglutination test (MAT) in the postinoculation serum samples and leptospires were not found in the urine as well as were not detected by PCR applied in this material, however, PCR accomplished in kidneys and liver from a euthanized sow presented positive results. Of the total of 12 euthanized piglets, 10 (83.3%) presented positive results by PCR in at least one of the kidney, liver, heart, spleen, lung and gastric content samples. The present study reports the vertical transmission of the infection and the detection of leptospires in clinically healthy piglets born from experimentally infected sows, which is important of the epidemiological point of view as the maintenance of clinically healthy infected animals may allow the persistence of the bacteria in the herd, exposing other animals to the risk of infection.
A Leptospirose é uma importante zoonose que causa transtornos reprodutivos em suínos. O isolamento de leptospiras de fetos abortados, natimortos e leitões fracos foi obtido em várias ocasiões, porém, a bactéria nunca foi isolada de leitões aparentemente saudáveis nascidos de matrizes com infecção subclínica. Seis matrizes da raça Landrace com data de serviço conhecida e gravidez confirmada por ultrasonografia foram infectadas entre 76 e 90 dias de gestação por via intravenosa com 5 ml de inóculo de Leptospira interrogans sorovar Canicola, e uma semana após o parto, pelo menos um leitão por matriz foi eutanaziado e foram colhidas amostras de fígado, rins, pulmões, coração, baço e conteúdo gástrico para exame por PCR. Transtornos reprodutivos ou qualquer sinal clínico de infecção não foram observados nas matrizes inoculadas. Os leitões nascidos destes animais não apresentaram sinais clínicos ou lesões macroscópicas que poderiam ser atribuídos à leptospirose. Todas as matrizes inoculadas apresentaram anticorpos anti-leptospiras no teste de soroaglutinação microscópica (MAT) nas amostras de soros colhidas após a inoculação, e não foram encontradas leptospiras na urina como também não foram detectadas pela PCR aplicada neste material, porém, a PCR realizada em rins e fígado de uma matriz eutanaziada apresentou resultado positivo. Dos 12 leitões eutanaziados, 10 (83,3%) apresentaram resultados positivos na PCR em pelo menos uma das amostras de rim, fígado, coração, baço, pulmão e conteúdo gástrico. O presente estudo relata a transmissão vertical da infecção e a detecção de leptospiras em leitões clinicamente saudáveis nascidos de matrizes infectadas experimentalmente, o que é importante do ponto de vista epidemiológico, pois a manutenção de animais com infecção subclínica pode permitir a persistência da bactéria no rebanho, expondo outros animais ao risco de infecção.
RESUMO
Three leptospiral bacterins, produced with different serovars of Serogroup Sejroe, namely the hardjo (bacterin A), wolffi (bacterin B) and guaricura (bacterin C), were evaluated in male hamsters (Mesocricetus auratus) by comparing the agglutinating and neutralizing antibodies titers using microscopic agglutination (MAT) and in vitro growth inhibition (GIT) tests. The immunization schedule was based on two 1.0 mL doses of non-diluted formalininactivated whole culture bacterin given through subcutaneous route with 10-day interval. The challenge was performed ten days after the second vaccine dose, when the animals were inoculated with 0.2 mL of non-inactivated cultures of each serovar through intraperitoneal route. On the 21st post-challenge day (PCD), all animals were bled and their sera were joined in pools (n=8) and tested by MAT and GIT. All vaccinated and control animals presented no clinical signs of leptospirosis after the challenge, but the serovar guaricura was isolated from the kidneys of control animals on the 21st PCD. The MAT results showed cross agglutinins between serovars hardjo and wolffi, and between wolffi and guaricura. The GIT results revealed the presence of cross neutralizing antibodies between serovars wolffi or guaricura against hardjo, wolffi and guaricura. It was found that the tested strain of serovar hardjo did not produce detectable levels of neutralizing antibodies, indicating its poor immunogenicity.
RESUMO
It was evaluated the highest working dilution of the sodium hypochlorite solution (available as household and laundry bleach, with 2.5% of active chlorine) still effective in inactivating Mycobacterium fortuitum in the presence of different levels of bovine feces as organic soil. The experiments were conducted "in vitro" using filter paper as carriers. The time of contact was one hour at the temperature range of 4 to 8C. The blocking of the desinfectant activity was achieved by the dilution using a solution of 0.5% sodium thiosulphate with 0.05% twenn-80 (v/v). The remaining microrganisms were cultivated in Lowenstcin-Jensen culture medium and the number of colonies forming unities was statiscally evaluated by the MannWhitneyTest. The results showed that the organic soil affected the desinfectant activity. The working dilutions calculated were 1:64 and 1:16, respectively, with and without organic soil. In working dilutions higher than 1:64 the regularity of the desinfectant action was very poor.
