RESUMO
Epidemiologic studies have shown that hyperhomocysteinemia is an independent risk factor for vascular disease. Homocysteine (Hcy) circulates as different species, mostly protein bound, and approximately 1% as its reduced form and the cyclic thioester homocysteine-thiolactone (HTL). Despite the level of plasma thiolactone being markedly low, detrimental effects are related to its high reactivity. HTL reacts with proteins by acylation of free basic amino groups; in particular, the epsilon-amino group of lysine residues forms adducts and induces structural and functional changes in plasma proteins. In order to assess the effects of HTL on plasma fibrin networks, a pool of normal plasma incubated with HTL (100, 500 and 1,000 µmol/L, respectively) was evaluated by global coagulation tests and fibrin formation kinetic assays, and the resulting fibrin was observed by scanning electron microscopy. HTL significantly prolonged global coagulation tests in a concentration-dependent manner with respect to control, and increases were up to 14.5%. Fibrin formation kinetic parameters displayed statistically significant differences between HTL-treated plasma and control in a concentration-dependent way, showing higher lag phase and lower maximum reaction velocity and final network optical density. Electron microscopy analysis of HTL plasma networks revealed a compact architecture, with more branches and shorter fibers than control. We can conclude that HTL induced a slower coagulation process, rendering more tightly packed fibrin clots. Since these features of the networks have been related to impaired fibrinolysis, the N-homocysteinylation reactions would be involved in the prothrombotic effects associated to hyperhomocysteinemia.
Assuntos
Fibrina/metabolismo , Homocisteína/análogos & derivados , Plasma/efeitos dos fármacos , Plasma/metabolismo , Animais , Coagulação Sanguínea/efeitos dos fármacos , Coagulação Sanguínea/fisiologia , Bovinos , Fibrina/química , Homocisteína/farmacologia , Humanos , Plasma/químicaRESUMO
Dermatan sulfate (DS) is well-known for its anticoagulant activity through binding to heparin cofactor II (HCII) to enhance thrombin inhibition. It has also been reported that DS has a profibrinolytic effect. We have evaluated the effects of DS solutions (4-20 µg/mL) on the formation (by kinetic studies), structure (by electron microscopy and compaction assays) and lysis (with urokinase-type plasminogen activator) of plasma fibrin networks. The results showed that DS significantly prolonged the lag phase and decreased the fibrin formation rate and the optical density of the final networks versus control, in a concentration dependent way. DS-associated networks presented a minor network percentage compared with control, composed of lower number of fibers per field, which resulted significantly thinner and longer. Moreover, DS rendered gels more sensible to rupture by centrifugal force and more susceptible to lysis. When fibrin formation kinetic assays were performed with purified fibrinogen instead of plasma, in the absence of HCII, the optical density of final DS-associated networks was statistically lower than control. Therefore, a direct effect of DS on the thickness of fibers was observed. Since in all in vitro assays low DS concentrations were used, it could be postulated that the fibrin features described above are plausible to be found in in vivo thrombi and therefore, DS would contribute to the formation of less thrombogenic clots.
Assuntos
Anticoagulantes/metabolismo , Dermatan Sulfato/fisiologia , Fibrina/fisiologia , Fibrina/ultraestrutura , Animais , Anticoagulantes/fisiologia , Bovinos , Fibrina/metabolismo , Ligação Proteica/fisiologiaRESUMO
INTRODUCTION: Dermatan sulfate (DS) is well-known for its anticoagulant activity through binding to heparin cofactor II to enhance antithrombin action. It has also been suggested that DS has a profibrinolytic effect, although the exact molecular mechanism is as yet unknown. MATERIALS AND METHODS: An in vitro amidolytic method was used to study the effect of high and low molecular weight-DS on the activation of Glu and Lys-plasminogen by tissue and urinary plasminogen activators (t-PA and u-PA). RESULTS: Both high and low molecular weight-DS exhibited a stimulating effect on the activation of plasminogen by PAs. Interestingly, high molecular weight-DS stimulated Glu and Lys-plasminogen activation by t-PA and u-PA in a way and to an extent similar to that in which fibrin(ogen) degradation products (PDF) increased the t-PA assay. Meanwhile low molecular weight-DS had a lower effect. No DS had any effect on plasmin or u-PA amidolytic activity. The facilitation of the conversion of Glu-plasminogen to plasmin in the presence of DS was confirmed by SDS-PAGE; high molecular weight-DS effect was greater than low molecular weight-DS in accordance with the chromogenic assays. Moreover, the combination of PDF and high and low molecular weight-DS, respectively, did not further stimulate t-PA activation of either Glu or Lys-plasminogen suggesting that both substances may compete for the same binding sites. CONCLUSIONS: Through in vitro assays we demonstrated that high and low molecular weight-DS enhance plasminogen activation by u-PA and t-PA, suggesting that the profibrinolytic activity of DS might be via potentiation of plasminogen conversion to plasmin.
