RESUMO
OBJECTIVES: To evaluate the in vitro photodynamic activity of aluminum phthalocyanine tetrasulfonate chloride (AlPcClS4) on promastigotes and amastigotes of Leishmania (Viannia) peruviana and Leishmania (Viannia) braziliensis. MATERIALS AND METHODS: The activity of photodynamic therapy using AlPcClS4 on Leishmania promastigote and amastigotes was determined by the Methyl Thiazole Tetrazolium (MTT) colorimetric method and quantitative PCR, respectively. RESULTS: Photodynamic treatment showed an inhibitory effect on promastigotes, particularly on Leishmania (V.) peruviana, to a lesser extent on Leishmania (V.) braziliensis and also on intracellular forms of both species. At 24 hours post-radiation, using concentrations of 200 µM and 350 µM, the inhibitory effect on Leishmania (V.) peruviana was 72.9% and 73.9% respectively; at 96 hours the inhibitory effect was of 78.8% and 80.6%, respectively. Regarding intracellular forms, the inhibitory effect on Leishmania (V.) peruviana amastigotes was 57.8% at 72 hours post-treatment, using a concentration of 200 µM. The IC50 was 56.5, 50, 44 and 39.7 µM, at 24, 48, 72 and 96 hours post-radiation, respectively. CONCLUSIONS: Photodynamic therapy using AlPcClS4 against Leishmania species showed encouraging results, mainly on Leishmania (V.) peruviana, suggesting a potential use as an alternative or complement to the usual treatment of tegumentary leishmaniasis. However, new trials are still required to determine the selectivity index for the intracellular form of the parasite, and to develop methods to facilitate the efficient entry of the molecule into the host cell and the parasite.
OBJETIVOS: Evaluar la actividad fotodinámica in vitro de la ftalocianina de aluminio tetrasulfonada clorada (AlPcClS4) sobre promastigotes y amastigotes de Leishmania (Viannia) peruviana y Leishmania (Viannia) braziliensis. MATERIALES Y MÉTODOS: La actividad del tratamiento fotodinámico empleando AlPcClS4 sobre promastigotes y amastigotes de Leishmania fue determinada mediante el método colorimétrico Metil Tiazol Tetrazolium (MTT) y PCR cuantitativo, respectivamente. RESULTADOS: El tratamiento fotodinámico presentó un efecto inhibitorio sobre promastigotes, principalmente sobre Leishmania (V.) peruviana, en menor proporción sobre Leishmania (V.) braziliensis y sobre las formas intracelulares de ambas especies. En Leishmania (V.) peruviana, a las 24 horas posirradiación a 200 µM y 350 µM el efecto inhibitorio fue del 72,9% y 73,9%, respectivamente y a las 96 horas fue del 78,8% y 80,6%, respectivamente. En las formas intracelulares, empleando 200 µM y evaluado a las 72 horas postratamiento, se observó una inhibición del 57,8% de amastigotes de Leishmania (V.) peruviana. El IC50 fue del 56,5; 50; 44; y 39,7 µM, que corresponde a las 24, 48, 72 y 96 horas posirradiación, respectivamente. CONCLUSIONES: El tratamiento fotodinámico empleando AlPcClS4 frente a las especies de Leishmania presentó resultados alentadores principalmente sobre Leishmania (V.) peruviana, lo cual sugiere su potencial uso como alternativa o complemento del tratamiento convencional de la leishmaniasis tegumentaria. Sin embargo, aún se requiere continuar con nuevos ensayos para determinar el índice de selectividad sobre el parásito en su forma intracelular, y desarrollar estrategias que faciliten el ingreso eficiente de la molécula hacia la célula hospedera y al parásito.
