RESUMO

An experimental inactivated vaccine against bovine herpesvirus-1 (BoHV-1) was produced aiming to evaluate the systemic and local antibody responses in 12 seronegative heifers, after vaccination and revaccination. Serum samples were submitted to virus neutralization assay and to ELISA test for detection of IgG1 and IgG2 isotypes. Nasal secretion samples were submitted to the same ELISA test for detection of IgG1 and IgG2 isotypes. The results showed that moderate to high neutralizing titres and IgG1 and IgG2 antibody responses were induced after the second vaccination in the serum and in nasal secretions up to 114 days post vaccination. IgG2 antibodies were the prevalent isotype for most of the post-vaccination period. The results indicate that BoHV-1 experimental inactivated vaccine elicited potentially protective IgG1 and IgG2 antibody levels, both in the systemic and mucosal compartments.

Uma vacina experimental inativada contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) foi produzida com o objetivo de se avaliar a resposta imune humoral local e sistêmica contra o BoHV-1, em 12 novilhas soronegativas, após a vacinação e a revacinação. Os soros foram submetidos à prova de vírus-neutralização para quantificação do título de anticorpos neutralizantes e a um ELISA para detecção de IgG1 e IgG2. Os swabs nasais também foram submetidos ao ELISA para detecção de IgG1 e IgG2 na secreção nasal. Os resultados demonstraram que títulos de anticorpos neutralizantes foram induzidos após a revacinação, em níveis moderados a altos, permanecendo em níveis significativos no soro sanguíneo e na secreção nasal até o dia 114 pós-vacinação. O IgG2 foi o isótipo predominante na maior parte do período pós-vacinação, tanto na secreção nasal, como no compartimento sistêmico. A vacina experimental inativada contra o BoHV-1 estimulou níveis de anticorpos potencialmente protetores dos isótipos IgG1 e IgG2, tanto no compartimento sistêmico, como nas mucosas.

RESUMO

An experimental inactivated vaccine against bovine herpesvirus-1 (BoHV-1) was produced aiming to evaluate the systemic and local antibody responses in 12 seronegative heifers, after vaccination and revaccination. Serum samples were submitted to virus neutralization assay and to ELISA test for detection of IgG1 and IgG2 isotypes. Nasal secretion samples were submitted to the same ELISA test for detection of IgG1 and IgG2 isotypes. The results showed that moderate to high neutralizing titres and IgG1 and IgG2 antibody responses were induced after the second vaccination in the serum and in nasal secretions up to 114 days post vaccination. IgG2 antibodies were the prevalent isotype for most of the post-vaccination period. The results indicate that BoHV-1 experimental inactivated vaccine elicited potentially protective IgG1 and IgG2 antibody levels, both in the systemic and mucosal compartments.

Uma vacina experimental inativada contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) foi produzida com o objetivo de se avaliar a resposta imune humoral local e sistêmica contra o BoHV-1, em 12 novilhas soronegativas, após a vacinação e a revacinação. Os soros foram submetidos à prova de vírus-neutralização para quantificação do título de anticorpos neutralizantes e a um ELISA para detecção de IgG1 e IgG2. Os swabs nasais também foram submetidos ao ELISA para detecção de IgG1 e IgG2 na secreção nasal. Os resultados demonstraram que títulos de anticorpos neutralizantes foram induzidos após a revacinação, em níveis moderados a altos, permanecendo em níveis significativos no soro sanguíneo e na secreção nasal até o dia 114 pós-vacinação. O IgG2 foi o isótipo predominante na maior parte do período pós-vacinação, tanto na secreção nasal, como no compartimento sistêmico. A vacina experimental inativada contra o BoHV-1 estimulou níveis de anticorpos potencialmente protetores dos isótipos IgG1 e IgG2, tanto no compartimento sistêmico, como nas mucosas.

