RESUMO

En este estudio fue analizada la parasitemia y el parasitismo en el líquido ascítico (LA), membrana peritoneal (MP) y en otros tejidos de 40 ratones machos NMRI durante la infección aguda. Los ratones (20 ratones por grupo) fueron inoculados por vía intradérmica con tripomastigotos metacíclicos linaje T.cr I de las cepas P6 y P11 obtenidos de Rhodnius prolixus. Formas delgadas y gruesas de tripomastigotos fueron encontradas en la sangre de todos los ratones. En los ratones infectados con la cepa P6 los tripomastigotos aparecieron primero en él LA a los 13 días pi y en la sangre a los 18 días pi, en los ratones infectados con la cepa P11 los parásitos se observaron primero en la sangre a los 15 días pi y en él LA a los 22 días pi. Los ratones desarrollaron emaciación, disnea, hirsutismo, pérdida de la actividad motora de las patas posteriores y hepatoesplenomegalia. Los ratones fueron sacrificados a los 39 días pi. El estudio histológico mostró que T. cruzi prolifera formando nidos de amastigotos y tripomastigotos en la MP. Los parásitos también fueron encontrados en el músculo esquelético y en el corazón de los ratones infectados con la cepa P6. La inmunotinción con PAP reveló antígeno de T. cruzi en las secciones de esófago, estómago, intestino delgado y grueso, bazo, riñón, hígado, próstata y pene de los ratones. Estos resultados confirmaron que las cepas P6 y P11 desarrollaron anormalidades histopatológicas en el tracto gastrointestinal, renal y órgano reproductivo. La localización intra-peritoneal de los parásitos y la acumulación de fluido peritoneal, reveló ascitis y peritonitis causada por el incremento de líquido en la cavidad peritoneal y destrucción del tejido peritoneal de los ratones. El presente estudio reporta por primera vez la proliferación de tripomastigotos en la cavidad peritoneal cinco días antes de encontrarse en la sangre periférica para la cepa P6 causando daño intraperitoneal y muerte del modelo murino utilizado.

In this study we analyzed the parasitemia and parasitism in the ascitic fluid (AF), peritoneal membrane (PM) and in other tissues of 40 NMRI male mice during acute infection. Mice (20 mice per group) were inoculated by intradermal route with metacyclic trypomastigotes T.cI lineage of P6 or P11 strains obtained from Rhodnius prolixus. Slender and stout forms were observed in the blood of all mice. In infected mice with P6 strain the trypomastigotes were observed first in the AF at day 13 pi and in blood at day 18 pi. Meanwhile in infected mice with P11 strain trypomastigotes were observed first in the blood at day 15 pi and in the AF at day 22 pi. Infected mice showed emaciation, dyspnea, bristled hair, loss of motor activities in the rear limbs and hepatosplenomegaly. Mice were sacrificed at day 39 pi. Histological finding indicated that T. cruzi proliferates forming amastigotes and trypomastigotes nests in the PM. Parasites were also observed in skeletal muscle of the mice and in the heart of infected mice with P6 strain. Imunostaining with PAP revealed T. cruzi antigen in esophagus, stomach, thin and thick intestine, spleen, and kidney, liver, prostate and penis. The results show that P6 and P11 colonized and produced abnormalities in the gastrointestinal tract, renal and reproductive organs. Intra-peritoneal localization of parasites and accumulation of peritoneal fluid, revealed ascites and peritonitis caused by increase of fluid in the peritoneal cavity and destruction of the membrane peritoneal of the mice. This study reports for the first time the proliferation of trypomastigotes in the peritoneal cavity five days earlier than in peripheral blood for the P6 strain causing intra-peritoneal damage and death in the murine model used.

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Se evalúa la resistencia a las reinfecciones por Trypanosoma cruzi, en crías de ratas chagásicas. Se utilizaron 30 crías machos (`) de madres infectadas y 30 crías ` de madres sanas, divididos en grupos de 10 crías c/u (I, II, III) y (IV, V, VI). Los grupos (I, IV) y (II, V) fueron inoculados y reinoculados por vía intradérmica con 5×104 tripomastigotes metacíclicos de T. cruzi Pl (homóloga) y Y (heteróloga) provenientes de Rhodnius prolixus, con intervalos de un mes. Los grupos controles (III, VI) recibieron inyecciones de solución salina fisiológica. Las pruebas parasitológicas y serológicas realizadas en ambos grupos de crías infectadas a los 10, 20 y 30 días post-inoculación (pi), mostraron parasitemias significativamente mayores en las crías de madres sanas durante la fase aguda de la primo infección y ausencia de tripanosomas sanguícolas después de la 1ra y 2da reinoculación, un incremento significativo en los niveles anticuerpos anti-T. cruzi a partir de la inoculación inicial y reinoculaciones. Los análisis histopatológicos e inmunohistoquímicos en las secciones de corazón y músculo esquelético de las crías sacrificadas a los 45, 75 y 105 días pi, revelaron instauración progresiva de una miocarditis y miositis aguda de variable intensidad acompañada de escasos nidos de amastigotes y agravamiento del cuadro patológico producido por la inoculación inicial; presencia de abundantes depósitos antigénicos que se intensificaron con las reinoculaciones. En conclusión, la resistencia de las crías de madres infectadas a las reinfecciones por cepas T. cruzi homóloga y heteróloga, es producida, primero por la transferencia vertical del parásito y/o de anticuerpos humorales desde la madre infectada a su progenie, y segundo por un proceso de sensibilización del hospedador por las continuas descargas antigénicas producidas al ser destruidos los parásitos inoculados.

The resistance to reinfection by Trypanosome cruzi in chagasic rat offspring was evaluated. Thirty male offspring (`) from infected mothers and 30 offspring ` from healthy mothers were used, divided into groups of 10 offspring each (I, II, III) and (IV, V, VI). The groups (I, IV) and (II, V) were inoculated and reinoculated by intradermal route with 5 × 104metacyclictrypomastigotes of homologous (pL) and heterologous (Y) strains of T. cruzi, from laboratory infected Rhodnius prolixus, at one-month intervals. The control groups (III, VI) received saline injections. The parasitological and serological testing performed on both groups of infected offspring at 10, 20 and 30 days post-reinoculation (pr) showed significantly higher parasitemia levels in offspring from healthy mothers during the acute phase of the primary infection, the absence of bloodstream trypomastigotes after the 1st and 2nd reinoculation, and a significant increase in anti-T. cruzi antibody levels after initial inoculation and reinoculations. The histopathological and immunohistochemical analysis of heart and skeletal muscle sections from the offspring sacrificed at 45, 75 and 105 days pi, revealed the gradual establishment of myocarditis and acute myositis of variable intensity accompanied by few nests of amastigotes, a worsening of the pathologic picture produced by the initial inoculation, and the presence of abundant antigenic deposits that intensified with the reinoculations. In conclusion, the resistance of offspring born from chm to homologous and heterologous reinfection by T. cruzi strains, is produced, first, by vertical transmission of the parasites and/or humoral antibodies from infected mothers to their progeny, and second, by a sensibilization process in the host from continuous antigenic downloads produced when the inoculated parasites are destroyed.