Assuntos
Cloretos , Indóis , Leishmania , Compostos Organometálicos , Cloretos/farmacologia , Indóis/farmacologia , Leishmania/classificação , Leishmania/efeitos dos fármacos , Leishmania braziliensis/efeitos dos fármacos , Compostos Organometálicos/farmacologiaRESUMO
RESUMEN Objetivos: Evaluar la actividad fotodinámica in vitro de la ftalocianina de aluminio tetrasulfonada clorada (AlPcClS4) sobre promastigotes y amastigotes de Leishmania (Viannia) peruviana y Leishmania (Viannia) braziliensis. Materiales y métodos: La actividad del tratamiento fotodinámico empleando AlPcClS4 sobre promastigotes y amastigotes de Leishmania fue determinada mediante el método colorimétrico Metil Tiazol Tetrazolium (MTT) y PCR cuantitativo, respectivamente. Resultados: El tratamiento fotodinámico presentó un efecto inhibitorio sobre promastigotes, principalmente sobre Leishmania (V.) peruviana, en menor proporción sobre Leishmania (V.) braziliensis y sobre las formas intracelulares de ambas especies. En Leishmania (V.) peruviana, a las 24 horas posirradiación a 200 µM y 350 µM el efecto inhibitorio fue del 72,9% y 73,9%, respectivamente y a las 96 horas fue del 78,8% y 80,6%, respectivamente. En las formas intracelulares, empleando 200 µM y evaluado a las 72 horas postratamiento, se observó una inhibición del 57,8% de amastigotes de Leishmania (V.) peruviana. El IC50 fue del 56,5; 50; 44; y 39,7 µM, que corresponde a las 24, 48, 72 y 96 horas posirradiación, respectivamente. Conclusiones: El tratamiento fotodinámico empleando AlPcClS4 frente a las especies de Leishmania presentó resultados alentadores principalmente sobre Leishmania (V.) peruviana, lo cual sugiere su potencial uso como alternativa o complemento del tratamiento convencional de la leishmaniasis tegumentaria. Sin embargo, aún se requiere continuar con nuevos ensayos para determinar el índice de selectividad sobre el parásito en su forma intracelular, y desarrollar estrategias que faciliten el ingreso eficiente de la molécula hacia la célula hospedera y al parásito.
ABSTRACT Objectives: To evaluate the in vitro photodynamic activity of aluminum phthalocyanine tetrasulfonate chloride (AlPcClS4) on promastigotes and amastigotes of Leishmania (Viannia) peruviana and Leishmania (Viannia) braziliensis. Materials and methods: The activity of photodynamic therapy using AlPcClS4 on Leishmania promastigote and amastigotes was determined by the Methyl Thiazole Tetrazolium (MTT) colorimetric method and quantitative PCR, respectively. Results: Photodynamic treatment showed an inhibitory effect on promastigotes, particularly on Leishmania (V.) peruviana, to a lesser extent on Leishmania (V.) braziliensis and also on intracellular forms of both species. At 24 hours post-radiation, using concentrations of 200 μM and 350 μM, the inhibitory effect on Leishmania (V.) peruviana was 72.9% and 73.9% respectively; at 96 hours the inhibitory effect was of 78.8% and 80.6%, respectively. Regarding intracellular forms, the inhibitory effect on Leishmania (V.) peruviana amastigotes was 57.8% at 72 hours post-treatment, using a concentration of 200 μM. The IC50 was 56.5, 50, 44 and 39.7 μM, at 24, 48, 72 and 96 hours post-radiation, respectively. Conclusions: Photodynamic therapy using AlPcClS4 against Leishmania species showed encouraging results, mainly on Leishmania (V.) peruviana, suggesting a potential use as an alternative or complement to the usual treatment of tegumentary leishmaniasis. However, new trials are still required to determine the selectivity index for the intracellular form of the parasite, and to develop methods to facilitate the efficient entry of the molecule into the host cell and the parasite.