RESUMO

Monoclonal antibodies are the basis of various techniques used for antigen detection or characterization, and their use is specially recommended for the identification of viral strains involved in the etiology of infectious bronchitis outbreaks. These antibodies are homogeneous, highly specific and fully characterizable, allowing the improvement of immunological techniques detection and antigenic characterization of avian infectious bronchitis virus strains (IBV). A phage display library was used, which was prepared previously against the IBV vaccine strain (H120) for the selection of new scFv antibody fragments specific for heterologous IBV strains isolated from outbreaks in Brazil (IBVPR01, IBVPR05) and USA (SE-17). After three cycles of panning, a set of 15 scFv antibodies were expressed in phages and cross-reacted in ELISA with these three viral strains. Western-blotting analysis showed that two of the clones were expressing scFv specific for the nucleoprotein of these IBV strains, as well as to the recombinant form of this protein derived from M41. In conclusion, the recombinant fragments of monoclonal antibodies expressed in phage have a great potential for future use in immunodiagnostic techniques and to study the evolution of infectious bronchitis virus.

Anticorpos monoclonais constituem a base de vários testes usados na detecção e na identificação de antígenos. Nesse contexto, tais imuno-reagentes têm sido extensivamente empregados na identificação de estirpes virais envolvidas na etiologia de surtos de bronquite infecciosa a campo, permitindo o aperfeiçoamento das técnicas de detecção e caracterização antigênica do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBI). No presente estudo, uma biblioteca de fragmentos de anticorpos de galinha originalmente preparada por phage display contra a estirpe vacinal (H120) do VBI foi usada para a seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes com reatividade cruzada para as estirpes heterólogas IBVPR01 e IBVPR05, isoladas de surtos a campo no Brasil e a estirpe SE-17, isolada nos Estados Unidos. Após três ciclos de panning, foi identificado, pelo ELISA, um conjunto de 15 anticorpos scFv expressos em fagos e com reatividade cruzada para essas mesmas estirpes do VBI. A análise por Western-blotting revelou que dois desses clones apresentavam fagos expressando fragmentos de anticorpos monoclonais com reatividade cruzada para a nucleoproteína N das três estirpes do VBI e também para a forma recombinante dessa nucleoproteína derivada da estirpe M41. Concluindo, os fragmentos de anticorpos monoclonais recombinantes scFv-N produzidos em fagos interagem com um epítopo mais conservado da proteína N do VBI e apresentam um grande potencial para utilização na detecção e no diagnóstico direto desse vírus.

RESUMO

Monoclonal antibodies are the basis of various techniques used for antigen detection or characterization, and their use is specially recommended for the identification of viral strains involved in the etiology of infectious bronchitis outbreaks. These antibodies are homogeneous, highly specific and fully characterizable, allowing the improvement of immunological techniques detection and antigenic characterization of avian infectious bronchitis virus strains (IBV). A phage display library was used, which was prepared previously against the IBV vaccine strain (H120) for the selection of new scFv antibody fragments specific for heterologous IBV strains isolated from outbreaks in Brazil (IBVPR01, IBVPR05) and USA (SE-17). After three cycles of panning, a set of 15 scFv antibodies were expressed in phages and cross-reacted in ELISA with these three viral strains. Western-blotting analysis showed that two of the clones were expressing scFv specific for the nucleoprotein of these IBV strains, as well as to the recombinant form of this protein derived from M41. In conclusion, the recombinant fragments of monoclonal antibodies expressed in phage have a great potential for future use in immunodiagnostic techniques and to study the evolution of infectious bronchitis virus.

