RESUMO
A partir das primeiras sequências genômicas do Cil V-C (Citrus leprosis virus tipo citoplasmático) através de bibliotecas de cDNA provenientes do produto da replicação viral (dsRNA) (locali, 2002), foi possível concluir o seqüenciamento completo do seu genoma. As informações obtidas possibilitaram caracterizá-lo como um vírus de genoma constituído por ssRNA (mais), bipartido (menos 14 Kb), contendo no RNA 1 duas ORFs, uma delas codificadora de uma poliproteína com três domínios envolvidos com replicase viral e um relacionado com protease. No RNA 2, foram detectadas quatro ORFs, uma delas codificadora da proteína de movimento. Foram identificadas caudas poli A nas extremidades 3 dos dois RNAs, bem como a presença de uma sequência conservada de nucleotídeos (GAUAAAUCU) nas extremidades 5 dos dois RNAs, sugerindo a presença de uma estrutura Cap. As informações até então conhecidas sobre o vírus associado à leprose dos citros e aos ácaros do gênero Brevipalpus os relacionavam à família Rhabdoviridae. Entretanto, através de análises estruturais e organizacionais do genoma do CilV-C ficou evidente que o vírus apresenta alguns (poucos) domínios conservados com membros de vários gêneros e famílias de fitovírus, mas não com rhabdovírus. Através de análises filogenéticas e associando estas informações às características morfológicas do virion, além dos efeitos citopáticos e sintomas induzidos por esses vírus em seus hospedeiros, sugerimos que o CilV-C seja considerado o membro-tipo de um novo gênero de vírus, denominado Cilevirus. Foi possível também determinar com segurança que ele não pertence a família Rhabdoviridae, como proposto anteriormente. Essas informações permitiram uma análise comparativa entre regiões genômicas do CilV-C com as de outros vírus transmitidos por Brevipa/pus (VTBs), entre eles, Orchid fleck virus - OFV, Coffee ringspot virus - CoRSV, e Ligustrum ringspot virus - LigRSV.
Assuntos
Citrus/genética , Genes/fisiologia , Genoma Viral/fisiologia , Genoma Viral/genéticaRESUMO
Citrus leprosis virus (CiLV), a tentative member of the Rhabdoviridae family, affects citrus trees in Brazil, where it is transmitted by mites Brevipalpus spp. It also occurs in other South American countries and was recently identified in Central America. This northbound spread of CiLV is being considered a serious threat to the citrus industry of the United States. However, despite its importance, difficulties related to the biology of CiLV have hindered much of the progress regarding its accurate detection, leaving both the analyses of symptoms and electron microscopy as the only tools available. An attempt to overcome this problem was made by constructing a cDNA library from double-stranded RNA extracted from leprosis lesions of infected Citrus sinensis (sweet orange) leaves. After cloning and sequencing, specific primers were designed to amplify putative CiLV genome regions with similarity to genes encoding the movement protein and replicase of other plant viruses. RNA from infected citrus plants corresponding to different varieties and locations were amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) using the two pairs of primers. Amplified products were purified, cloned in pGEM-T, and sequenced. The sequences confirmed the genomic regions previously associated with CiLV. The results demonstrate that RT-PCR was specific, accurate, rapid, and reliable for the detection of CiLV.