RESUMO
The objective of this study was to describe a new platelet-rich plasma (PRP) protocol with a reduced concentration of leukocytes and intact platelets. We collected 8 mL of venous blood (VB) from marginal ear veins of 10 male New Zealand white rabbits in acid dextrose citrate Vacutainer tubes. Tubes were centrifuged at 302g for 10 minutes. All plasma was collected in plastic tubes to avoid buffy-coat contamination and centrifuged at 2862g for 5 minutes. A 10% calcium chloride activator (10 PRP:2 CaCl2) was added to the lower third of this plasma (PRP), and the PRP gel was obtained. Mean platelet count was 317.7 x 10(3) +/- 39.9/microL in VB and 1344.9 x 10(3) +/- 347.5/microL in PRP. Leukocyte counts were 3.96 x 10(3) +/- 2.01/microL and 0.46 x 10(3) +/- 0.45/microL in VB and PRP, respectively. Mean platelet enrichment was 327.4 +/- 97.8%. All differences were statistically significant (P > .05). This protocol is practical and reproducible, resulting in a high concentration of intact platelets to help tissue repair and low levels of leukocytes.
Assuntos
Plaquetas/citologia , Leucócitos/citologia , Ativação Plaquetária , Plasma Rico em Plaquetas/citologia , Animais , Plaquetas/fisiologia , Centrifugação , Contagem de Leucócitos , Masculino , Plasmaferese , Contagem de Plaquetas , CoelhosRESUMO
As enzimas G6PD e 6PGD são responsáveis pela geração do aporte de NADPH, necessário para a detoxificação dos agentes oxidantes produzidos pelo estresse oxidativo metabólico nos eritrócitos. Devido à alta prevalência de deficiência de G6PD na população mundial, principalmente de origem negróide africana, muitos estudos têm sido realizados na tentativa de conhecer melhor a atuação destas enzimas. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade enzimática da 6PGD, nos deficientes de G6PD, para verificar a existência de aumento da atividade desta enzima, correlacionando com um possível aumento do número de reticulócitos ou presença de alterações da série vermelha. A pesquisa em 2.657 indivíduos do sexo masculino resultou em 97 deficientes de G6PD, determinando uma prevalência de 3,65 por cento para a região de Bauru (SP), com atividade enzimática média de G6PD de 1,74 UI.g Hb-1. min-1 a 37°C, 14,4 por cento da atividade da G6PD normal. A atividade enzimática média da 6PGD foi de 9,5 UI.g Hb-1. min-1 a 37°C, estando aumentada em 47,4 por cento dos deficientes de G6PD. Os resultados não confirmaram que a hipótese do aumento da atividade enzimática da 6PGD, em deficientes de G6PD, seja decorrente da presença de um número aumentado de reticulócitos na corrente circulatória, faixa etária ou alterações eritrocitométricas que denotem anemia. O mais provável é que a hemólise autolimitada, imposta pelos processos oxidativos, preserve os eritrócitos mais jovens, que possuem atividade enzimática mais elevada, uma vez que naturalmente ocorre diminuição da atividade destas enzimas com o envelhecimento celular.
The G6PD and 6PGD enzymes are responsible for the generation of NADPH supply necessary for the detoxification of the oxidant agents produced during the oxidative metabolic stress on erythrocytes. Due to the high prevalence of the deficiency of G6PD on world population, especially on Afro descents, many studies have been done trying to know better the actuation of these enzymes. The goal of this study was to evaluate the 6PGD enzymatic activity on a population with G6PD deficiency, to verify if there is an elevation of the activity of this enzyme, and try to correlate to a possible increase on the number of reticulocytes or the presence of alterations on red series. The research with 2657 male individuals detected 97 deficient for G6PD, which determined a 3.65 percent prevalence for the Bauru (SP) region, with mean enzymatic activity of 1.74 UI.g Hb-1. min-1 at 37°C, 14,4 percent of the normal G6PD activity. Mean 6PGD enzymatic activity was 9.5 UI.g Hb-1. min-1 at 37°C, and was elevated in 47.4 percent of the G6PD deficient individuals. The result obtained did not confirm the hypothesis that the elevation of the 6PGD enzymatic activity, in G6PD deficient individuals, was due to the presence of an increase of reticulocytes in blood stream, age or erythrocytometric alterations that could denote anemia. The most plausible theory is that the auto-limited hemolysis, imposed by oxidative processes, preserves young erythrocytes that have an elevated enzymatic activity, as naturally these enzymes lose activity with cellular aging.