RESUMO
The strain Klebsiella sp. K18 produces the enzyme glucosyltransferase and catalyses the conversion of sucrose to palatinose, an alternative sugar that presents low cariogenicity. Response Surface Methodology was successfully employed to determine the optimal concentration of culture medium components. Maximum glucosyltransferase production (21.78 U mL-1) was achieved using the optimized medium composed by sugar cane molasses (80 g L-1), bacteriological peptone (7 g L-1) and yeast extract (20 g L-1), after 8 hours of fermentation at 28°C. The conversion of sucrose to palatinose was studied utilizing immobilized cells in calcium alginate. The effects of the alginate concentration (2-4%), cell mass concentration (20-40%) and substrate concentration (25-45%) were evaluated and the yield of palatinose was approximately 62.5%.
A linhagem Klebsiella sp. K18 produz a enzima glicosiltransferase que catalisa a conversão de sacarose em palatinose, um açúcar alternativo que apresenta baixa cariogenicidade. Metodologia de Superfície de Resposta foi empregada com sucesso para determinar a concentração ótima dos componentes do meio de cultivo. A máxima produção de glicosiltransferase (21,78 U mL-1) foi obtida utilizando o meio de cultivo otimizado composto por melaço de cana de açúcar (80 g L-1), peptona bacteriológica (7 g L-1) e extrato de levedura (20 g L-1), após 8 horas de fermentação a 28°C. A conversão de sacarose em palatinose foi estudada utilizando células imobilizadas em alginato de cálcio. Os efeitos da concentração de alginato (2-4%), concentração de massa celular (20-40%) e concentração de substrato (25-45%) foram avaliados e a porcentagem de palatinose foi de aproximadamente 62,5%.
RESUMO
Cellulosimicrobium cellulans is one of the microorganisms that produces a wide variety of yeast cell wall-degrading enzymes, -1,3-glucanase, protease and chitinase. Dried cells of Saccharomyces cerevisiae were used as carbon and nitrogen source for cell growth and protease production. The medium components KH2PO4, KOH and dried yeast cells showed a significant effect (p 0.05) on the factorial fractional design. A second design was prepared using two factors: pH and percentage of dried yeast cells. The results showed that the culture medium for the maximum production of protease was 0.2 g/l of MgSO4.7H2O, 2.0 g/l of (NH4)2SO4 and 8% of dried yeast cells in 0.15M phosphate buffer at pH 8.0. The maximum alkaline protease production was 7.0 ± 0.27 U/ml over the center point. Crude protease showed best activity at 50°C and pH 7.0-8.0, and was stable at 50°C.
Cellulosimicrobium cellulans é um microrganismo que produz uma variedade de enzimas que hidrolisam a parede celular de leveduras: -1,3-glucanase, protease e quitinase. Células desidratadas de Saccharomyces cerevisiae foram usadas como fonte de carbono e nitrogênio para o crescimento celular e produção de protease. Os componentes do meio de cultura: KH2PO4, KOH e células de levedura desidratadas mostraram efeitos significativos (p 0,05) no planejamento experimental fracionário. Um segundo planejamento foi preparado usando dois fatores: pH e porcentagem de células de levedura desidratadas. Os resultados mostraram que o meio de cultura para a produção máxima de protease foi 0,2 g/L de MgSO4.7H2O; 2,0 g/L de (NH4)2SO4 e 8% de células de levedura desidratadas em tampão fosfato 0,15M e pH 8,0. A produção máxima de protease alcalina foi 7,0 ± 0,27 U/mL no ponto central. A protease bruta apresentou atividade ótima a 50 °C e pH 7,0-8,0; e foi estável a 50°C.
RESUMO
This study concerned the production, purification and application of extracellular chitinase from Cellulosimicrobium cellulans strain 191. In shaken flasks the maximum yield of chitinase was 6.9 U/mL after 72 h of cultivation at 25ºC and 200 rpm. In a 5 L fermenter with 1.5 vvm aeration, the highest yield obtained was 4.19 U/mL after 168 h of fermentation at 25ºC and 200 rpm, and using 3 vvm, it was 4.38 U/mL after 144 h of fermentation. The chitinase (61 KDa) was purified about 6.65 times by Sepharose CL 4B 200 gel filtration with a yield of 46.61%. The purified enzyme was able to lyse the cell walls of some fungi and to form protoplasts.
O presente estudo visou a produção, purificação e aplicação da quitinase extracelular da linhagem Cellulosimicrobium cellulans 191. A maior produção de quitinase em frascos agitados foi 6,9 U/mL após 72 h de fermentação a 25ºC e 200 rpm. Em fermentador de 5 L utilizando aeração de 1,5 vvm, a maior atividade da enzima foi 4,19 U/mL após 168 h de fermentação a 25ºC e 200 rpm; e com 3 vvm, foi obtido 4,38 U/mL após 144 h de fermentação. A quitinase (61 KDa) foi purificada cerca de 6,65 vezes em coluna de filtração em gel Sepharose CL 4B 200 com um rendimento de 46,61%. A enzima purificada foi capaz de lisar a parede celular de alguns fungos e formar protoplastos.
RESUMO
The strain Saccharomyces cerevisiae Y500-4L, selected from the must of alcohol producing plants, liberates a toxin which is lethal to the commercial yeast produced by Fleischmann Royal Nabisco and other strains of yeast. This toxin was characterized, and the maximum production was obtained after 24 hours of incubation at 25ºC in YEPD medium. The maximum activity was achieved between pH 4.1 and 4.5 and between 22 and 25ºC and maximum stability in the pH range 3.8 to 4.5 at -10ºC. The killer toxin was inactivated by heating at 40ºC for 1 hour at pH 4.1. After concentration by ultrafiltration of culture supernatants and purification by gel filtration chromatography, the molecular weight of the purified toxin was estimated by SDS-PAGE to be about 18-20 kDa.
A linhagem de Saccharomyces cerevisiae Y500-4L, selecionada de mosto de fermentação de usina de álcool, produz toxina "killer", letal à levedura comercial Fleischmann Royal Nabisco e outras linhagens de leveduras. Esta proteína foi caracterizada, verificando-se que a produção máxima foi obtida após 24 horas de incubação a 25ºC em meio YEPD. A toxina "killer" apresentou maior atividade na faixa de pH 4,1-4,5 e temperatura de 22-25ºC; e maior estabilidade na faixa de pH 3,8-4,5 a -10ºC, sendo totalmente inativada após 1 hora de incubação a 40ºC em pH 4,1. Após concentração a partir do sobrenadante do meio de cultura através de ultrafiltração e purificação por cromatografia de filtração em gel, estimou-se, através de SDS-PAGE, que o peso molecular desta toxina é cerca de 18 a 20 kDa.