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Se reporta la presencia de formas evolutivas de Trypanosoma cruzi en el plasma seminal (PS) de ratones NMRI, inoculados por vía subcutánea con 2x104 tripomastigotes metacíclicos cepa P6 obtenidos de Rhodnius prolixus. Al separar las muestras de sangre a los 15 días pos-infección, un ratón eyaculó espontáneamente y el examen directo del PS reveló la presencia de formas epimastigotes de T. cruzi en activo movimiento mezclados con los espermatozoides. Las preparaciones del PS coloreadas con Giemsa, mostraron formas epimastigotes libres y en división, tripomastigotes y amastigotes extracelulares y dentro de células fagocíticas. Los resultados de este estudio revelaron los diferentes estadios de T. cruzi en el PS de ratón, con morfogénesis similar a como ocurre en el insecto vector. El parasitismo encontrado en el PS del ratón con infección aguda, aporta importante información epidemiológica sobre la vía de transmisión sexual de T. cruzi, principalmente entre la población de reservorios silvestres que se encuentran en áreas endémicas y no endémicas para la enfermedad de Chagas.

We report the presence of evolving forms of Trypanosoma cruzi in the seminal plasma (SP) of NMRI mice subcutaneously inoculated with 2x104 metacyclic trypomastigotes obtained from P6 strain Rhodnius prolixus. When taking blood samples at 15 days post-infection, the mouse spontaneously ejaculated and the direct SP exam revealed the presence of active epimastigotes of T. cruzi mixed with spermatozoids. SP preparations stained with Giemsa showed free and dividing epimastigotes, extracellular trypomastigotes and amastigotes, as well as, within phagocytic cells. The results showed the presence of T. cruzi at the different stages of its life cycle in the mouse PS, observing similar morphogenesis in the PS to the one known in the insect vector. The parasitism found in the SP of this mouse with acute infection, provides important epidemiological information about the T. cruzi pathway of sexual transmission, mainly among the population of wild reservoirs found in endemic and non-endemic areas for Chagas`disease.

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Se evaluó la transmisión congénita de Trypanosoma cruzi en crías de ratas Wistar con infección aguda. Las ratas fueron inyectadas intraperitonealmente con 1,5x10(4) tripomastigotes metacíclicos de la cepa I/PAN/VE/00/PLANALTO linaje TcI. La parasitemia fue significativamente mayor (P<0,05) en las ratas infectadas preñadas (IP) que en las ratas infectadas vírgenes (IV). Las crías de las ratas IP a los 15, 30, 45 y 60 días de nacidas (dn) no mostraron tripanosomas circulantes. El ensayo ELISA reveló aumento progresivo de IgM anti-T. cruzi en el suero de 6 crías (24%) de las ratas IP entre los 15 y 60 dn. La IgG anti-T. cruzi disminuyó progresivamente en las crías de ratas IP y fueron negativos a los 60 dn. Cortes de corazón y músculo esquelético del 15% de las crías con 60 dn de las ratas IP mostraron antígeno de T. cruzi con PAP. ADN de T. cruzi fue detectado por PCR en el suero de 4 crías (16%) a los 60 dn de ratas IP. La presencia de anticuerpos IgM anti- T. cruzi y ADN del parásito en las crías de ratas con infección aguda, pueden ser considerados como un criterio de infección congénita en las crías sin parasitemia patente.

Congenital Trypanosoma cruzi transmission was evaluated in pups of Wistar rats with acute Chagas infection. The rats were injected intraperitoneally with 1.5 x 10(4) metacyclic tripomastigotes from the I/PAN/VE/00/PLANALTO strain TcI lineage. Parasitemia was significantly higher (P<0.05) in the pregnant infected rats (PI) than in the infected virgin rats (VI). The offspring of the PI rats at 15, 30, 45 and 60 days after birth (ab) did not show circulating trypanosomes. An ELISA test revealed progressive increase of anti-T. cruzi IgM in the serum of pups (24%) of the PI rats between 15 and 60 days. Anti-T. cruzi IgM decreased progressively in the PI pups and became negative at 60 ab. Heart and skeletal muscle sections of 15% of the pups of the PI rats at 60 ab showed T. cruzi antigen with PAP. T. cruzi DNA was detected through PRC in the serum of 4 pups (16%) of PI rats at 60 ab. Presence of anti-T. cruzi IgM and parasite DNA in the pups of rats with acute infection can be considered as a criterion of congenital infection in pups without evident parasitemia.

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Se presentan los resultados de un estudio experimental sobre la transmisión congénita de Trypanosoma cruzi en crías de ratas albinas (Rattus norvegicus), cepa Wistar de segunda generación. El curso de la infección chagásica fue evaluado en las ratas infectadas inicialmente (RII) inyectadas con las formas metacíclicas del parásito, en las crías de la primera (C1ªG) y segunda generación (C2ªG), mediante pruebas de diagnóstico seroparasitológicas y molecular (PCR). En las RII se demostró infección aguda caracterizada por parasitemias patentes entre los 12 y 45 días post-inoculación (pi), e incremento en la respuesta inmune humoral con títulos desde 1:64 y 1:2048; en la fase crónica se evidencio ausencia de parasitemias y mantenimiento de una moderada respuesta humoral en el 100% de las madres. Las C1ªG no presentaron tripomastigotes en la sangre circulante, la prueba de IFI, reveló seropositividad apreciable en el 75% de los sueros. En las C2ªG, los exámenes directos de sangre y el hemocultivo, resultaron negativos; los xenodiagnósticos mostraron un 18,2% de positividad. Las pruebas serológicas empleadas (IFI y ELISA) detectaron un 31,8% y 34,1% anticuerpos circulantes anti-T. cruzi. La PCR aplicada a los sueros, presentó un bajo porcentaje de muestras positivas (6,8%) y en los tejidos (corazón y músculo esquelético) se observó una alta positividad de 54,5% y 45,4%, respectivamente. La presencia de formas flageladas en la sangre, la persistencia de la serología positiva por anticuerpos humorales transferidos vía materna y la permanencia de restos de ADN de T. cruzi en sueros y tejidos en un número importante de crías, confirma la infección congénita a su progenie, en segunda generación. Estos resultados son de gran importancia para una mejor comprensión de la epidemiología de la enfermedad de Chagas congénita