Anticorpos monoclonais constituem a base de vários testes usados na detecção e na identificação de antígenos. Nesse contexto, tais imuno-reagentes têm sido extensivamente empregados na identificação de estirpes virais envolvidas na etiologia de surtos de bronquite infecciosa a campo, permitindo o aperfeiçoamento das técnicas de detecção e caracterização antigênica do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBI). No presente estudo, uma biblioteca de fragmentos de anticorpos de galinha originalmente preparada por phage display contra a estirpe vacinal (H120) do VBI foi usada para a seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes com reatividade cruzada para as estirpes heterólogas IBVPR01 e IBVPR05, isoladas de surtos a campo no Brasil e a estirpe SE-17, isolada nos Estados Unidos. Após três ciclos de panning, foi identificado, pelo ELISA, um conjunto de 15 anticorpos scFv expressos em fagos e com reatividade cruzada para essas mesmas estirpes do VBI. A análise por Western-blotting revelou que dois desses clones apresentavam fagos expressando fragmentos de anticorpos monoclonais com reatividade cruzada para a nucleoproteína N das três estirpes do VBI e também para a forma recombinante dessa nucleoproteína derivada da estirpe M41. Concluindo, os fragmentos de anticorpos monoclonais recombinantes scFv-N produzidos em fagos interagem com um epítopo mais conservado da proteína N do VBI e apresentam um grande potencial para utilização na detecção e no diagnóstico direto desse vírus.

RESUMO

O presente trabalho foi realizado para analisar a utilização de um Ensaio Imunoenzimático (ELISA) para detecção de resposta sorológica em aves contra Salmonella Enteritidis. Para a realização do teste utilizou-se um antígeno que consistia de proteína solúvel obtida após sonicação de cultura de Salmonella Enteritidis cepa aflagelar (AgSE conc. 7,59mg/mL), os conjugados peroxidase e fosfatase alcalina e amostras de soros positivos e negativos para vários sorotipos de Salmonella. Os resultados demonstraram que o antígeno pode ser utilizado diluído a 1:10.000 (AgSE + peroxidase) e 1:5.000 (AgSE + fosfatase alcalina) e as amostras de soros a serem analisadas deverão ser diluídas a 1:1.000 para ambos os conjugados. Nestas condições, o ELISA/AgSE foi capaz de detectar resposta sorológica para S. Enteritidis, S. Gallinarum, S. Pullorum e resposta sorológica em soros provenientes de aves vacinadas contra S. Enteritidis.

RESUMO

O presente trabalho foi realizado para analisar a utilização de um Ensaio Imunoenzimático (ELISA) para detecção de resposta sorológica em aves contra Salmonella Enteritidis. Para a realização do teste utilizou-se um antígeno que consistia de proteína solúvel obtida após sonicação de cultura de Salmonella Enteritidis cepa aflagelar (AgSE conc. 7,59mg/mL), os conjugados peroxidase e fosfatase alcalina e amostras de soros positivos e negativos para vários sorotipos de Salmonella. Os resultados demonstraram que o antígeno pode ser utilizado diluído a 1:10.000 (AgSE + peroxidase) e 1:5.000 (AgSE + fosfatase alcalina) e as amostras de soros a serem analisadas deverão ser diluídas a 1:1.000 para ambos os conjugados. Nestas condições, o ELISA/AgSE foi capaz de detectar resposta sorológica para S. Enteritidis, S. Gallinarum, S. Pullorum e resposta sorológica em soros provenientes de aves vacinadas contra S. Enteritidis.

RESUMO

The O1Campos strain of foot and mouth disease virus (FMDV) used as inducing agent in the pleurisy model was able to trigger a pro-inflammatory effect on normal and immune guinea pigs. The proinflammatory activity which was detected at two times of the pleurisy (24 and 48 hours) on normal guinea pigs was characterized only by mononuclear (MN) cell influx, during the first interval of the reaction and by edematogenic effect, MN and polimorphonuclcar (PMN) leucocyte migration, at the last time of the reaction. The inflammatory reaction profiles recorded on immune guinea pigs (vaccinated with anti-O1Campos oil adjuvanted vaccine), both after 7 and 30 days post vaccination (pv) have showed, in both interval, lower intensities than that observed in normal guinea pigs, although in the 7 days PV guinea pigs the accumulations of total leucocytes and PMN were similar to that displayed by normal animals, after 48 hours of the reaction. Besides, on thirty days PV guinea pigs the FMDV induced a significant increase in volume of exudate and MN cell infiltration, after 24 hours, and all of the inflammatory parameters values dropped to normal levels, during the second interval of the reaction. It was found a negative association between the increase in serum neutralizing antibody titer, from 7 to 30 days PV and the intensities of pleural inflammatory parameters on the immun