Assuntos
Leishmania braziliensis , Técnicas In Vitro , Leishmaniose , Alumínio , Fotoquimioterapia , Medicina Tropical , Leishmaniose Cutânea , Fármacos FotossensibilizantesRESUMO
RESUMEN Objetivos. Aislar, seleccionar e identificar actinomicetos asociados a hormigas cortadoras de hojas Atta cephalotes (Linnaeus, 1758), que presenten mayor actividad anti-Candida. Materiales y métodos. Estudio transversal realizado en hormigas recolectadas de una localidad de Huánuco, Perú, a partir de las cuales se aislaron cepas de actinomicetos que fueron evaluadas mediante pruebas in vitro para determinar su capacidad antagonista frente a especies de Candida. Los actinomicetos de mayor antagonismo fueron seleccionados y cultivados en agitación, luego se obtuvieron los metabolitos extracelulares con solventes orgánicos y finalmente se evaluaron los extractos crudos para determinar cuantitativamente la concentración mínima inhibitoria (CMI). Resultados. Se logró aislar 30 actinomicetos, de los cuales el 47 % presentaron actividad antagonista a Candida albicans (C. albicans) ATCC 7516, el 43 % a Candida parapsilosis ATCC 7307, el 37% a Candida tropicalis ATCC 7206 y C. albicans ATCC 10231 y el 30% a C. albicans ATCC 98028. Extractos orgánicos de las cepas HAA-16 y HAA-17 presentaron marcada actividad anti-Candida; siendo el extracto de acetato de etilo de la cepa HAA17 el de mejor rendimiento por tener mayor espectro de actividad y presentar una CMI de 3,25 mg/ml frente a C. albicans ATCC 7516 y Candida parapsilosis ATCC 7307. Los actinomicetos seleccionados se identificaron mediante técnicas moleculares como miembros del género Streptomyces. Conclusiones. Los actinomicetos asociados a Atta cephalotes son excelentes productores de compuestos bioactivos, capaces de inhibir el crecimiento de levaduras patógenas del género Candida y con potencial aplicación en el desarrollo de nuevos productos naturales de interés biomédico.
ABSTRACT Objectives. To isolate, select and identify actinomyces associated to leaf-cutting ants Atta cephalotes (Linnaeus, 1758), that present a greater anti-Candida activity. Materials and Methods. Cross-sectional study made with ants collected at a location in Huánuco, Peru, from which strands of actinomyces were isolated and later evaluated by in vitro testing in order to determine its antagonistic capacity against species of Candida. The actinomyces with greater antagonism were selected and cultured by agitation, then the reliable extracellular metabolites were obtained with organic solvents, and finally the crude extracts were evaluated to determine quantitatively the minimum inhibiting concentration (MIC). Results. Thirty (30) actinomyces were isolated, of which 47% exhibited antagonistic activity against Candida albicans (C. albicans) ATCC 7516, 43% to Candida parapsilosis ATCC 7307, 37% to Candida tropicalis ATCC 7206 and C. albicans ATCC 10231, and 30% to C. albicans ATCC 98028. Organic extracts of the HAA-16 and HAA-17 strands exhibited noticeable anti-Candida activity, being the ethyl acetate extract of the HAA-17 strand the one with the highest performance thanks to a wider activity spectrum of MIC 3.25 mg/mL against C. albicans ATCC 7516 and Candida parapsilosis ATCC 7307. The selected actinomyces were identified by means of molecular techniques as members of the Streptomyces genus. Conclusions. Actinomyces associated to Atta cephalotes are excellent producers of bioactive compounds, being able to inhibit the growth of pathogenic mold of the Candida genus and with potential for application in the development of new natural products for the biomedical field.
Assuntos
Animais , Formigas/microbiologia , Actinomyces/metabolismo , Candida/efeitos dos fármacos , Antifúngicos/farmacologia , Peru , Actinomyces/isolamento & purificação , Testes de Sensibilidade Microbiana , Estudos Transversais , Antifúngicos/isolamento & purificaçãoRESUMO
OBJECTIVES.: To isolate, select and identify actinomyces associated to leaf-cutting ants Atta cephalotes (Linnaeus, 1758), that present a greater anti-Candida activity. MATERIALS AND METHODS.: Cross-sectional study made with ants collected at a location in Huánuco, Peru, from which strands of actinomyces were isolated and later evaluated by in vitro testing in order to determine its antagonistic capacity against species of Candida. The actinomyces with greater antagonism were selected and cultured by agitation, then the reliable extracellular metabolites were obtained with organic solvents, and finally the crude extracts were evaluated to determine quantitatively the minimum inhibiting concentration (MIC). RESULTS.: Thirty (30) actinomyces were isolated, of which 47% exhibited antagonistic activity against Candida albicans (C. albicans) ATCC 7516, 43% to Candida parapsilosis ATCC 7307, 37% to Candida tropicalis ATCC 7206 and C. albicans ATCC 10231, and 30% to C. albicans ATCC 98028. Organic extracts of the HAA-16 and HAA-17 strands exhibited noticeable anti-Candida activity, being the ethyl acetate extract of the HAA-17 strand the one with the highest performance thanks to a wider activity spectrum of MIC 3.25 mg/mL against C. albicans ATCC 7516 and Candida parapsilosis ATCC 7307. The selected actinomyces were identified by means of molecular techniques as members of the Streptomyces genus. CONCLUSIONS.: Actinomyces associated to Atta cephalotes are excellent producers of bioactive compounds, being able to inhibit the growth of pathogenic mold of the Candida genus and with potential for application in the development of new natural products for the biomedical field.
