RESUMO
Objetivo: Realizar uma comparação, em relação a sensibilidade, das técnicas de cultura bacteriana e PCR para detecção de Pasteurella pneumotropica, em colônias convencionais de camundongos das linhagens isogênicas C57BL/6, BALB/c e heterogênica Swiss; ratos Wistar e Hamster Golden. Materiais e Métodos: 230 amostras de traquéia foram coletadas e divididas em partes iguais: uma parte foi encaminhada para a cultura bacteriana, onde foram realizadas provas bioquímicas manuais e semi-automatizadas. A outra parte foi submetida à reação de PCR, onde os oligonucleotídeos iniciadores foram F; 5 ACCTACTCTTGACATCCAGA 3 e R; 5 CGCTCCACATCGCTGCTT 3 que amplificam em 296 pb. Os produtos obtidos foram separados por eletroforese em gel de agarose. A visualização e fotodocumentação foram realizadas sob luz ultravioleta. Resultados e conclusão: Os resultados obtidos através da cultura bacteriana foram de 1,75% de casos positivos e 98,25% de negativos. Em relação ao PCR observamos o resultado de 63% de positivos e 37% de casos negativos. Concluindo, nossos resultados demonstram que a técnica de PCR oferece significativamente maior sensibilidade para detecção de P. pneumotropica quando comparado a cultura bacteriana. CEUA nº 251/11.(AU)
OBJECTIVE: To conduct a comparative study of the sensitivity by bacterial culture and PCR detection of Pasteurella pneumotropica in conventional colonies of inbred mice strains C57BL/6, BALB/c and Swiss outbred; Golden Hamster and Wistar rats. MATERIALS AND METHODS: 230 samples of the trachea were collected and divided into equal parts: one part was sent for culture, where biochemical tests were performed manually and semi-automated, after bacterial isolation. The other part was subjected to PCR, used primers F, 5 ACCTACTCTTGACATCCAGA 3 and R, 5 CGCTCCACATCGCTGCTT 3 which amplifies at 296 bp. The products obtained were separated by electrophoresis in agarose gel. Visualization and photodocumentation were performed under ultraviolet light. RESULTS AND CONCLUSION: The results obtained by bacterial culture were 1.75% of positive cases and negative in 98.25%; 63% and 37% of cases positive and negative, respectively, by PCR. These results point to the greater sensitivity of PCR (x2 = 0.10, 0.80 < p <0.50) when compared to bacterial culture. CEUA nº 251/11(AU)
Assuntos
Animais , Benchmarking/estatística & dados numéricos , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Bactérias , Pasteurella pneumotropica/patogenicidade , Roedores/genéticaRESUMO
Objetivo: Realizar uma comparação, em relação a sensibilidade, das técnicas de cultura bacteriana e PCR para detecção de Pasteurella pneumotropica, em colônias convencionais de camundongos das linhagens isogênicas C57BL/6, BALB/c e heterogênica Swiss; ratos Wistar e Hamster Golden. Materiais e Métodos: 230 amostras de traquéia foram coletadas e divididas em partes iguais: uma parte foi encaminhada para a cultura bacteriana, onde foram realizadas provas bioquímicas manuais e semi-automatizadas. A outra parte foi submetida à reação de PCR, onde os oligonucleotídeos iniciadores foram F; 5 ACCTACTCTTGACATCCAGA 3 e R; 5 CGCTCCACATCGCTGCTT 3 que amplificam em 296 pb. Os produtos obtidos foram separados por eletroforese em gel de agarose. A visualização e fotodocumentação foram realizadas sob luz ultravioleta. Resultados e conclusão: Os resultados obtidos através da cultura bacteriana foram de 1,75% de casos positivos e 98,25% de negativos. Em relação ao PCR observamos o resultado de 63% de positivos e 37% de casos negativos. Concluindo, nossos resultados demonstram que a técnica de PCR oferece significativamente maior sensibilidade para detecção de P. pneumotropica quando comparado a cultura bacteriana. CEUA nº 251/11.