The results of the experimental study concerning the congenital transmission of Trypanosoma cruzi in second generation strain Wistar albino rats are presented. The course of the Chagas infection was evaluated in rats initially infected with the metacyclic forms of the parasite (RII) in first (C1stG) and second (C2ndG) generation offspring using parasitological, serological and molecular (PCR) diagnostic tests. In the RII, an acute infection characterized by patent parasitemias between 12 and 45 days post-inoculation and an increase in the humoral immune response with titers of 1:64 and 1:2048 in the chronic phase demonstrated the absence of parasitemia and maintenance of a moderate humoral response in 100% of the mothers. The C1stG did not show tripomastigotes in the blood circulation and the IIF test showed considerable seropositive in 75% of the sera. In C2ndG, direct blood and hemoculture exams performed were negative, while 18.2% of the xenodiagnosis were positive. The serological tests used (IIF and ELISA) detected 31.8% and 34.1% anti-T. cruzi circulating antibodies. The PCR applied to the serum presented a low percentage of positive (6.8%) samples and in tissues (heart and skeletal muscle) high positives of 54.5% and 45.4% respectively were observed. The presence of flagellated forms in the blood, the persistence of serological positive for humoral antibodies transferred by the mother and the permanence of remaining DNA of the T. cruzi in serum and tissues in a significant number of offspring confirm the congenital infection to their offspring in the second generation. These results are of great importance for the better understanding of the epidemiology of Chagas disease

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En el presente trabajo se investiga la inducción de placas ateromatosas en ratas albinas machos, cepa Wistar (Rattus norvegicus) crónicamente infectadas con Trypanosoma cruzi y alimentadas ad libitum con una dieta rica en grasas de origen vegetal, durante tres meses. La infección crónica evidenciada por pruebas sero-parasitológicas, reveló presenciade anticuerpos IgG anti- T. cruzi y ausencia de parasitemiaspatentes. La dieta rica en grasas produjo en las ratas infectadas (A) y sanas (C) un aumento significativo en el peso (P<0,05), en comparación con las ratas controles (B) y sanas (D) sometidas a la dieta normal. El estudio histopatológicode secciones de la arteria aorta de las ratas del grupo A (infectadas/dieta grasa), mostró abundantes depósitoslipídicos, procesos inflamatorios (vasculitis) y placas ateromatosas en formación. En las secciones de corazón y músculo esquelético se evidenció miocarditis y miositis con características de cronicidad sin parasitismo tisular. Las pruebas inmunohistoquímicas aplicadas a los cortes de arteria,corazón y músculo esquelético de las ratas infectadas A (infectadas/dieta-grasa) y B (infectadas/dieta-normal), mostraron abundantes depósitos antigénicos, lo que indica persistencia de antígenos parasitarios. En conclusión, las ratasinfectadas con T. cruzi alimentadas con la dieta rica en grasas, tienen una mayor propección a desarrollar placas ateromatosas.Los resultados demostraron que una dieta hiperlipídicaes un factor de riesgo para el desarrollo de enfermedadateromatosa en individuos con enfermedad de Chagas

This work is focused on the induction of atheromatous plaques in male albino rats (Rattus norvegicus), Wistar, chronically infected with Trypanosoma cruzi and fed ad libitum with diet rich in fats of vegetal origin, during three months. The chronic infection detected by serological and parasitological assays, revealed the presence of antibodies IgG anti- T. cruzi and the absence of patents parasitemias. The diet rich in fats produced in the group of infected rats (A) and the group of healthy rats (C) a significant increase in the weight (P<0,05), in comparison with the control group of infected rats (B) and the group of healthy rats (D), fed with a normal diet. The histopathological study of sections of the aorta arteryof the rats of the group (A) (infected/diet fat), showed abundants lipid deposits, inflammatory processes (vasculitis) and atheromatous plaques in development. The sections of the heart and skeletal muscle showed pictures of a myocarditis and myositis with features of chronic tissue without parasitism. The immunohistochemestry assays applied to the cuts of artery, heart and skeletal muscle of the infected rats A (diet/fat) and B (normal/diet), showed abundants antigen deposits. In conclusion, the rats chronically infected with T. cruzi and fed with a diet rich in fats, have a main propensity to develop atheromatous plaques. The results showed that a hyperlipidic diet is a risk factor for the development of atheromatous disease in individuals with Chagas`disease

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Se investigan los efectos de la ingestión de una dieta con alto contenido en grasas en ratas albinas (R. norvegicus) crónicamente infectadas con Trypanosoma cruzi “Planalto”, mediante pruebas de diagnóstico sero-parasitológicas, cuantificación del Índice de Masa Corporal (IMC), detección de la Proteína C Reactiva (PCR), evaluación de los niveles de lípidos plasmáticos (colesterol total, lipoproteínas de alta densidad - HDL y triglicéridos) y presencia de depósitos lipídicos en la arteria aorta. Durante el curso de la infección chagásica, se detectaron parasitemias patentes entre los 10 y 35 días pi, con un máximo promedio de 36,68±2 trips./mm³ de sangre a los 25 días. A los 90 días pi, se evidenció ausencia de parasitemias y presencia de anticuerpos IgG anti- T. cruzi. Las ratas chagásicas (A) y las sanas (C) sometidas a la dieta rica en grasas, mostraron: diferencias significativas (p<0,05) en el IMC, en comparación con los grupos de ratas sometidas a la dieta normal (B: infectadas y D: sanas); discreta reacción de la PCR en los sueros de las ratas infectadas B; aumento significativo en los niveles de colesterol total, colesterol - HDL y triglicéridos en los grupos A y C en comparación con los grupos controles B y D (p<0,05). El estudio histológico de las arterias de ratas del grupo A, reveló importantes depósitos lipídicos ubicados en la capa muscular próximos a las capas íntima y adventicia. Estos resultados sugieren que el incremento en los niveles de lípidos plasmáticos estimulado por el proceso infeccioso, son los principales mecanismos por el cual T. cruzi podría estar influyendo en la iniciación o progresión de placas ateromatosas