OBJETIVOS.: Aislar, seleccionar e identificar actinomicetos asociados a hormigas cortadoras de hojas Atta cephalotes (Linnaeus, 1758), que presenten mayor actividad anti-Candida. MATERIALES Y MÉTODOS.: Estudio transversal realizado en hormigas recolectadas de una localidad de Huánuco, Perú, a partir de las cuales se aislaron cepas de actinomicetos que fueron evaluadas mediante pruebas in vitro para determinar su capacidad antagonista frente a especies de Candida. Los actinomicetos de mayor antagonismo fueron seleccionados y cultivados en agitación, luego se obtuvieron los metabolitos extracelulares con solventes orgánicos y finalmente se evaluaron los extractos crudos para determinar cuantitativamente la concentración mínima inhibitoria (CMI). RESULTADOS.: Se logró aislar 30 actinomicetos, de los cuales el 47 % presentaron actividad antagonista a Candida albicans (C. albicans) ATCC 7516, el 43 % a Candida parapsilosis ATCC 7307, el 37% a Candida tropicalis ATCC 7206 y C. albicans ATCC 10231 y el 30% a C. albicans ATCC 98028. Extractos orgánicos de las cepas HAA-16 y HAA-17 presentaron marcada actividad anti-Candida; siendo el extracto de acetato de etilo de la cepa HAA17 el de mejor rendimiento por tener mayor espectro de actividad y presentar una CMI de 3,25 mg/ml frente a C. albicans ATCC 7516 y Candida parapsilosis ATCC 7307. Los actinomicetos seleccionados se identificaron mediante técnicas moleculares como miembros del género Streptomyces. CONCLUSIONES.: Los actinomicetos asociados a Atta cephalotes son excelentes productores de compuestos bioactivos, capaces de inhibir el crecimiento de levaduras patógenas del género Candida y con potencial aplicación en el desarrollo de nuevos productos naturales de interés biomédico.
Assuntos
Actinomyces/metabolismo , Antifúngicos/farmacologia , Formigas/microbiologia , Candida/efeitos dos fármacos , Actinomyces/isolamento & purificação , Animais , Antifúngicos/isolamento & purificação , Estudos Transversais , Testes de Sensibilidade Microbiana , PeruRESUMO
Los metabolitos de un actinomiceto de origen marino, identificado como Streptomyces erythrogriseus cepa M10-77, fueron evaluados por su capacidad antimicrobiana y sinérgica con antibióticos convencionales. Las pruebas de antagonismo se realizaron frente a patógenos multidrogorresistentes (MDR) de origen clínico, siendo muy efectivos principalmente frente a especies patógenas de Staphylococcus y Enterococcus. Se determinó la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de extractos diclorometánicos frente a los patógenos S. aureus 1094, S. epidermidis 1093 y Staphylococcus coagulasa negativo 348, siendo estos valores de 3,9; 15,7 y 1,9 µg/mL respectivamente. Los componentes del extracto diclorometánico fueron fraccionados parcialmente, obteniéndose hasta 4 fracciones orgánicas (I, II, III, IV), las que mostraron actividades inhibitorias de la cepa referencial S. aureus ATCC 43300. Los bioensayos frente a S. aureus meticilino resistente (MRSA) mostraron actividad sinérgica de la fracción II del extracto con antibióticos betalactámicos y aminoglucósidos, resaltando la repotenciación de la actividad de la bencilpenicilina en 128 veces el valor basal; así como de la gentamicina en 8 veces sobre el valor basal. S. erythrogriseus cepa M10-77 resultó ser un productor de metabolitos antibacterianos de alta potencia y con actividad sinérgica con antibióticos de referencia médica.