Assuntos
Dermatan Sulfato/farmacologia , Fibrinólise/efeitos dos fármacos , Anticoagulantes/metabolismo , Antitrombinas/metabolismo , Dermatan Sulfato/química , Fibrinolisina/metabolismo , Ácido Glutâmico/química , Humanos , Hidrólise , Modelos Químicos , Peso Molecular , Fragmentos de Peptídeos/química , Plasminogênio/química , Ativadores de Plasminogênio/metabolismo , Fatores de Tempo , Ativador de Plasminogênio Tecidual/metabolismo , Ativador de Plasminogênio Tipo Uroquinase/metabolismoRESUMO
Aún después de más de 20 años del empleo de heparinas de bajo peso molecular (HBPM), existe considerable controversia acerca de si estos productos son intercambiables. Nuestras condiciones económicas suelen colocar al profesional encargado de la indicación en la incertidumbre entre su particular preferencia -avalada primariamente por documentación bibliográfica y la disponibilidad del producto donde se desempeña. Por las características del mercado farmacéutico de la Argentina, puede darse la situación de no contar con ninguna HBPM, tener la opción entre varias HBPM o inclusive entre dos fuentes diferentes de una misma HBPM, con ambas ya aprobadas por el organismo fiscalizador competente. Con respecto a esta última situación, dado el distinto origen del medicamento, la escasez de estudios clínicos con el producto de más reciente introducción en nuestro país y la imposibilidad de afrontar un estudio comparativo de efectividad con puntos finales clínicos por el elevado número de individuos necesarios, creímos de utilidad comparar entre ambos algunos parámetros del efecto antitrombótico. Para ello, en 40 voluntarios se determinó la acción sobre la heparinemia, el aPTT y el Tiempo de Trombina, a las dos horas de una dosis subcutánea de 40 mg de enoxaparina de dos orígenes diferentes. Hubo una semana de intervalo entre ambas aplicaciones. Con los dos productos se obtuvo similar prolongación de las pruebas realizadas, si bien para demostrar igual efecto antitrombótico, sería conveniente una comparación directa con puntos finales clínicos relevantes
Assuntos
Heparina de Baixo Peso MolecularRESUMO
Aún después de más de 20 años del empleo de heparinas de bajo peso molecular (HBPM), existe considerable controversia acerca de si estos productos son intercambiables. Nuestras condiciones económicas suelen colocar al profesional encargado de la indicación en la incertidumbre entre su particular preferencia -avalada primariamente por documentación bibliográfica y la disponibilidad del producto donde se desempeña. Por las características del mercado farmacéutico de la Argentina, puede darse la situación de no contar con ninguna HBPM, tener la opción entre varias HBPM o inclusive entre dos fuentes diferentes de una misma HBPM, con ambas ya aprobadas por el organismo fiscalizador competente. Con respecto a esta última situación, dado el distinto origen del medicamento, la escasez de estudios clínicos con el producto de más reciente introducción en nuestro país y la imposibilidad de afrontar un estudio comparativo de efectividad con puntos finales clínicos por el elevado número de individuos necesarios, creímos de utilidad comparar entre ambos algunos parámetros del efecto antitrombótico. Para ello, en 40 voluntarios se determinó la acción sobre la heparinemia, el aPTT y el Tiempo de Trombina, a las dos horas de una dosis subcutánea de 40 mg de enoxaparina de dos orígenes diferentes. Hubo una semana de intervalo entre ambas aplicaciones. Con los dos productos se obtuvo similar prolongación de las pruebas realizadas, si bien para demostrar igual efecto antitrombótico, sería conveniente una comparación directa con puntos finales clínicos relevantes(AU)
Assuntos
Heparina de Baixo Peso MolecularRESUMO
On the basis of growing clinical evidence, it is well known that elevated plasma homocysteine (Hcy) levels are associated with higher risk of venous and arterial thrombosis. Several experimental studies have been carried out in order to elucidate the mechanisms involved that still remain unclear. The aim of our study was to evaluate the homocysteine effects on formation and structure of plasmatic fibrin network. We also assayed homocystine and cysteine to determinate possible participation of thiol group in the tested activity. Aliquots of a pool of plasma incubated separately with sulfur compounds were clotting with thrombin. Fibringeneration and fibrin networks were evaluated by kinetic studies and scanning electronic microscopy, respectively. No significant differences were observed on fibrin generation of the substances assayed in comparison to control. The scanning electronic microscopy showed that Hcy-associated networks were different from control, with shorter, thicker and more branched fibers, resulting in a more compact structure and probably more resistant to fibrinolysis. The thiol group would be involved in this effect. Our findings would be a new contribution to elucidate the mechanisms involved in harmful effects associated to hyperhomocysteinemia.