The effects of ingesting a high fat diet on albino rats (R. norvegicus) chronically infected with Trypanosome cruzi “Planalto” were researched using serological and parasitological diagnostic tests, body mass index (BMI) quantification, detection of C-Protein Reactive (CPR), evaluation of the plasmatic lipid levels (total cholesterol, high density lipoproteins HDL and triglycerides) and the presence of lipidic deposits in the aorta artery. During the course of the chagasic infection, patent parasitemias were detected between the ages of 10 and 35 days post-infection (pi) with a maximum average of 36.68 ± 2 tryps/mm³ of blood at 25 days. At 90 days pi, the absence of parasitemias and the presence of IgG anti T. cruzi antibodies were in evidence. The chagasic rats in chronic phase (A) and the healthy controls (C) submitted to a high fat diet showed: 1. Significant variations (p0.05) in the BMI, in comparison with the rat groups receiving a normal diet (B: infected and D: healthy rats); 2. A discrete CRP reaction in the serum of infected rats B; 3. A significant increase was shown in the total cholesterol levels, HDL cholesterol and triglycerides for groups A and C in comparison with control groups B and D (p0.05). The histological study of rat arteries in group A revealed important lipid deposits located in the muscular layer near the intimal and adventitial layer. These results suggest that the increase in plasmatic lipid levels stimulated by the infectious process are the main mechanisms through which T. cruzi could be influencing the initiation or the progression of atheromatous plaque

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Este estudio analizó el efecto de la infección aguda con Trypanosoma cruzi sobre la histología del sistema nervioso central de ratas durante la gestación. Las ratas Wistar fueron infectadas por inoculación intraperitoneal de 5x10(4) tripanosomas sanguícolas de la cepa M/HOM/Bra/53/Y. Para obtener la preñez durante el ascenso de la parasitemia, las ratas en estrus del ciclo menstrual fueron apareadas con los machos a los 12 días posinfección (pi). Ratas vírgenes/infectadas, vírgenes/sanas y sanas/preñadas fueron usadas como controles. Altos niveles de parasitemia patente (PP), de 36 ± 2,9 a 55 ± 3,0 tripanosomas/mm³ de sangre en las ratas con 16 y 22 días de infección y con 6 y 12 días de gestación respectivamente fueron observados. La comparación de la PP entre las ratas infectadas/preñadas y vírgenes/infectadas fue significativa al 1 por ciento. A los 30 días pi las ratas fueron sacrificadas y el cerebro (C) y las regiones cervical (RC), torácica (RT), lumbar (RL) y sacra (RS) de la ME fueron fijadas en formalina al 10 por ciento, deshidratadas e incluidas con Paraplast. Los cortes de 7 μm coloreados con hematoxilina y eosina mostraron reacción inflamatoria de células polimorfonucleares, mononucleares y plasmocitos en contacto con los cuerpos neuronales del C de las ratas infectadas/preñadas. La comparación entre el número de linfocitos en los hemisferios derecho (HD) e izquierdo (HI) de 65 ± 6,3 y 48 ± 4,5 linfocitos en las ratas infectadas/preñadas y de 20 ± 2,0 y 13 ± 1,1 linfocitos en las ratas sanas/preñadas fue significativa (P<0,05). La comparación del número de linfocitos en los HD y HI de las ratas vírgenes/sanas vírgenes/infectadas no reveló diferencias. La disminución de motoneuronas (MN) de 35 ± 3,4 a 16 ± 1,7 en la RC, de 33 ± 3,1 a 21 ± 3,0 en la RT y de 31± 3,8 a 10 ± 1,8 en la RL, de la ME de las ratas infectadas/preñadas fue significativa (P<0,05) en comparación con el número de MN en la ME de las ratas sanas/preñadas....

This study analyzed the effect of acute infection with Trypanosoma cruzi on the histology of Central Nervous System (CNS) of rats during pregnancy. Wistar rats were infected by intraperitonealy inoculation of 5x10(4) blood trypomastigotes of the M/HOM/Bra/53/Y strain. To obtain pregnancies during the ascending phase of parasitemia, rats in estrus of its menstrual cycle were matched with males at days 12 after infection (pi). Virgin/infected, virgin/healthy and healthy/pregnant rats were used as controls. High levels of patent parasitemia (PP) of 36 ± 2.9 to 55 ± 3.0 tripanosomas/mm³ blood, were observed in rats between 16 and 22 infection days and between 6 and 12 pregnancy days respectively. The comparison of the PP between infected/ pregnant rats and virgin/infected rats was significant at 1 percent. At the 30 days pi rats were sacrificed. Brain (B) and regions cervical (CR), thoracic (TR), lumbar (LR) and sacra (SR) of Spinal cord (SC) samples were obtained and fixed in formalin to 10 percent, dehydrated and embedded in Paraplast. The sections (7 μm) stained with Hematoxylin and Eosin showed inflammatory reaction of polymorphonuclear and mononuclear cells and plasmocytes in contact with neurons of B of the infected/pregnant rats. The comparison between lymphocytes number in the right (HR) (65 ± 6.3) and left (HL) (48 ± 4.5) cerebral hemispheres of infected/pregnant rats and of 20 ± 2.0 and 13 ± 1.1 lymphocytes in healthy/pregnant rats was significant (P<0.05). The comparison between lymphocyte number in the HR y HL of the virgin/healthy rats and virgin/infected rats not showed differences. Motoneurons (MN) reduction of 35 ± 3.4 to 16 ± 1.7 in CR, of 33 ± 3.1 to 21 ± 3.0 in TR and of 31± 3.8 to 10 ± 1.8 in LR of the SC of infected/pregnant rats was significant (P<0.05), when they were compared with MN number in SC of healthy/pregnant rats. Reduction of MN of 53 ± 4.9 to 35 ± 3.4 in the CR and of 37 ± 3.3 to 22 ± 1.9 in the SR...