Metabolites of a marine actinomycete, identified as Streptomyces erythrogriseus M10-77 strain were evaluated for antimicrobial and synergistic activity with conventional antibiotics. Antagonism tests were conducted against multidrug resistant (MDR) pathogens of clinical origin, being very effective mainly against pathogenic Staphylococcus and Enterococcus. Minimum Inhibitory Concentrations (MIC) of dichloromethane extracts were determined against pathogenic S. aureus 1094, S. epidermidis and coagulase-negative Staphylococcus 1093 348, these values being 3.9; 15.7 and 1.9 μg/mL respectively. The components of dichloromethane extracts were fractionated partially yielding four organic fractions (I, II, III, IV), which showed inhibitory activity against the reference strain S. aureus ATCC 43300. The bioassays against S.aureus methicillin-resistant (MRSA ) produced synergistic activity of the extract fraction II with beta-lactams and aminoglycoside antibiotics, highlighting the upgrading of the activity of penicillin at 128 times above the baseline and gentamicin 8-fold above baseline. S. erythrogriseus M10-77 strain proved to be a producer of antibacterial metabolites with high power and synergistic activity with antibiotics of medical use.
RESUMO
En el presente trabajo se reporta la presencia de Flavobacterium psychrophilum, como agente causante de la patología enfermedad bacteriana del agua fría en alevines de Onchorhynchus mykiss trucha arco irisdel Centro Piscícola El Ingenio, Junín (3250 m de altitud). La lesión macroscópica externa más frecuente fue la ulceración profunda de la región dorsal del pez acompañado de un ennegrecimiento localizado de la piel. Internamente se observó una marcada esplenomegalia, palidez del hígado, riñón y branquias, inflamación del intestino y acumulación de líquido ascítico en el peritoneo. No se detectó hemorragia interna. En Agar Cytophaga Modificado (ACM) según Anaker & Ordal (1959) fueron aisladas inicialmente 29 Gram negativas, de las cuales según la caracterización fenotípica y pruebas bioquímicas 9 fueron consideradas como F. psychrophilum. Pruebas de susceptibilidad antibiótica mostraron alta sensibilidad de las cepas a Gentamicina, Ceftazidina, oxitetraciclina, Norfloxacina, furazolidona, Ciprofloxacina y Cefoxitina.
The present paper reports the presence of Flavobacterium psychrophilum such as pathological agent of "bacterial disease of cold water" on juvenile Onchorhynchus mykiss "rainbow trout" from El Ingenio fish farm,Junín (3250 m). The ulceration of the dorsal area was the most frequent macroscopic external injury as well the localized blackening of the skin. Internally there was a marked splenomegaly, pallor of the liver, kidney and gills, inflammation of the intestine and ascitic fluid in the peritoneum. Internal hemorrhage was not detected. 29 strain Gram negative were isolated in Modified Cytophaga Agar (MCA) (Anaker & Ordal, 1959), which according to the phenotypic characterization and the biochemical tests 9 were considered as F. psychrophilum. Tests of antibiotic susceptibility showed high sensitivity of this strains to Gentamicin, Ceftazidine, oxytetracycline, Norfloxacine, furazolidone, Ciprofloxacine and Cefoxitine.
Assuntos
Flavobacterium , Flexibacter , Oncorhynchus mykiss , PesqueirosRESUMO
Un total de 26 cepas de bacterias marinas con actividad proteolítica fueron aisladas de agua de mar contaminadas con efluentes pesqueros; las mismas que se evaluaron en base al crecimiento y formación de halos de actividad en Agar Marino suplementados con caseína al 1 por ciento, pH 8,0 e incubados a 25ºC por 72 h. Cinco cepas, seleccionadas por presentar los mejores halos de actividad fueron evaluadas a su vez por su crecimiento y producción de proteasas a diferentes concentraciones de NaCI, rangos de temperatura y pH: siendo consideradas finalmente como bacterias halotolerantes, psicrotróficas y alcalófilas moderadas. Estas cepas también fueron evaluadas por su actividad proteolítica específica sobre la caseína, siendo la cepa CM48 (Pseudomonas sp.) la que presentó la mejor actividad específica (17,38 U/mg) a las 72 horas, y seguidas por las cepas CM45 (Alcaligenes sp.) (12,09 U/mg) y tres cepas de Aeromonas sp. (CM43, CM44 y CM46) con valores de 12,02; 10,07 y 10,10 U/mg respectivamente.
