RESUMO
Kinetic properties and thermal stabilities of Hoplias malabaricus liver and skeletal muscle unfractionated malate dehydrogenase (MDH, EC 1.1.1.37) and its isolated isoforms were analyzed to further study the possible sMDH-A* locus duplication evolved from a recent tandem duplication. Both A (A1 and A2) and B isoforms had similar optima pH (7.5-8.0). While Hoplias A isoform could not be characterized as thermostable, B could as thermolabile. A isoforms differed from B isoform in having higher Km values for oxaloacetate. The possibly duplicated A2 isoform showed higher substrate affinity than the A1. Hoplias duplicated A isoforms may influence the direction of carbon flow between glycolisis and gluconeogenesis.
A fim de avaliar uma possível duplicação gênica recente no loco sMDH-A* de Hoplias malabaricus, foram analisadas as propriedades eletrocinéticas, cinéticas e de termoestabilidade da malato desidrogenase, estudando-se extratos brutos de fígado e de músculo esquelético, assim como de suas diferentes isoformas isoladas. O efeito do pH sobre a atividade da sMDH mostrou pH ótimo semelhante para as isoformas A (A1 e A2) e B (7.5-8.0). Testes cinéticos de termoestabilidade em H. malabaricus mostram que as isoformas A são mais termoestáveis que as B, mas seus valores de meia-vida não as caracterizam como termoestáveis. Já a isoforma B, pelo valor de meia-vida apresentado, é caracterizada como termolábil. Quanto aos valores de Km para oxalacetato, as isoformas A diferem da isoforma B por apresentarem maiores valores. A presença de duplicação gênica no loco -A*, com a isoforma A2 apresentando maior afinidade com o substrato que a isoforma A1, poderia conferir a essa espécie maior eficiência no processo de redução do oxalacetato a malato, favorecendo o metabolismo no sentido glicolítico.
RESUMO
Electrophoretic patterns of hemoglobins, Root effect, Bohr effect in blood and stripped hemoglobin, Hb-O2 affinity GTP modulation of Astyanax scabripinnis (lambari), caught at three different altitudes in Ribeirão Grande, near Campos do Jordão (São Paulo), are described. All populations showed the same electrophoretic patterns: two cathodal components in starch gel. Normal Bohr effect values were found in these three populations both in blood (phi = -0,11) and stripped hemoglobin (phi = -0,12). Different blood O2 affinities collected in fish of these 3 populations were detected. GTP has a large influence on Hb-O2 binding properties in A. scabripinnis. Stripped hemoglobin shows small Root effect. The addition of triphosphated nucleotides increases this effect. GTP is more effective than ATP on enhancing Root effect. Oxygen availability in water can be the factor responsible for differences found in blood O2 affinity.
Padrão eletroforético de hemoglobina, efeito Root, efeito Bohr em sangue e em Hb stripped e efeito do GTP na afinidade Hb-O2 de Astyanax scabripinnis (lambari) coletados em três altitudes diferentes no Ribeirão Grande, na região de Campos do Jordão (São Paulo), são descritos. Todas as populações mostraram os mesmos padrões eletroforéticos: dois componentes catódicos em gel de amido. Efeito Bohr normal foi encontrado para as três populações, tanto em sangue (fi = -0,11) quanto em Hb stripped (fi = -0,12). Detectamos afinidades diferentes da hemoglobina ao O2 entre as três populações estudadas. GTP possui forte influência nas propriedades de ligação da hemoglobina ao oxigênio em Astyanax scabripinnis. Em hemoglobina stripped, o efeito Root é baixo. A adição de nucleotídeos trifosfatados aumenta esse efeito. GTP é mais efetivo que ATP no aumento desse efeito. A disponibilidade de O2 na água pode ser o fator responsável pelas diferenças encontradas nas afinidades da hemoglobina pelo oxigênio.
RESUMO
Electrophoretic patterns of hemoglobins, Root effect, Bohr effect in blood and stripped hemoglobin, Hb-O2 affinity GTP modulation of Astyanax scabripinnis (lambari), caught at three different altitudes in Ribeirão Grande, near Campos do Jordão (São Paulo), are described. All populations showed the same electrophoretic patterns: two cathodal components in starch gel. Normal Bohr effect values were found in these three populations both in blood (phi = -0,11) and stripped hemoglobin (phi = -0,12). Different blood O2 affinities collected in fish of these 3 populations were detected. GTP has a large influence on Hb-O2 binding properties in A. scabripinnis. Stripped hemoglobin shows small Root effect. The addition of triphosphated nucleotides increases this effect. GTP is more effective than ATP on enhancing Root effect. Oxygen availability in water can be the factor responsible for differences found in blood O2 affinity.
Padrão eletroforético de hemoglobina, efeito Root, efeito Bohr em sangue e em Hb stripped e efeito do GTP na afinidade Hb-O2 de Astyanax scabripinnis (lambari) coletados em três altitudes diferentes no Ribeirão Grande, na região de Campos do Jordão (São Paulo), são descritos. Todas as populações mostraram os mesmos padrões eletroforéticos: dois componentes catódicos em gel de amido. Efeito Bohr normal foi encontrado para as três populações, tanto em sangue (fi = -0,11) quanto em Hb stripped (fi = -0,12). Detectamos afinidades diferentes da hemoglobina ao O2 entre as três populações estudadas. GTP possui forte influência nas propriedades de ligação da hemoglobina ao oxigênio em Astyanax scabripinnis. Em hemoglobina stripped, o efeito Root é baixo. A adição de nucleotídeos trifosfatados aumenta esse efeito. GTP é mais efetivo que ATP no aumento desse efeito. A disponibilidade de O2 na água pode ser o fator responsável pelas diferenças encontradas nas afinidades da hemoglobina pelo oxigênio.