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El presente estudio muestra el desarrollo de fetos de ratones hembras NMRI inoculadas con la cepa M/HOM/BRA/53/Y de trypanosoma cruzi y preñadas durante la fase aguda de la infección. Altos niveles de parasitemias fueron observados en las ratones con 30 días post-infección y 20 días de gestación, en comparación con las detectadas en los ratones vírgenes e infectadas con T. cruzi. En 3 de los fetos (15%) provenientes de dos madres infectadas/gestantes con altas parasitemias, se observaron signos de anomalías congénitas morfológicas y estructurales músculo-esqueléticas. Presentándose en uno de los fetos la formación de dos protuberancias, una sobre el lado dorsal del cuerpo y la otra en la base de la pata inferior izquierda, en otro de los fetos, la pata derecha se desarrolló sobre el lado derecho de la cara y en un tercer feto se formó una protuberancia en la pata anterior izquierda a nivel de la región subescapular. El estudio histopatológico con hematoxilina y eosina de los tejidos muscular esquelético y cardíaco, mostró en el 10% (2/20) de los tejidos fetales, intenso infiltrado celular mononuclear con predominio de linfocitos, macrófagos o histiocitos y monocitos entre las fibras musculares y cardíacas, con discreta miositis y miocarditis. Con la técnica de peroxidada anti peroxidada se observaron abundantes depósitos antigénicos, tanto en placenta como en músculo esquelético de los fetos con alteraciones morfológicas. En los ratones infectadas/gestantes los fetos presentaron reducción del peso corporal y retardo en el crecimiento fetal, así como reducción en el número de fetos de 10 en comparación con 14 fetos de mayor tamaño y aspecto normal desarrollados en las ratonas sanas preñadas.

The present study shows the development of the fetuses from pregnant female mice NMRI inoculated with M/HOM/BRA/53/Y Trypanosoma cruzi strain. The infection revealed the highest levels of patent parasitemia in mice with 30 days postinfection and 20 days of pregnancy in comparison with infected unmated mice. Three fetuses (15%) from two infected mice with high levels of parasitemia, showed morphological and structural muscularskeletal congenital anomalies. Two protuberances were observed, one on the dorsal side of the body, and the other on the left footpad base. In another fetus his right footpad came out from the right part of his face and in the 3rd one it was observed a lump in the left leg, above the level subscapular region. The histophatological study with hematoxilin-eosin staining of skeletal muscle and cardiac tissue, showed in 10% (2/20) of the mice, inflammatory infiltrate with lymphocytes, macrophages and monocytes into muscular and cardiac fibers, with discrete myositis and myocarditis. Peroxidase anti-peroxidase staining showed T. cruzi antigens in placenta and skeletal muscle of the fetuses with morphological alterations. In the pregnant mice, fetuses also showed both, loss of weight and growth retardation, as well as reduction of the number of fetuses to 10 in comparison with 14 fetuses in normal and healthy pregnant mice.

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A light and transmission electron microscopy study was performed in skeletal muscles (SM) Gastrocnemius (G) from mice experimentally infected with Trypanosoma cruzi to determine changes on microvessels (MV) and neuromuscular junction (NMJ) of G. In this study 10 male (mus musculus) (20 g) were infected subcutaneally with 1.10(4) bloodstream trypomastigotes M/DID/Ve/02/DSM strain. Five mice were kept as uninfected controls. The parasites induced a complete paralysis of the rear limbs and death while still in the acute Chagas´disease. The histopathology of SM showed inflammatory cell infiltration by mononuclear and polymorphonuclear leukocytes associated with marked parasitism in the muscle fibers of G. Indirect immunofluorescence revealed interstitial IgG deposit as bands regularly spaced along the nerve terminals at 40 days post-infection (pi). At this time T. cruzi antigens and intracellular amastigotes nests were also observed. The marked inflammatory response and morphological changes in the SM were confirmed by transmission electron microscopy. Capillary ultrastructure was seen to be altered, with points of cell cytoplasm discontinuity that appear to represent holes in the microvessel walls. This finding coincided with amastigote nests in myofibers, close contacts between trypomastigotes and endothelial cells and marked thickening of the basement membrane of the muscle vessels. Loss of capillary lumen and a process of ischemia also were observed in the SM of infected mice. The neuromuscular junction showed degeneration of intramuscular nerve fibers, reduction in the axon caliber, swollen mitochondrial, increase in the actin filaments and microtubules in the axoplasm, and swelling of the Schwann cells. Increase in the nerve terminal perimeter and most of the synaptic vesicles were localized near the presynaptic active zones and scarces in the axoplasm. At this stage of infection the changes findings in MV and NMJ of G infected with ...

Un estudio con microscopía de luz y electrónica de transmisión fue realizado en muestras del músculo esquelético (ME) Gastrocnemius (G) de ratones experimentalmente infectados con Trypanosoma cruzi, a fin de determinar las alteraciones en la microvasculatura y unión neuromuscular (UNM) de G durante la infección chagásica aguda. Un grupo de 10 ratones machos (mus musculus) NMRI (20 g), fueron infectados subcutáneamente con 1,10(4) tripomastigotes sanguícolas de la cepa M/DID/Ve/02/DSM. Cinco ratones NMRI no infectados fueron usados como control. Estos parásitos produjeron completa parálisis de las patas posteriores y muerte de los ratones durante la infección aguda. La histopatología del ME mostró infiltración de células mononucleares y leucocitos polimorfonucleares asociados con marcado parasitismo en la fibra muscular de G. La inmunofluorescencia indirecta reveló IgG a manera de bandas sobre el nervio terminal a los 40 días post-infección (pi). En este tiempo, antígeno y grupos de amastigotes de T. cruzi fueron observados en los cortes del ME. La marcada respuesta inflamatoria y las alteraciones morfológicas en el tejido muscular fueron verificadas por microscopía electrónica de transmisión. La ultraestructura de los capilares estuvo relacionada con puntos de discontinuidad en la microvasculatura. Este encuentro coincidió con la presencia de grupos de amastigotes dentro de las miofibrillas, estrecho contacto entre los tripomastigotes y las células endoteliales y marcado adelgazamiento de la membrana basal de los vasos sanguíneos. La pérdida del lumen capilar y un proceso de ischemia también fue observado en el G de los ratones infectados. La unión neuromuscular mostró degeneración de la fibra nerviosa intramuscular, reducción en el calibre del axón del nervio motor determinada por una retracción de la vaina de mielina, inflamación mitocondrial, aumento en los filamentos de actina y microtúbulos en el axoplasma e inflamación de las células ...