Assuntos
Fibrina/efeitos dos fármacos , Homocisteína/farmacologia , Compostos de Sulfidrila/farmacologia , Coagulação Sanguínea/efeitos dos fármacos , Fibrina/ultraestrutura , Humanos , Cinética , Microscopia Eletrônica de Varredura , Trombina/farmacologia , Trombose/etiologiaRESUMO
Numerosas evidencias científicas indican que una concentración elevada de homocisteína plasmática (hiperhomocisteinemia) sería un factor de riesgo independiente para las enfermedades vasculares oclusivas, tanto o más importante que el colesterol, el tabaquismo o la hipertensión. Surge entonces la necesidad de conocer y determinar los niveles normales de homocisteinemia. En nuestro estudio se analizaron las muestras de 151 individuos (3 a 59 años) aparentemente sanos, obteniéndose un valor de homocisteina total = 12.1 +- 3.6 umol/l (media +- DE). Además se evaluaron los datos registrados para dos grupos etáreos extremos, obteniéndose 6.4 +- 2.6 umol (neonatos) y 13.6 +- 5.9 umol/l (> 60 años). Se encontró que la homocisteinemia se incrementa con la edad, aún en el grupo de 3 a 59 años, y el valor medio es significativamente mayor en los hombres que en las muAssuntos
Homocisteína
, Trombose
RESUMO
Numerosas evidencias científicas indican que una concentración elevada de homocisteína plasmática (hiperhomocisteinemia) sería un factor de riesgo independiente para las enfermedades vasculares oclusivas, tanto o más importante que el colesterol, el tabaquismo o la hipertensión. Surge entonces la necesidad de conocer y determinar los niveles normales de homocisteinemia. En nuestro estudio se analizaron las muestras de 151 individuos (3 a 59 años) aparentemente sanos, obteniéndose un valor de homocisteina total = 12.1 +- 3.6 umol/l (media +- DE). Además se evaluaron los datos registrados para dos grupos etáreos extremos, obteniéndose 6.4 +- 2.6 umol (neonatos) y 13.6 +- 5.9 umol/l (> 60 años). Se encontró que la homocisteinemia se incrementa con la edad, aún en el grupo de 3 a 59 años, y el valor medio es significativamente mayor en los hombres que en las muAssuntos
Homocisteína
, Trombose/prevenção & controle
RESUMO
El Cofactor II de la Heparina (HCII) es una proteína perteneciente al sistema de coagulación que inhibe específicamente trombina, processo que es potenciado por acción de los glicosaminoglicanos dermatán sulfato y heparina. Hasta el momento las deficiencias congénitas de HCII encontradas en forma aislada no están asociadas con eventos trombóticos, sí desarollan eventos trombóticos cuando están asociadas a otros factores predisponentes. Se observó disminución en los niveles de HCII en hepatopatías, coagulación intravascular diseminada, en anemia drepanocítica, encontrándose niveles elevados en embarazo a término y por el uso de contraceptivos orales. En el laboratorio realizamos el dosaje del HCII en la población normal de la ciudad de Buenos Aires, en diversas patologías como sepsis, quemados , anticoagulados con dicumarínicos y con heparina, diabéticos, hiperhomocisteinemia, observándose valores disminuidos principalmente en sepsis y pacientes diabéticos. El HCII es una glicoproteína que participa en la inhibición de trombina pero cuyo rol fisiológico no está completamente esclarecido. Es probable que el HCII inhiba trombina en el espacio extravascular, y está relacionado con la regulación de procesos inflamatorios y de reparación tisular.