Assuntos
Bactérias , Endopeptidases , Enzimas , Espaço Extracelular , Poluição da Água , Água do MarRESUMO
El presente trabajo analiza la eficacia del tratamiento de agua procedentes del río Rímac. Se comparan muestras de agua no tratadas con las fases suscesivas del tratamiento: decantación, filtración y clorinación. La cuantificación de colifagos fue realizada por lo métodos de Capa Simple y filtro de Membrana. Los Coliformes Totales (CT), Coliformes Termotolerantes (CTT) y Bacterias Heterótrofas (BH) fueron determinados por los métodos del Número Más Probable (NMP) y filtro de Membrana. La cepa estándar de E. coli C ATCC 13706 fue utilizada como hospedera de coligafos. Los promedios de colifagos cuantificados fueron de 2267, 25 UFP/100 mL en las muestras sin tratamiento; 2, 11, 2,04 y 1,07 UFP/100 mL en las muestras procedentes de la decantación, filtración y clorinación respectivamente. No se detectaron CT y CTT en muestras de agua clorinada. La correlación entre colifagos y CT en muestras de agua decantada y filtrada (r= 0,3629 respectivamente) fueron significativas (p0,05). La correlación entre colifagos y los CTT con las muestras de tratamientos fue significativa (r = 0,7129; 0, 5326 y 0,4612, para muestras con decantación, filtración y clorinación respectivamente , p 99,99 por ciento para los CT y CTT.
Assuntos
Colífagos , Poluição da Água , Purificação da Água , Remoção de ContaminantesRESUMO
Los microorganismos han sido siempre objeto de estudios como productores de sustancias antibacterianas; sin embargo, también son consideradas productores de sustancias antifúngicas, antivirales, antiparasitarias, citotóxicas e inhibitorias de otras formas de crecimiento celular. Este trabajo describe el aislamiento, el potencial inhibitorio y la caracterización fenotípica de cepas bacterianas nativas asociadas a los moluscos bivalvos Argopecten purpuratus "concha de abanico" y Crassostrea gigas "ostra" en sistemas de cultivo. De un total de 345 cepas de bacterias colectadas se recuperaron 20 cepas marinas con capacidad inhibitoria de amplio espectro de bacterias patógenas de peces, moluscos y crustáceos; y los más sensibles fueron los patógenos Aeromonas sobria P-281, Aeromonas hydrophilia ATCC 7966, Vibrio vulfifcus ATCC 27562 y Vibrio parahaemolyticus ATCC 17803. La caracterización fenotípica de las cepas con capacidad inhibitoria permitió identificar los siguientes géneros: vibrio (40 por ciento), Aeromonas (15 por ciento), Flavobacterium (10 por ciento), Pseudomonas (5 por ciento), Moraxella (5 por ciento), Flexibacter (5 por ciento). No fueron identificadas 20 por ciento. Los resultados sugieren que las bacterias aisladas podrian ser aprovechadas como agentes probióticos en el control biológico de patógenos de organismos marinos de interés en maricultura.
Assuntos
Antibiose , Bactérias , Moluscos , ProbióticosRESUMO
In order to select marine bacteria with the ability to produce extracellular enzymes (EEC), samples from Argopecten purpuratus and Crassostrea gigas in cultivation as well as from other intertidal and benhic invertebrates were analyzed. The selection of producer EEC strains was carried out in Marine Agar (MA) with addition of the relevant substratum (starch, casein, tween-80, lecithine, DNA and gelatine). The EEC producer strains evaluation was carried out on 102 isolates. The resultats show that bacteria associater to A. purpuratus and C. gigas have the best multienzymatic activities; however, Semimytilus algosus, Tetrapigus niger and Tahis chocolata are also important sources of bacteria producers of EEC. The qualitative multinzymatic activity in MA (clear or opaque zones around the colonies in mm of diameter) varied from 6to > 16 mm. The frecuency of multinzymatic production was caseinase 62,74 for one hundred, tween-esterase 57,84 for one hundred, amylase 52,94 for one hundred, gelatinaes 38,23 por ciento, DNAse 33,3 for one hundred, agarase 5,43 for one hundred and lecithinase 90,0 for one hundred. The results suggest the possibility of using native strains for biotechnologycal purposes.