OBJECTIVE: To conduct a comparative study of the sensitivity by bacterial culture and PCR detection of Pasteurella pneumotropica in conventional colonies of inbred mice strains C57BL/6, BALB/c and Swiss outbred; Golden Hamster and Wistar rats. MATERIALS AND METHODS: 230 samples of the trachea were collected and divided into equal parts: one part was sent for culture, where biochemical tests were performed manually and semi-automated, after bacterial isolation. The other part was subjected to PCR, used primers F, 5 ACCTACTCTTGACATCCAGA 3 and R, 5 CGCTCCACATCGCTGCTT 3 which amplifies at 296 bp. The products obtained were separated by electrophoresis in agarose gel. Visualization and photodocumentation were performed under ultraviolet light. RESULTS AND CONCLUSION: The results obtained by bacterial culture were 1.75% of positive cases and negative in 98.25%; 63% and 37% of cases positive and negative, respectively, by PCR. These results point to the greater sensitivity of PCR (x2 = 0.10, 0.80 < p <0.50) when compared to bacterial culture. CEUA nº 251/11
Assuntos
Animais , Bactérias , Benchmarking/estatística & dados numéricos , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Pasteurella pneumotropica/patogenicidade , Roedores/genéticaRESUMO
Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5 CTATGACGGGTATCCGGC 3' E R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' que amplificam um produto de 374 Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5 CTATGACGGGTApb. Separados por eletroforese em gel de agarose, os produtos foram visualizados e fotodocumentados sob luz ultravioleta.A técnica de PCR possibilitou a detecção de camundongos positivos, sendo 18% da linhagem C57BL/6, 52% da linhagem BALB/c, 62% da linhagem Swiss. Em ratos da linhagem Wistar, foram detectados 28% de positividade e em hamster, 44%. Esses resultados sugerem que a técnica de PCR empregada foi eficaz para a triagem de Helicobacter spp em colônias de animais de laboratório. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP. (AU)
This work aimed to optimize the screening of the bacterium Helicobacter spp in sanitary control program of laboratory animals, using the PCR (Polymerase Chain Reaction). Fifty stool samples from each strain or species: C57BL/6, BALB/c, Swiss, Hamster and Wistar rats were subjected to PCR using the primers F: 5 CTATGACGGGTATCCGGC 3' and R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' that amplofy 374 bp product. Separated by agarose gel electrophoresis, products were visualized and photographed under ultraviolet light. The PCR technique allowed the detection of positive mice, 18% of C57BL/6, 52% of the strain BALB/c, 62% of Swiss strain. In Wistar rats were detected 28% ´possivity and hamster 44%. These results suggest that the PCR technique used was effective in screening for Helicobacter spp in colonies of laboratory animals. Certified CRAU Nº 251/11 HCFMUSP.(AU)
Assuntos
Animais , Roedores/classificação , Reação em Cadeia da Polimerase/instrumentação , Helicobacter/patogenicidadeRESUMO
Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5 CTATGACGGGTATCCGGC 3' E R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' que amplificam um produto de 374 Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5 CTATGACGGGTApb. Separados por eletroforese em gel de agarose, os produtos foram visualizados e fotodocumentados sob luz ultravioleta.A técnica de PCR possibilitou a detecção de camundongos positivos, sendo 18% da linhagem C57BL/6, 52% da linhagem BALB/c, 62% da linhagem Swiss. Em ratos da linhagem Wistar, foram detectados 28% de positividade e em hamster, 44%. Esses resultados sugerem que a técnica de PCR empregada foi eficaz para a triagem de Helicobacter spp em colônias de animais de laboratório. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.
This work aimed to optimize the screening of the bacterium Helicobacter spp in sanitary control program of laboratory animals, using the PCR (Polymerase Chain Reaction). Fifty stool samples from each strain or species: C57BL/6, BALB/c, Swiss, Hamster and Wistar rats were subjected to PCR using the primers F: 5 CTATGACGGGTATCCGGC 3' and R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' that amplofy 374 bp product. Separated by agarose gel electrophoresis, products were visualized and photographed under ultraviolet light. The PCR technique allowed the detection of positive mice, 18% of C57BL/6, 52% of the strain BALB/c, 62% of Swiss strain. In Wistar rats were detected 28% ´possivity and hamster 44%. These results suggest that the PCR technique used was effective in screening for Helicobacter spp in colonies of laboratory animals. Certified CRAU Nº 251/11 HCFMUSP.