Foi investigada a maior diluição do hipoclorito de sódio comercial com 2,5% de cloro ativo (água de lavadeira) capaz de inativar o Mycobacterium fortuitum em presença de níveis variáveis de fezes de bovino como fonte de matéria orgânica. Os ensaios foram conduzidos de modo que o desinfetante atuasse durante 60 minutos à temperatura de 4 a 8C. A neutralização da ação do desinfetante foi obtida com a solução de tiossulfato de sódio a 0,5% e tween-80 a 0,05% (v/v). Os microrganismos sobreviventes foram recuperados em meio de Lowenstein-Jensen. A quantificação das unidades formadoras de colônias (U.F.C.) foi analisada pelo Teste U" de Mann-Whitney. Os resultados obtidos demonstraram que a presença de fezes bovinas prejudicou a atividade micobactericida do desinfetante ensaiado. Foi possível constatar-se que as diluições de trabalho capazes de determinar a redução de 70% do número de U.F.C. foram de 1:64 e 1: 16, respectivamente, em ausência e presença de matéria orgânica. Em diluições de trabalho superiores ao valor de 1:64 a atividade micobactericida do hipoclorito de sódio foi muito irregular.
RESUMO
After inoculating L. interrogans serovar pomona in 75 primiparous hamsters (Mesocricetus auratus), the invasiveness of leptospires into lhe ovaries and lhe ability in causing ovary morphologic alterations were investigated by means of microscopic examination and bacterial isolation. For this purpose, 75 hamsters were inoculated with 0.5 ml of virulent strain containing 30-40 leptospires by the microscopic field and the other 15 hamsters were held as the uninfected controls. Signs and symptoms (prostration, tachypnea, rufled hair, jaundice, and nasal, bucal and perineal hemorrage) were detected in all inoculated animals. The animals were killed in the agonic state of the illness, which were done through 4th and 7th day post inoculation. The ovaries were taken asseptically during the necropsies, thoroughly washed using the sterile phosphate buffered saline, in order to eliminate the possible external contamination. The fresh ovary samples were submitted to the dark field direct microscopic examination. After the formalin fixation, the specimens were stained by means of histopathologic techniques using the Levaditi and Hematoxylin Eosin stains. The ovary smears were also examined by the direct fluorescent antibody technique andlhe bacterial isolation was carried out in the Fletchers medium. The dark field direct microscopic examination was found tobe less sensitive in demonstrati
De 90 hamsters primíparas com 80 a 120 gramas de peso vivo, 75 foram inoculadas com a dose individual de 0,5 ml de estirpe virulenta do sorotipo pomona (30 a 40 leptospiras ativas por campo microscópico, no aumento de 200 vezes) e as 15 remanescentes constituíram o grupo testemunho não infectado. Todos os animais tratados com leptospiras apresentaram os sinais da infecção (prostração, taquipnéia, eriçamento do pelame, icterícia e hemorragias nasal, bucal e perineal) e foram sacrificados por ocasião da fase agônica da doença, situada entre o quarto e o sétimo dia da inoculação. Nesta oportunidade, os ovários foram colhidos em condições assépticas e submetidos à técnica de visualização de leptospiras (exame direto em microscopia de campo escuro, coloração argêntica de Levaditi e reação de imunofluorescência direta), cultivo em meio de Fletcher e exame histopatológico (coloração de hematoxilina e eosina). A ocorrência de uma possível contaminação estabelecida durante a retirada dos ovários foi investigada através da lavagem em solução salina tamponada estéril. As leptospiras foram demonstradas em todos os ovários do grupo de animais experimentalmente inoculados (lavados e não lavados), através da coloração de Levaditi, reação imunofluorescência direta e também no cultivo em meio de Fletcher. O exame direto em microscopia de campo escuro mostrou ser uma técnica muito pouco sensível
RESUMO
It was evaluated the highest working dilution of the sodium hypochlorite solution (available as household and laundry bleach, with 2.5% of active chlorine) still effective in inactivating Mycobacterium fortuitum in the presence of different levels of bovine feces as organic soil. The experiments were conducted "in vitro" using filter paper as carriers. The time of contact was one hour at the temperature range of 4 to 8C. The blocking of the desinfectant activity was achieved by the dilution using a solution of 0.5% sodium thiosulphate with 0.05% twenn-80 (v/v). The remaining microrganisms were cultivated in Lowenstcin-Jensen culture medium and the number of colonies forming unities was statiscally evaluated by the MannWhitneyTest. The results showed that the organic soil affected the desinfectant activity. The working dilutions calculated were 1:64 and 1:16, respectively, with and without organic soil. In working dilutions higher than 1:64 the regularity of the desinfectant action was very poor.
