RESUMO
Despite the economic and zoonotic relevance of caseous lymphadenitis, a competent immunoprophylaxis tool is still necessary. Here, we evaluated two putative virulence factors of Corynebacterium pseudotuberculosis, rNanH, and rPknG, as recombinant subunit vaccines in a murine model against the infection by C. pseudotuberculosis. Three groups of ten Balb/c mice each were inoculated with a sterile 0.9% saline solution (G1), rNanH (G2), or rPknG (G3) in formulations containing saponin as an adjuvant. The mice received two vaccine doses intercalated by a 21-day interval and were challenged with 2 × 104 CFU/mL of the C. pseudotuberculosis MIC-6 strain 21 days after the last immunization. The total IgG, IgG1, and IgG2a production levels increased significantly in the experimental groups (G2 and G3) on day 42. The highest levels of IgG2a antibodies in G2 and G3 were observed compared to IgG1 levels. G3 showed a significant (p < 0.05) humoral response through higher production of total IgG at day 42 when compared to G2. A significant increase of mRNA expression levels of interleukin (IL)-17, tumor necrosis factor, and interferon-γ was observed only in G2, while IL-4 was significantly produced only by G3. The levels of IL-10 and IL-12 obtained were not significant in any group. The survival rates after the challenge were 20% for G3 and 60% for G2 (p < 0.05). Our findings suggest that the formulation containing rNanH and saponin (G2) resulted in the best protection against the challenge and was able to elicit a Th1 immune response in mice, and can be considered as a promising antigen in the development of an effective vaccine against caseous lymphadenitis.
Assuntos
Infecções por Corynebacterium , Corynebacterium pseudotuberculosis , Linfadenite , Animais , Vacinas Bacterianas , Infecções por Corynebacterium/prevenção & controle , Corynebacterium pseudotuberculosis/genética , Linfadenite/prevenção & controle , Camundongos , Fatores de Virulência/genéticaRESUMO
The present study aimed to investigate the effect of AZT derivates containing tellurium (Te) on human breast cancer cell lines and the mechanisms underlying cell death. The inhibitory effect of AZT and its derivatives (7m and 7r) was determined by the MTT assay (6.25, 12.5, 25, 50 and 100 µM in 24 and 48 h time points), meanwhile the induction of apoptosis and the cell cycle phases was investigated by flow cytometry. The MTT assay showed that AZT derivatives decreased the rate of cell proliferation at concentrations of 12.5 µM, while commercial AZT showed low antitumor potential. In flow cytometric analysis, we demonstrate that the AZT derivatives do not induce apoptosis at the concentration tested and promote the cell cycle arrest in the S phase. Besides, predicted absorption, distribution, metabolization, excretion and toxicity analysis suggest that the compounds possess a good pharmacokinetic profile and possibly less toxicity when compared to conventional AZT. These compounds containing tellurium in their formulation are potential therapeutic agents for breast cancer.
Assuntos
Antineoplásicos/síntese química , Zidovudina/análogos & derivados , Antineoplásicos/química , Antineoplásicos/farmacocinética , Antineoplásicos/farmacologia , Apoptose/efeitos dos fármacos , Linhagem Celular Tumoral , Sobrevivência Celular/efeitos dos fármacos , Feminino , Meia-Vida , Humanos , Pontos de Checagem da Fase S do Ciclo Celular/efeitos dos fármacos , Telúrio/química , Neoplasias de Mama Triplo Negativas/metabolismo , Neoplasias de Mama Triplo Negativas/patologia , Zidovudina/síntese química , Zidovudina/farmacocinética , Zidovudina/farmacologiaRESUMO
Diagnosis of leptospirosis by PCR is hampered due to the presence of substances on biological fluids. Here, we report an immunomagnetic separation step prior to PCR which improved the detection of Leptospira spp. in blood and urine samples from dogs. It resulted in a significant improvement on sensitivity for diagnosis of canine leptospirosis.
RESUMO
The objective of this study was to evaluate neuropeptide Y (NPY) and sea bream gonadotropin-release hormone (sbGnRH) gene expression in juvenile and adult males of Brazilian flounder. Hypothalamuses from fish were sampled for total RNA extraction. After cDNA synthesis, real-time PCR was used to measure gene expression. NPY showed approximately 2-fold increases in their mRNA levels while sbGnRH showed 3-fold increases in adult fish. These results suggest that these peptides could be involved on hypothalamic regulation of Brazilian flounder sexual maturation.