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Se investiga en ratas albinas (Rattus norvegicus), cepa Wistar, inoculadas por vía intraperitoneal con 5x10(4) tripomastigotes sanguícolas de Trypanosoma cruzi, y preñadas 10 días después de la inoculación, los efectos de la infección aguda sobre la gestación, utilizando diferentes pruebas de diagnóstico. Los resultados revelaron diferencias significativas (P < 0,01) entre los valores de parasitemia promedio de los grupos de ratas vírgenes B y ratas gestantes D, durante la primera y segunda semana de gestación, registrándose a los 12 días de la gravidez niveles de parasitemias de hasta 55 ± 3 y 27 ± 9 trips/mm³ de sangre. Anticuerpos anti-T. cruzi fueron detectados en los sueros de las ratas infectadas, mostrando diferencias significativas (P < 0,05) cuando se compara la interacción grupo-tiempo. Presencia de formas flageladas de T. cruzi en los tubos de cultivo inoculados con líquido amniótico de 3 (50%) de 6 ratas sacrificadas a término de gestación. Instauración de una miocarditis y miositis aguda de variable intensidad acompañada de nidos de amastigotes de T. cruzi a nivel del corazón, músculo esquelético y fibras musculares lisas del útero grávido. Las placentas mostraron una placentitis moderada sin parasitismo a nivel del estroma velloso, placas coriónica y desidual. Las glándulas mamarias presentaron un infiltrado celular discreto sin parasitosis en los alveólos, conductos excretores y tejido conectivo inter e intralobulillar. Las células alveolares exhibieron un citoplasma basofílico y abundante secreción. El análisis morfométrico, reveló diferencias significativas (P < 0,01) en el tamaño de fetos y placentas obtenidos de ratas infectadas D y controles sanas C. La infección chagásica aguda produjo en la rata gestante alteraciones parasitológicas, inmunológicas, histopatológicas y morfométricas importantes, las cuales fueron potenciadas por los efectos paralelos inducidos por la gravidez; la presencia de formas flageladas de T. ...

White Wistar rats (Rattus norvegicus) were intraperitoneally inoculated with 5x10(4) blood form trypomastigotes of Trypanosoma cruzi and impregnated 10 days after inoculation. The effects of acute infection on gestation were examined using different diagnostic tests. Results showed significant differences (P < 0.01) level in parasitemia values between group B virgin rats and group D gestating rats, during the first and second week, with levels of parasitemias 12 days after impregnation of 55 ± 3 and 27 ± 9 tryps/mm³. Anti-T. cruzi antibodies were found in the serum of infected rats, showing differences (P < 0.05) level comparing group-time interaction. Flagellate forms of T. cruzi were present in culture tubes inoculated with amniotic fluid from 3 (50%) of 6 rats sacrificed at the end of gestation. There was also myocarditis and acute myositis of varying intensity accompanied by many nest of T. cruzi amastigotes around the heart, in skeletal muscle and smooth muscle fiber in the gravid uterus. There was moderate placentitis without parasitism in the villous stroma and chorionic and decidual plates. Mammary glands showed discrete cellular infiltrate without parasitosis in the alveoli, excretory ducts and in inter and intralobular connective tissue. Alveolar cells showed basophilic cytoplasm and abundant secretion. Morphometric analysis of fetuses and placenta from infected rats D and healthy controls C showed significant differences (P < 0.01) level in size and weight. In conclusion, the gestating rats acute chagasic infection produces important parasitological, immunological, histopathological and morphometric changes: these are exacerbated by the concurrent effects of pregnancy. Flagellate forms of T. cruzi in the amniotic liquid are evidence of congenital fetal infection. T. cruzi did not interfere with gestation and at term of pregnancy the fetuses were apparently normal.

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This study has been done to evaluate the central nervous system (CNS) of mice infected with Trypanosoma cruzi and its relationships with the irreversible decrease of motor activity of the rear limbs during acute Chagas´disease. The course of the present study shows the in vivo behaviour of three parasites strains which were isolated from different sources and geographical areas, with the purpose of explaining the parasitemia, mortality rate, clinical, pathological and histopathological changes in the CNS of infected mice. The mice were injected intraperitoneally with 5.103 bloodstreams of different T. cruzi strains. The mice infected with PR and ASM strains from Venezuela, showed low parasitemia and high mortality, while the Y strain produced higher parasitemia levels. At the 30th day post-infection both left parietal brain cortex (LPC) and spinal cord (SC) were sectioned, stained with hematoxilin and eosin (H-E) and examined by means of confocal ligth microscopy. At this time, the pathology of the CNS exhibited focal infiltrates of monocytes, lymphocytes, plasmocytes, polymorphonuclear cells and loss of neuronas and motoneurons. The sections of LPC of infected mice with ASM strain, showed loss neuronal, parasites and abundant T. cruzi antigen deposits in the proximity of the swollen neurons. The sections of SC stained with Enolase-Avidin-Biotin-Peroxidase showed a reduction in the average number of neurons of the cervical region (CR) of the infected mice with PR, ASM and Y strains. Sections stained with Propidium Ioduro (IP) showed a reduction of the number of motoneurons in all regions of the SC, with a significant difference between groups infected with different T. cruzi strains and control uninfected mice (P < 0.05). This study established a correlation between the parasitism in the proximity to inflammatory cells, together the appearance of T. cruzi antigen and neuronal destruction in the brain. Therefore it can be concluded that the changes in CNS may be attributed to early parasitism in nervous tissue, which occur in a few days, involving clinico-pathological manifestations, which produced alterations of the mobility with paralysis of the rear limbs and death in 100% of mice with acute infection produced by PR and ASM-T. cruzi strains from Venezuela.