Foi investigada a maior diluição do hipoclorito de sódio comercial com 2,5% de cloro ativo (água de lavadeira) capaz de inativar o Mycobacterium fortuitum em presença de níveis variáveis de fezes de bovino como fonte de matéria orgânica. Os ensaios foram conduzidos de modo que o desinfetante atuasse durante 60 minutos à temperatura de 4 a 8C. A neutralização da ação do desinfetante foi obtida com a solução de tiossulfato de sódio a 0,5% e tween-80 a 0,05% (v/v). Os microrganismos sobreviventes foram recuperados em meio de Lowenstein-Jensen. A quantificação das unidades formadoras de colônias (U.F.C.) foi analisada pelo Teste U" de Mann-Whitney. Os resultados obtidos demonstraram que a presença de fezes bovinas prejudicou a atividade micobactericida do desinfetante ensaiado. Foi possível constatar-se que as diluições de trabalho capazes de determinar a redução de 70% do número de U.F.C. foram de 1:64 e 1: 16, respectivamente, em ausência e presença de matéria orgânica. Em diluições de trabalho superiores ao valor de 1:64 a atividade micobactericida do hipoclorito de sódio foi muito irregular.
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The influence of BCG on the resistance of hamsters experimentally infected with Leptospira interrogans serovar pomona was investigated. Forty-eight young male hamsters were used as the follow: 23 of them have administered two intraperitoneal dosis of BCG with seven days of interval: the remaining 25 were treated with placebo (Souton solution) in the same way as in the BCG treatment. On the third day after the second BCG or placebo administration, each animal was inoculated with 0.5 ml of a suspension of L. pomona through the intraperitoneal route. The animals were observed for signs and symptoms of leptospirosis during a period of 21 days and those in the agonic state of disease were killed and their kidney and serum samples were taken for the demonstration of antibodies and leptospiroses, by means of serum agglutination test and by the direct culture of kidney fragments. All of the survivors were killed at the 21st day post infection and evaluated for antibodies an leptospires, as described above. For the BCG treated group, no death was recorded (0/23 or 0,00%) whereas in the control group 80% of deaths (20/25) were observed.
Foi investigada a influência do BCG sobre o grau de resistência apresentado pelo hamster à infecção experimental por leptospiras. Foram utilizados 48 animais (machos com peso entre 60 a 80 gramas) dos quais 23 tratados com o BCG (duas aplicações de 0,5 ml, via intraperitonial com intervalo de sete dias) e 25 tratados com placebo (meio de Souton) nas mesmas condições referidas. No terceiro dia após a segunda dose do imunomodulador ou placebo, os animais foram experimentalmente infectados, via intraperitonial, com um inóculo de 0,5 ml de uma cultura de L. interrogans sorotipo pomona. Os animais ficaram em observação durante 21 dias e os que apresentaram sinais da doença foram sacrificados em fase agônica. A esse tempo foi realizada a colheita de materiais destinados a confirmar o estabelecimento da infecção experimental, através de métodos diretos (visualização em campo escuro e/ou cultura em meio de Retcher) e indiretos (reação de soroaglutinação microscópica). As proporções de animais mortos por leptospirose dentre os infectados foram de 0/23 (0,00%) e de 20/25 (80,00%), respectivamente, para o grupo tratado com o BCG e o grupo placebo.