Assuntos
Humanos , Cofator II da Heparina/fisiologia , Inibidores de Serina Proteinase/fisiologia , Trombina , Trombina/antagonistas & inibidores , Transtornos de Proteínas de Coagulação , Dermatan Sulfato/fisiologia , Cofator II da Heparina/química , Cofator II da Heparina/deficiência , Valores de Referência , RiscoRESUMO
El Cofactor II de la Heparina (HCII) es una proteína perteneciente al sistema de coagulación que inhibe específicamente trombina, processo que es potenciado por acción de los glicosaminoglicanos dermatán sulfato y heparina. Hasta el momento las deficiencias congénitas de HCII encontradas en forma aislada no están asociadas con eventos trombóticos, sí desarollan eventos trombóticos cuando están asociadas a otros factores predisponentes. Se observó disminución en los niveles de HCII en hepatopatías, coagulación intravascular diseminada, en anemia drepanocítica, encontrándose niveles elevados en embarazo a término y por el uso de contraceptivos orales. En el laboratorio realizamos el dosaje del HCII en la población normal de la ciudad de Buenos Aires, en diversas patologías como sepsis, quemados , anticoagulados con dicumarínicos y con heparina, diabéticos, hiperhomocisteinemia, observándose valores disminuidos principalmente en sepsis y pacientes diabéticos. El HCII es una glicoproteína que participa en la inhibición de trombina pero cuyo rol fisiológico no está completamente esclarecido. Es probable que el HCII inhiba trombina en el espacio extravascular, y está relacionado con la regulación de procesos inflamatorios y de reparación tisular. (AU)
Assuntos
Humanos , Cofator II da Heparina/fisiologia , Inibidores de Serina Proteinase/fisiologia , Trombina , Trombina/antagonistas & inibidores , Dermatan Sulfato/fisiologia , Cofator II da Heparina/química , Cofator II da Heparina/deficiência , Valores de Referência , Transtornos de Proteínas de Coagulação , RiscoAssuntos
Inibidores de Proteases/classificação , Trombose/fisiopatologia , alfa 1-Antiquimotripsina/fisiologia , alfa 1-Antitripsina/efeitos dos fármacos , alfa 1-Antitripsina/fisiologia , alfa 2-Antiplasmina/fisiologia , Antitrombina III/efeitos dos fármacos , Antitrombina III/fisiologia , Antitrombinas/fisiologia , Coagulação Sanguínea , Heparina/farmacologia , Peptídeo Hidrolases , Trombina/metabolismoAssuntos
Inibidores de Proteases/classificação , Trombose/fisiopatologia , Antitrombina III/fisiologia , Antitrombina III/efeitos dos fármacos , Trombina/metabolismo , Antitrombinas/fisiologia , Heparina/farmacologia , Coagulação Sanguínea , Peptídeo Hidrolases , alfa 1-Antitripsina/fisiologia , alfa 1-Antitripsina/efeitos dos fármacos , alfa 1-Antiquimotripsina/fisiologia , Antifibrinolíticos/fisiologiaRESUMO
La alfa-manosiadasa (alfa m) es una hidrolasa ácida que se encuentra en los gránulos azurófilos de los leucocitos polimorfonucleares y en menor concentración en los linfocitos. En leucemias agudas no linfoides sus niveles se hallan muy aumentados respecto de los controles normales (p < 0,001). En estos pacientes, se encuentran alteraciones funcionales e inmunológicas de algunas glicoproteínas del sistema plasmático de coagulación y de fibrinólisis, tales como la antitrombina III (AT III), el fibrinógeno o factor I de coagulación (I) y el plasminógeno (Plg). Debido a esto, investigamos la acción de alfa m sobre estas proteínas purificadas, a partir de plasma humano normal, utilizando métodos inmunoelectroforéticos y electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS. Se hallan modificaciones importantes en AT III y I y menores en Plg, similares a las obtenidas en los plasmas de los pacientes. Luego, parece que la acción de hidrolasas ácidas es posible in vivo bajo ciertas condiciones patológicas
Assuntos
Humanos , Antitrombina III/efeitos dos fármacos , Fibrinogênio , Leucemia Monocítica Aguda/enzimologia , Manosidases/farmacologia , Plasminogênio/metabolismo , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Imunoeletroforese Bidimensional , Neutrófilos/enzimologiaRESUMO