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Se presentan los resultados de un estudio experimental sobre la posible transmisión vertical de Trypanosoma cruzi en ratas albinas (Rattus norvegicus) cepa Wistar crónicamente infectadas. El curso de la infección fue evaluado antes del apareamiento, durante la gestación y después del parto mediante pruebas de diagnóstico parasitológico, inmunológico e histopatológico. Como controles se utilizaron ratas vírgenes infectadas y sanas gestantes. Los exámenes directos en muestras de sangre, hemocultivos y xenodiagnósticos realizados a las madres y a las crías, no presentaron parasitemias patentes y/o subpatentes. Exámenes serológicos realizados con la IFI y ELISA a las ratas vírgenes infectadas (A), gestantes infectadas (B) y a las crías, revelaron anticuerpos específicos anti-T. cruzi en el 100% de las madres infectadas, 26,2 y 44,6% de las crías y 41,6 y 83,3% de las crías sanas que fueron alimentadas sobre madres infectadas. El estudio minucioso de las muestras frescas y de cultivo de líquido amniótico, no mostró formas flageladas de T. cruzi. El estudio histopatológico reveló discreta miocarditis, miositis y vellositis con características de cronicidad, acompañada de nidos de amastigotes de T. cruzi a nivel del músculo cardíaco, esquelético y en el estroma de una placenta; moderado infiltrado inflamatorio sin parasitismo en útero, cordón umbilical y glándulas mamarias. La persistencia de nidos de amastigotes de T. cruzi en el corazón, músculo esquelético y en una placenta de ratas con infección chagásica crónica, sugiere la posibilidad de infección fetal. La patogenicidad de la cepa, formas del parásito utilizado y el tamaño del inóculo, pudieran ser factores que inciden en las variaciones observadas en la transmisión vertical de T. cruzi.

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Este estudio fue realizado con un grupo de ratas juveniles hembras (Rattus norvegicus) cepa Wistar con 20 días de nacidas y 250 grs. de peso. Cada rata fue inoculada inyectándole por vía intraperitoneal 0.1 mL de la suspensión sanguínea con 1x10 5 tripomastigotes sanguícolas de Trypanosoma cruzi (cepa I/PAS/VE/00/PLANALTO). Los parásitos fueron aislados de Panstrongylus geniculatus, naturalmente infectado y capturado en un área urbana del valle de Caracas, Venezuela y mantenidos en ratones NMRI. A los 10 días post-infección a estas ratas (GI) les fue determinado el ciclo estral y luego fueron apareadas con los machos en una relación 2 hembras/1 macho en cada jaula. Grupos de ratas vírgenes inoculadas con T. cruzi (GII), ratas sanas (GIII) y ratas preñadas (GIV) fueron usadas como controles. La infección por T. cruzi en las ratas de GI reveló los más altos niveles de parasitemias patentes con 12,2 ±1.1 T.cruzi /mm 3 de sangre a los 18,24 y 34 días post-infección con 6,12 y 20 días de gestación respectivamente, al compararla con el GII. Los títulos de anticuerpos específicos anti-T. cruzi fueron mayores en el grupo de ratas gestantes e infectadas con T. cruzi, en comparación con las vírgenes infectadas, representados por 1:512 y 1:2048 a los 19 y 20 días post-infección respectivamente. El 33% de las muestras de líquido amniótico de las ratas del GI, desarrollaron formas flageladas de T. cruzi en el medio de cultivo NNN. El estudio histopatológico de los cortes de 6 µ de espesor coloreados con hematoxilina y eosina del corazón fetal (CF) obtenidos de 2 fetos de ratas del GI con 34 días de infección, reveló nidos de amastigotes en el tejido cardíaco. En las placentas de las ratas del GI se observó una placentitis caracterizada por intenso infiltrado inflamatorio de células mononucleares y polimorfonucleares con predominio de neutró filos.

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En este trabajo investigamos en ratas wistar crónicamente infectadas en trypanosoma cruzi, la reactivación de la infección durante la gestación y después del parto, mediante un estudio parasitológico, inmunológico, histopatológico e inmunohistoquímico. Los resultados mostraron un control de las parasitemias patentes y/o subpatentes, títulos elevados de anticuerpos específicos anti-T.cruzi, detectándose en las ratas gestantes una disminución en los niveles de IgG y un incremento significativo de la IgM (P<0,05) a partir de la primera semana de gestación; ausencia de formas flageladas de T.cruzi en el líquido amniótico. La histopatología reveló, persistencia parasitaria a nivel de las fibras musculares cardíacas y de la musculatura lisa del útero grávido; establecimiento de una discreta miocarditis y miositis con características de cronocidad; moderado infiltrado inflamatorio, sin parasitismo en placentas y cerebro. El estudio inmunohistoquímico demostró la presencia de un nido de amastigotes en el músculo esquelético y abundantes depósitos antigénicos en las secciones de corazón, útero, cerebro y placentas, lo que demuestra la presencia de tripomastigotes en esos tejidos. Finalmente, se discuten los factores que pudieran inducir la reactivación de la infección por T. cruzi en ratas wistar gestantes

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Se dan ciertas evidencias sobre el efecto que traumas los procesos inflamatorios inducidos tienen sobre la reactivación y migración de Leishmania en pacientes clínicamente curados, individuos con infecciones asintomáticas, o modelos experimentales.El estudio de muestra de área inflamada de la piel de pacientes con las características antes mencionadas, reveló la presencia de parásitos leishmánico o parte de su genoma mediante la utilización de métodos parasitológo, inmunohistoquímicos (PAP) y moleculares (PCR). Asi mismo, se logró la detención de ADN específico de leishmania (Viannia) en muestras orales tomadas de pacientes con gingivitis y/o periodintitis, que habia sufrido leishmaniasis 5 a 10 años previo al presente estudio. La dispersión observada en los casos humanos fue corroborada en un modelo animal,provocando un proceso inflamatorio artificial a hámsteres infectados con leishmania. En este caso, observaciones llevadas a cabo entre 4 y 12 días mediante cultivos in vitro, extendidos en láminas coloreadas, o secciones histólogicas, revelaron la presencia de parásitos en el sitio donde se provocó la inflamación (cavidad peritoneal) y en el higado,el bazo, ganglio linfático, médula osea y sangre periférica circulante. Los resultados presentados apoyan el punto de vista de que el caso de leishmaniasis, paciente clinicamente curados con distintos esquemas terapéuticos, individuos con lesiones activas o en caso de infecciones inaperentes o asintomáticas, pueden experimentar una reactivación a distancia como consecuencia de un trauma que induzca a un proceso inflamatorio localizado