RESUMO
The influence of the organic matter on the mycobactericidal activity of five proprietary disinfectant of veterinary use was evaluated using a 0.0005% (moist weight) suspension of Mycobacterium fortuitum; the organic matter was represented either by bovine faeces or serun. The five disinfectant products tested uere: "A" - sodiun hypochloride; "B" - amixture of phenols and cresylic acid; "C" - a mixture of aldehydes; "D" - iodophor; "E" - phenolyc compounds. The contact period of each disinfectant with the suspension of M. fortuimm in the presence of the organic matter was 60 minutes at temperature between 4 to 8 ºC. The disinfectant action was interrupted after the established time using nutrient broth containing 5% sterilized rabbit serun added with 0.05% Tween 80 for the disinfectants "C", "D" and "E"; disinfectant "B" was neutralized with nutrient broth enriched with rabbit serun added with 3.0% Tween 80; disinfectant "A" was treated by 5% sodium thiosulphate added with 0.05% Tween 80. The isolation of the viable microorganisms was carried out by culturing in the Lowenstein-Jensen medium and counting the Colonies Forming Unit (CFU). Disinfectants "A", "B" and "C" were found to be highly effective even in the presence of the serun or faeces; the percentage of the CFU reduction was above 55.0% when compared to controls. Disinfectant "D" was found to have a varied behavior with
Tendo em vista que a maioria dos desinfetantes químicos tem a sua atuação antimicrobiana prejudicada pela presença de matéria orgânica, o objetivo do presente trabalho foi o de investigar, comparativamente, a influência da presença de fezes ou de soro de bovinos sobre a atividade micobactericida de desinfetantes químicos de uso pecuário. Foram ensaiados cinco desinfetantes: A - hipoclorito de sódio; B - combinação de fenóis e cresóis; C - combinação de aldeídos e amorno quaternário; D - iodóforo; E - composto fenólico. A suspensão microbiana foi representada por uma cultura de Mycobactenum fortuitum na concentração de 0,0005% (peso úmido). 0 período de atuação dos desinfetantes foi de 60 minutos, à temperatura de 4 a 8 C. A interrupção da ação dos desinfetantes foi estabelecida pelo emprego de inativantes. A recuperação dos microrganismos remanescentes foi obtida por cultivo em meio de Lowenstein-Jensen, com quantificação do número de unidades formadoras de colônias (U.F.C.). Os produtos "A", B" e "C" revelaram possuir atividade micobactericida em presença de matéria orgânica, com percentuais de redução do número de U.F.C. em relação aos controles, superiores a 55,0%. O produto "D" apresentou variabilidade de comportamento frente ao sistema de ensaio adotado. 0 produto "E" mostrou-se destituído de poder micobactericida. A despeito de apresentar percentuais de redução de U.F.C
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The influence of BCG on the resistance of hamsters experimentally infected with Leptospira interrogans serovar pomona was investigated. Forty-eight young male hamsters were used as the follow: 23 of them have administered two intraperitoneal dosis of BCG with seven days of interval: the remaining 25 were treated with placebo (Souton solution) in the same way as in the BCG treatment. On the third day after the second BCG or placebo administration, each animal was inoculated with 0.5 ml of a suspension of L. pomona through the intraperitoneal route. The animals were observed for signs and symptoms of leptospirosis during a period of 21 days and those in the agonic state of disease were killed and their kidney and serum samples were taken for the demonstration of antibodies and leptospiroses, by means of serum agglutination test and by the direct culture of kidney fragments. All of the survivors were killed at the 21st day post infection and evaluated for antibodies an leptospires, as described above. For the BCG treated group, no death was recorded (0/23 or 0,00%) whereas in the control group 80% of deaths (20/25) were observed.
Foi investigada a influência do BCG sobre o grau de resistência apresentado pelo hamster à infecção experimental por leptospiras. Foram utilizados 48 animais (machos com peso entre 60 a 80 gramas) dos quais 23 tratados com o BCG (duas aplicações de 0,5 ml, via intraperitonial com intervalo de sete dias) e 25 tratados com placebo (meio de Souton) nas mesmas condições referidas. No terceiro dia após a segunda dose do imunomodulador ou placebo, os animais foram experimentalmente infectados, via intraperitonial, com um inóculo de 0,5 ml de uma cultura de L. interrogans sorotipo pomona. Os animais ficaram em observação durante 21 dias e os que apresentaram sinais da doença foram sacrificados em fase agônica. A esse tempo foi realizada a colheita de materiais destinados a confirmar o estabelecimento da infecção experimental, através de métodos diretos (visualização em campo escuro e/ou cultura em meio de Retcher) e indiretos (reação de soroaglutinação microscópica). As proporções de animais mortos por leptospirose dentre os infectados foram de 0/23 (0,00%) e de 20/25 (80,00%), respectivamente, para o grupo tratado com o BCG e o grupo placebo.