O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão gênica do neuropeptídeo Y (NPY) e da variante sea bream do hormônio liberador de gonadotrofinas (sbGnRH) em linguados machos juvenis e adultos. O hipotálamo foi isolado para a extração de RNA total. Após a síntese de cDNA, a PCR em tempo real foi usada para avaliar a expressão gênica. Foi observado um aumento de aproximadamente duas vezes nos níveis de NPY e de aproximadamente três vezes nos níveis de sbGnRH nos peixes adultos. Esses resultados demonstram que estes peptídeos podem estar envolvidos na regulação, via hipotálamo, da maturação sexual no linguado.
RESUMO
The objective of this study was to evaluate neuropeptide Y (NPY) and sea bream gonadotropin-release hormone (sbGnRH) gene expression in juvenile and adult males of Brazilian flounder. Hypothalamuses from fish were sampled for total RNA extraction. After cDNA synthesis, real-time PCR was used to measure gene expression. NPY showed approximately 2-fold increases in their mRNA levels while sbGnRH showed 3-fold increases in adult fish. These results suggest that these peptides could be involved on hypothalamic regulation of Brazilian flounder sexual maturation.
O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão gênica do neuropeptídeo Y (NPY) e da variante sea bream do hormônio liberador de gonadotrofinas (sbGnRH) em linguados machos juvenis e adultos. O hipotálamo foi isolado para a extração de RNA total. Após a síntese de cDNA, a PCR em tempo real foi usada para avaliar a expressão gênica. Foi observado um aumento de aproximadamente duas vezes nos níveis de NPY e de aproximadamente três vezes nos níveis de sbGnRH nos peixes adultos. Esses resultados demonstram que estes peptídeos podem estar envolvidos na regulação, via hipotálamo, da maturação sexual no linguado.
RESUMO
With the aim of isolating Leptospira spp., blood serum, kidney, liver and genital tract of 137 female swine (40 sows and 97 gilts) and also urine samples from 22 sows were collected in a slaughterhouse in the State of São Paulo, from April 2003 to August 2004. Four isolates were obtained from animals that presented microagglutination test (MAT) titers > 100 for the serovar Pomona and one was obtained from an animal negative by MAT in which Leptospira was isolated from the liver and reproductive tract. The presence of leptospiral DNA was investigated by PCR, and positive results were found in kidneys of 11 females, liver of two, genital tract of two and urine of one of them. Nephrosis, interstitial multifocal nephritis, moderate to severe changing, hyalines cylinders and hemorrhagic focuses, hepatic and uterine horns congestion were histological lesions observed in higher frequency in animals positive for leptospira. The silver impregnation (Warthin Starry) confirmed the presence of spirochetes in renal tubules of four females with positive leptospira cultures from kidneys. The serogroup of the five isolates was identified as Pomona by cross agglutination with reference polyclonal antibodies. Molecular characterization of the isolates was carried out by variable-number tandem-repeats analysis. All the isolates revealed a pattern distinct from the L. interrogans Pomona type strain, but identical to a previously identified pattern from strains isolated in Argentina belonging to serovar Pomona.
Amostras de soro sanguíneo, rim, fígado e trato genital de 137 fêmeas suínas (40 matrizes e 97 marrãs) e de urina de 22 matrizes foram colhidas em abatedouro no Estado de São Paulo, no período de abril de 2003 a agosto de 2004 tendo como objetivo o isolamento de Leptospira spp. Quatro estirpes foram isoladas de animais que apresentaram títulos, no teste de soroaglutinação microscópica (SAM) > 100, para o sorovar Pomona e de um animal, não reagente na SAM, em que houve isolamento de leptospiras do fígado e aparelho reprodutor. A presença do DNA de leptospira foi investigada pela técnica da PCR e foram observados resultados positivos nos rins de 11 fêmeas, no fígado de duas, no aparelho reprodutor de duas e na urina de uma delas. Nefrose, nefrite intersticial multifocal variando de moderada a severa, cilindros hialinos e focos hemorrágicos, congestão hepática e de cornos uterinos foram lesões histológicas evidenciadas com freqüência mais alta em animais positivos para leptospira. A impregnação argêntica (Warthin Starry) confirmou a presença de espiroquetas nos túbulos renais das quatro fêmeas onde houve cultura positiva para leptospiras dos rins. O sorogrupo dos cinco isolados foi identificado como Pomona pela técnica de aglutinação cruzada com anticorpos policlonais de referência. A caracterização molecular dos isolados foi realizada pela análise do número variável de repetições em tandem (VNTR). Os mesmos revelaram um padrão distinto da estirpe padrão de L. interrogans sorovar Pomona, porém idêntico a um padrão previamente identificado em estirpes isoladas na Argentina, pertencentes ao sorovar Pomona.