A estirpe O1Campos do vírus da febre aftosa (VFA) usada como agente indutor do teste de pleurisia foi capaz de desencadear um efeito pró-inflamatório em cobaias normais e imunes. A atividade pró-inflamatória do VFA, detectada em dois intervalos de pleurisia (24 e 48 horas) foi demonstrada, somente por quimiotaxia de leucócitos mononucleares (MN), no primeiro intervalo e por efeito edematogênico, migração de MN e polimorfonucleares (PMN), no último intervalo de reação. Os perfis de reação inflamatória induzida pelo VFA em cobaias imunes (imunizadas com vacinas oleosas anti-VFAO1Campos), aos 7 e aos 30 dias pós-vacinação (PV) apresentaram imensidades mais baixas do que as observadas em cobaias normais, embora nas cobaias com 7 dias de vacinação a quimiotaxia de leucócitos totais e de PMN tenha sido similar àquela encontrada nos animais normais, no intervalo de 48 horas de reação. Ademais, nas cobaias com 30 dias PV, o VFA induziu um aumento significante no volume de exsudato e na infiltração de MN, no intervalo de 24 horas, sendo que os valores de todos os parâmetros do exsudato inflamatório caíram a níveis normais, no segundo intervalo de reação. Nas cobaias imunes foi observada uma associação negativa entre o aumento no título de anticorpos soro-neutralizantes, de 7 para 30 dias PV e as intensidades dos parâmetros inflamatórios pleurais. O teste de pleurisia revelou-se um proce

RESUMO

The results of experiments to investigate antibody to virus-infection-associated (VIA) antigen in 157 sera samples from Indian buffalos (Bubalus bubalis), 370 sera from sheep and 180 sera from goats from some cities of São Paulo State, Brazil, are reported. Antibody against virus-infection-associated (VIA) antigen was found in 52 per cent of Indian buffalos, in 5,4 per cent of sheep and in 11 per cent of goats. These studies were done with sera from animals with well-documented pre-and postexposure histories of foot-and-mouth disease and vaccination.

Foi realizado um estudo sorológico em 157 amostras de soros de búfalos indianos (Bubalus bubalis), em 370 soros de ovinos e em 180 soros de caprinos de algumas propriedades do Estado de São Paulo, Brasil. Os resultados encontrados revelam que 52% dos búfalos, 5,4% dos ovinos e 11% dos caprinos continham anticorpos anti antígeno VIA do vírus da febre aftosa. Esse estudo foi realizado em animais cujo histórico de vacinação e de exposição ao vírus da febre aftosa era conhecido.

RESUMO

The results of experiments to investigate antibody to virus-infection-associated (VIA) antigen in 157 sera samples from Indian buffalos (Bubalus bubalis), 370 sera from sheep and 180 sera from goats from some cities of São Paulo State, Brazil, are reported. Antibody against virus-infection-associated (VIA) antigen was found in 52 per cent of Indian buffalos, in 5,4 per cent of sheep and in 11 per cent of goats. These studies were done with sera from animals with well-documented pre-and postexposure histories of foot-and-mouth disease and vaccination.

Foi realizado um estudo sorológico em 157 amostras de soros de búfalos indianos (Bubalus bubalis), em 370 soros de ovinos e em 180 soros de caprinos de algumas propriedades do Estado de São Paulo, Brasil. Os resultados encontrados revelam que 52% dos búfalos, 5,4% dos ovinos e 11% dos caprinos continham anticorpos anti antígeno VIA do vírus da febre aftosa. Esse estudo foi realizado em animais cujo histórico de vacinação e de exposição ao vírus da febre aftosa era conhecido.