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En este estudio evaluamos la condición de leishmaniasis cutánea en casos procedendes de un área endémica de leishmaniasis en el estado Mérida, Venezuela. Los pacientes fueron diagnósticados de acuerdo al criterio clínico, parasitológico y mediante una prueba específica basada en la reacción en cadena de polimerasa (PCR), para detectar infección por Leishmaniasis braziliensis en 19 pacientes distribuidos en tres grupos familiares, los cuales mostraron reacción de Montenegro positiva y anticuerpos anti-Leishmania con niveles entre 1:128 y 1:6400, utilizando las reacciones de inmunofluorescencia indirecta (IFAT) y ELISA. Siete casos del grupos familiar GA mostraron 1,2,3,4 y 5 lesiones con tamaño promedio de 32 x 17 mm de diámetro, en la cara (50 por ciento), brazos (25 por ciento) y piernas (25 por ciento). Cinco casos del segundo grupo familiar (GB), mostraron 2,3,4 y 6 lesiones por diámetro promedio de 29 x 21 mm sobre la cara (50 por ciento), cuello (33 por ciento) y pie (17 por ciento). Cinco casos del tercer grupo familiar (GC) mostraron 2,15,27,30 y 60 lesiones cutáneas de tamaño promedio de 27 x 35 mm, distribuidas en todas partes del cuerpo. Los amastigotes de Leishmaniasis fueron detectados en 12 (70,6 por ciento) frotis de lesiones coloreados con Giemsa, en 15 (88,23 por ciento) y en 17 (99,99 por ciento) secciones histológicas coloreadas con Giamsa-Colofonio (GC) e inmunotinción. Los grupos GB y GC incluyeron un caso cada uno sin manifestaciones clínicas aparentes, con reacción de Montenegro de 17 x 13 mm de diámetro, anticuerpos anti-Leishmania séricos positivos y DNA de Leishmania en las muestras de suero. La PCR mostró L.braziliensis en la sangre de los casos cutáneos activos y en casos sin manifestaciones clínicas aparentes

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We utilized inmunostaining assay with avidein boitin peroxidase technique and primary rat monoclonal antibody NLDC-145 specific for mouse dentritic cell, characterized langerhans cells (LC) in epidermis sheet of 1 mm² of skin of the footpads of inbred females BALB/c mice, intradermally (id) injected with 1.10ü cultured promastigotes of leishmania braziliensis. The result showed that the injection of the parasites in the skin of the animals produced a progressive increment of epidermal LC in the site of the previus injection, and statistically significant (P<0.05) in each study period. The density of epidermal LC was going up by parasite insult in early time, after the 15 minutes (m) post-infection (pi) with 162ñ31.2 LC/mm², reaching a maximal value of 4503ñ713 LC/mm² to 2 week (w) pi until 898ñ481 LC/mm² to 6 w pi. The number of LC was always higher in epidermis of the control healthy mice, these skin samples showed 120ñ28.9 LC/mm². Morphological changes of the promastigotes injected could to be detected in skin giemsa-stained imprints, the parasite showed form ovoid and a short flagel, between 15m and 2 hour (hr) pi. No parasites were even seen in the imprint samples than of as: activated macrfophages (33 percent) to 15 m pi, neutrophils (46,33 percent) to 4 hr pi, eosinophils (2,33 percent) to 4 hr pi, lymphocytes (15,67 percent) to 6 hr pi, degraded lymphocytes (8,33 percent) to 1 w pi, monocytes (4,33 percent) to 4 day (d) pi and activated monocytes (19,33 percent) to 1 d pi. The stained sections of skin inoculated, revealed amastigotes into macrophages dermal near of the perivascular area and inflammatory process in the dermis consisted of lymphocytes, monocytes, plasma cell and polymorphonuclear cells between 1 w and 6 w pi. No parasites were detected in the epidermis. the results showed that the promastigotes in the skin survived the first 2 hr out of the macrophages, and on the other hand, stinuled various cell types in sites of injection of the parasites, and the proliferation of antigen presentation by epidermalk langerhans cells, necessary for the initiation of the specific T cell inmune response

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In this study, we have tested the sensitivity of a specific probe such as the polymerase chain reaction (PCR), as an altemative approach to parasitological methods to evaluate patients with cutaneous leishmaniosis (CL). The assay was designed to evaluate a familiar group with an infection of 4 months. The patients were diagnosed according to clinical criteria, parasitological, immunological assay and PCR specific probe. Five of the family group reported a clinical picture with a lymphadenopathy, localizad CL lesions with 2, 15, 27, 30 and 60 cutaneous lesions and with different size (mean= 5 x 7 for 27 x 35 mm of diameter), detestable on the exposed body surface: face (cheek, nose, forehead, front), neck, shoulder, hand, forearm and foot. The 6 patients were diagnosed by leishmanin skin test (LST) (mean= 26.2 x 28.4 mm of diameter). Anti-Leishmania specific antibody were detected by serodiagnosis by the direct agglutination test (DAT), immunofluorescence antibody test (IFAT) and Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in all patients. The Leishmania parasite were evident in the lesions of 5 patients, using Giemsa-stained of smear specimens from the lesion, imprint of biopsies the lesion, culture and inoculation in hamster of lesions material, sections histological by convencional stained, immunostaining techniques and by PCR assay on serum samples. The PCR procedure increased the sensitivity of direct microscopy diagnostic of CL, therefore should be considered as a valuable and sensitive diagnostic tool in the identification of species of Leishmania and in the diagnosis de CL in the asymptomatic patients

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Leishmanin skin test (LST) was applied in 115 (40.5, percent) females and 169 (59.5 percent) males who suffered from cutaneous leishmaniosis (CL), with 1 to 7 cutaneous lesions, with > 211 days of evolution (mean= 47; DE= 36.7). Their ages ranged from 0 to 75 years (mean= 21). The clinical, parasitological, serological and immunological diagnosis of CL were studied. The LST reactivity was compared with respect to years age, sex, number and evolution of the lesion, before and after the treatment with glucantime (G) injected intramuscularly (IM). Second and third injections the G were necessary in 61.97 percent and 12.76 percent of the patients respectively. The time required for healing ranged from 30 to 120 days. The diameter of the induration was of 5 to 27 mm before the treatment, and up to 27 mm of induration when no clinicas manifestations were observed in all cases of CL. A higher proportion of positive skin test was obtained in the > 8 years age group (79.22 percent) than in the younger group. The relatively higher prevalence of LST in children from 1 to 10 years correlates with the percentage distribution of positive parasitaemias, and is associated with the mafe patients. These findings suggest that it is the intensity rather than the simple occurrence of parasitaemia which determine, the association into the LST and number and evolution of lesion in these cases of CL. The frequency of LST positivity was higher in individual males (55.63 percent). When these infections were grouped according to years age, sex and time of infection, and relationship with LST, the differences were no longer significant

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