RESUMO
Leptospirosis is a worldwide sanitary problem. Its clinical signs resemble that of other diseases like Dengue and Flu, and it is difficult to distinguish between them. Currently available diagnostic methods shown low sensitivity and specificity. Efforts have been made to develop simpler, faster and more efficient diagnostic methods. The aim of this work was to evaluate and optimize a Nested-PCR method for diagnosis of leptospirosis. Primers were designed to amplify a 264 bp region within the LipL32 gene. The sensitivity and specificity of the assay was evaluated using seven saprophytic serovars and 35 pathogenic serovars. This technique showed to be very specific for pathogenic serovars, however it lacked sensitivity. In order to enhance the sensitivity, another primer pair was designed which amplify a 183 bp region within the 264 bp region in lipL32 gene, and used in a Nested-PCR assay. This approach was much more sensitive than traditional PCR.
A leptospirose constitui um problema sanitário de importância mundial. Esta doença caracteriza-se por apresentar sintomas muito parecidos com os de outras doenças como a dengue e a gripe e, clinicamente é difícil de distingui-las. Técnicas de diagnóstico da leptospirose atualmente disponíveis apresentam baixa sensibilidade e ou especificidade. Por isso, tem havido um grande esforço no sentido de desenvolver testes rápidos e eficientes, baseados em técnicas de biologia molecular. Este trabalho objetivou a avaliação e otimização do Nested-PCR, para o diagnóstico de leptospirose. Para isso foi desenhado um par de primers que amplifica uma região de 264 pb do gene LipL32. A sensibilidade e especificidade do teste foram avaliadas utilizando 7 sorovares saprófitas e 35 sorovares patogênicos. Este PCR mostrou-se específico para leptospiras patogênicas, porém a sensibilidade não foi muito alta. Com o objetivo de melhorar a sensibilidade do teste , foi desenhado outro par de primers que amplifica uma região de 183 pb do gene LipL32, interna a de 264 pb para a realização do Nested-PCR. Nesta reação foi utilizado como DNA molde o produto da primeira amplificação. O Nested-PCR mostrou-se mais sensível que o PCR normal, pois foi capaz de detectar um baixo número de células bacterianas.
RESUMO
Ocimum basilicum L. (sweet basil), of the family Lamiaceae, is rich in aromatic essential oils and valuable for its pharmaceutical, aromatic and culinary properties. The present study describes the procedure for micropropagation of O. basilicum using cotiledonary leafs from in vitro geminated plants. Cotyledons from in vitro germinated seeds were used as initial explants, put in MS (Murashige and Skoog, 1962) medium with 0.2mg.L-1 NAA (1-Naphthalene acetic acid) in combination with 05mg.L-1 BAP(6-Benzyl aminopurine) and kept at 28 ± 1ºC, 16-h light photoperiod and 48µmol.m-2.s-1 luminous density flow, for 45 days. The highest efficiency of shoot formation after 45 days occurred in the medium containing 5mg.L-1 BAP and 0,2mg.L-1 NAA. The presence of NAA inhibited root formation, when combined with different concentrations of cytokinin (BAP, 1 to 5mg.L-1). Higher BAP concentrations induced an increase in the number of explants with shoots and a higher number of shoots/cotyledon
Ocimum basilicum L. (manjericão) pertencente à família das Lamiaceae é rico em óleos essenciais aromáticos e valorizado por suas propriedades farmacêuticas, aromáticas e culinárias. Neste trabalho descrevemos o procedimento para micropropagação de O. basilicum utilizando cotilédones de sementes germinadas in vitro. Estas foram utilizadas como explante inicial, colocadas em meio MS (Murashige e /skoog, 1962), com 0,2mg.L-1 de ANA em combinação com BAP nas variações de 05mg.L-1 e mantidas à 28 ± 1C, fotoperíodo de 16h de luz e densidade de fluxo luminoso de 48µmol.m-2.s-1 por 45 dias. Maior eficiência na formação de brotos foi obtida utilizando 5mg.L-1 BAP e 0,2mg.L-1 ANA. A presença de ANA inibiu a formação de raízes quando combinada com diferentes concentrações de citocinina (BAP, 1 a 5mg.L-1). Altas concentrações de BAP induziram aumento no número de explantes com brotos e no número de brotos/cotilédone
RESUMO
Leptospirosis is a worldwide sanitary problem. Its clinical signs resemble that of other diseases like Dengue and Flu, and it is difficult to distinguish between them. Currently available diagnostic methods shown low sensitivity and specificity. Efforts have been made to develop simpler, faster and more efficient diagnostic methods. The aim of this work was to evaluate and optimize a Nested-PCR method for diagnosis of leptospirosis. Primers were designed to amplify a 264 bp region within the LipL32 gene. The sensitivity and specificity of the assay was evaluated using seven saprophytic serovars and 35 pathogenic serovars. This technique showed to be very specific for pathogenic serovars, however it lacked sensitivity. In order to enhance the sensitivity, another primer pair was designed which amplify a 183 bp region within the 264 bp region in lipL32 gene, and used in a Nested-PCR assay. This approach was much more sensitive than traditional PCR.