La alfa-manosiadasa (alfa m) es una hidrolasa ácida que se encuentra en los gránulos azurófilos de los leucocitos polimorfonucleares y en menor concentración en los linfocitos. En leucemias agudas no linfoides sus niveles se hallan muy aumentados respecto de los controles normales (p < 0,001). En estos pacientes, se encuentran alteraciones funcionales e inmunológicas de algunas glicoproteínas del sistema plasmático de coagulación y de fibrinólisis, tales como la antitrombina III (AT III), el fibrinógeno o factor I de coagulación (I) y el plasminógeno (Plg). Debido a esto, investigamos la acción de alfa m sobre estas proteínas purificadas, a partir de plasma humano normal, utilizando métodos inmunoelectroforéticos y electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS. Se hallan modificaciones importantes en AT III y I y menores en Plg, similares a las obtenidas en los plasmas de los pacientes. Luego, parece que la acción de hidrolasas ácidas es posible in vivo bajo ciertas condiciones patológicas (AU)
Assuntos
Humanos , Estudo Comparativo , Manosidases/farmacologia , Antitrombina III/efeitos dos fármacos , Fibrinogênio/efeitos dos fármacos , Plasminogênio/metabolismo , Leucemia Monocítica Aguda/enzimologia , Imunoeletroforese Bidimensional , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Neutrófilos/enzimologiaRESUMO
El objetivo de este trabajo es establecer el rango de normalidad de los parámetros de coagulación y fibrinólisis en el recién nacido normal, en nuestro país. Para ello se estudiaron 26 neonatos normales dentro de las 24 horas de vida y previo al tratamiento con vitamina K. El tiempo de protrombina y el tiempo de tromboplastina parcial con caolín estaban alterados en concordancia con los niveles de los factores XII, XI, X, IX, VII y II, el resto de los factores se hallaron dentro de los rangos de adultos normales. El tiempo de trombina estaba prolongado en todos los neonatos estudiados. Los productos de degradación de la fibrina y/o fibrinógeno eran elevados en el 42% de los casos. No hubo correlación entre estos dos parámetros (r = 0,178). Los niveles funcionales de antitrombina III y plasminógeno estaban disminuidos en todos los casos, mientras que el de alfa2-antiplasmina se halló ligeramente menor que el límite inferior normal. Niveles inmunológicos: el factor II, antitrombina III, plasminógeno y proteína C se hallaron disminuidos, mientras que el factor VIII relacionado al antígeno, la alfa1-antitripsina, la alfa2-macroglobulina y la fibronectina fueron normales. La inmunoelectroforesis cruzada del fibrinógeno y del factor II (éste con iones Ca++), se encontraron alteradas cuando se las comparó con los perfiles obtenidos con los plasmas de adultos normales. La alteración en la primera podría ser debida a variaciones en la proporción relativa de las tres fracciones normales del fibrinógeno plasmático
Assuntos
Humanos , Coagulação Sanguínea , Fatores de Coagulação Sanguínea/análise , Fibrinólise , Hemostasia , Recém-NascidoRESUMO
El objetivo de este trabajo es establecer el rango de normalidad de los parámetros de coagulación y fibrinólisis en el recién nacido normal, en nuestro país. Para ello se estudiaron 26 neonatos normales dentro de las 24 horas de vida y previo al tratamiento con vitamina K. El tiempo de protrombina y el tiempo de tromboplastina parcial con caolín estaban alterados en concordancia con los niveles de los factores XII, XI, X, IX, VII y II, el resto de los factores se hallaron dentro de los rangos de adultos normales. El tiempo de trombina estaba prolongado en todos los neonatos estudiados. Los productos de degradación de la fibrina y/o fibrinógeno eran elevados en el 42% de los casos. No hubo correlación entre estos dos parámetros (r = 0,178). Los niveles funcionales de antitrombina III y plasminógeno estaban disminuidos en todos los casos, mientras que el de alfa2-antiplasmina se halló ligeramente menor que el límite inferior normal. Niveles inmunológicos: el factor II, antitrombina III, plasminógeno y proteína C se hallaron disminuidos, mientras que el factor VIII relacionado al antígeno, la alfa1-antitripsina, la alfa2-macroglobulina y la fibronectina fueron normales. La inmunoelectroforesis cruzada del fibrinógeno y del factor II (éste con iones Ca++), se encontraron alteradas cuando se las comparó con los perfiles obtenidos con los plasmas de adultos normales. La alteración en la primera podría ser debida a variaciones en la proporción relativa de las tres fracciones normales del fibrinógeno plasmático (AU)