A leptospirose constitui um problema sanitário de importância mundial. Esta doença caracteriza-se por apresentar sintomas muito parecidos com os de outras doenças como a dengue e a gripe e, clinicamente é difícil de distingui-las. Técnicas de diagnóstico da leptospirose atualmente disponíveis apresentam baixa sensibilidade e ou especificidade. Por isso, tem havido um grande esforço no sentido de desenvolver testes rápidos e eficientes, baseados em técnicas de biologia molecular. Este trabalho objetivou a avaliação e otimização do Nested-PCR, para o diagnóstico de leptospirose. Para isso foi desenhado um par de primers que amplifica uma região de 264 pb do gene LipL32. A sensibilidade e especificidade do teste foram avaliadas utilizando 7 sorovares saprófitas e 35 sorovares patogênicos. Este PCR mostrou-se específico para leptospiras patogênicas, porém a sensibilidade não foi muito alta. Com o objetivo de melhorar a sensibilidade do teste , foi desenhado outro par de primers que amplifica uma região de 183 pb do gene LipL32, interna a de 264 pb para a realização do Nested-PCR. Nesta reação foi utilizado como DNA molde o produto da primeira amplificação. O Nested-PCR mostrou-se mais sensível que o PCR normal, pois foi capaz de detectar um baixo número de células bacterianas.
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Ocimum basilicum L. (sweet basil), of the family Lamiaceae, is rich in aromatic essential oils and valuable for its pharmaceutical, aromatic and culinary properties. The present study describes the procedure for micropropagation of O. basilicum using cotiledonary leafs from in vitro geminated plants. Cotyledons from in vitro germinated seeds were used as initial explants, put in MS (Murashige and Skoog, 1962) medium with 0.2mg.L-1 NAA (1-Naphthalene acetic acid) in combination with 05mg.L-1 BAP(6-Benzyl aminopurine) and kept at 28 ± 1ºC, 16-h light photoperiod and 48µmol.m-2.s-1 luminous density flow, for 45 days. The highest efficiency of shoot formation after 45 days occurred in the medium containing 5mg.L-1 BAP and 0,2mg.L-1 NAA. The presence of NAA inhibited root formation, when combined with different concentrations of cytokinin (BAP, 1 to 5mg.L-1). Higher BAP concentrations induced an increase in the number of explants with shoots and a higher number of shoots/cotyledon
Ocimum basilicum L. (manjericão) pertencente à família das Lamiaceae é rico em óleos essenciais aromáticos e valorizado por suas propriedades farmacêuticas, aromáticas e culinárias. Neste trabalho descrevemos o procedimento para micropropagação de O. basilicum utilizando cotilédones de sementes germinadas in vitro. Estas foram utilizadas como explante inicial, colocadas em meio MS (Murashige e /skoog, 1962), com 0,2mg.L-1 de ANA em combinação com BAP nas variações de 05mg.L-1 e mantidas à 28 ± 1C, fotoperíodo de 16h de luz e densidade de fluxo luminoso de 48µmol.m-2.s-1 por 45 dias. Maior eficiência na formação de brotos foi obtida utilizando 5mg.L-1 BAP e 0,2mg.L-1 ANA. A presença de ANA inibiu a formação de raízes quando combinada com diferentes concentrações de citocinina (BAP, 1 a 5mg.L-1). Altas concentrações de BAP induziram aumento no número de explantes com brotos e no número de brotos/cotilédone