RESUMO
This study aims to evaluate the atypical lymphocyte in Holstein dairy cows in seropositive animals for bovine leukemia virus (BLV) with or without persistent lymphocytosis and in seronegative BLV ones, and correlate them with apoptosis of cells CD5+ and lymphocyte proliferation. Thus, we selected 56 animals, and divided according to the white blood count and serological response for BLV performed by agar gel immunodiffusion and by enzyme immunoabsorbent assay in: negative (N, n=25), nonlymphocytic (AL, n=12) and with persistent lymphocytosis (PL, n=19). In these animals, the atypical lymphocyte was evaluated. 15 animals were selected, five for each group, and they were evaluated for correlation about atypical lymphocyte and lymphocyte proliferation or apoptosis of CD5+ cells. The results of this study showed that the absolute and relative values of atypical lymphocytes were higher in group PL. Regarding atypical lymphocytes, lymphocytes Gumprecht shadow, lymphocyte and monocytoid lymphocytes with dual core, were found in the three study groups, but more commonly found in animals infected with BLV especially in animals with PL. The apoptosis of CD5+ cells has a positive correlation with lymphocytes with dual core, which did not occur in other cell populations. The negative correlation between lymphocyte proliferation and monocytoid lymphocytes was observed, which did not occur i
O presente trabalho teve o objetivo avaliar a atipia linfocitária, em bovinos da raça Holandesa Preto e Branco naturalmente infectados pelo vírus da leucemia bovina (BLV) correlacionando-a com as duas formas de manifestação da doença, linfocitose persistente (LP) e alinfocitóticos (AL). Assim, foram selecionados 56 animais, que foram divididos em três grupos distintos, sendo eles negativos (N, n=25), alinfocitóticos ( n=12) e com linfocitose persistente (n=19), de acordo com resultados do leucograma e do sorodiagnóstico da Leucose Enzoótica Bovina (LEB) pela imunodifusão em agar gel e pelo ensaio imunoenzimático. Destes, foram avaliadas as atipias linfocitárias. Em 15 animais, cinco de cada grupo, realizou-se análise de correlação entre as atipias linfocitárias e com os índices de proliferação de linfócitos e apoptose de células CD5+. Os resultados deste estudo mostraram que os linfócitos atípicos, e suas diferentes morfologias: sombra de Gümprecht, linfócito monocitóide e linfócito com núcleo duplo, foram encontrados nos três grupos, porém mais comumente em animais infectados pelo BLV, predominantemente no grupo manifestando LP. Na análise da correlação entre a apoptose de células CD5+ e a porcentagem das populações linfocitárias, observou-se que a apoptose teve correlação negativa com atipia linfocitária. Na correlação entre a proliferação, observou-se que quanto maior a porc
RESUMO
This study aims to evaluate the atypical lymphocyte in Holstein dairy cows in seropositive animals for bovine leukemia virus (BLV) with or without persistent lymphocytosis and in seronegative BLV ones, and correlate them with apoptosis of cells CD5+ and lymphocyte proliferation. Thus, we selected 56 animals, and divided according to the white blood count and serological response for BLV performed by agar gel immunodiffusion and by enzyme immunoabsorbent assay in: negative (N, n=25), nonlymphocytic (AL, n=12) and with persistent lymphocytosis (PL, n=19). In these animals, the atypical lymphocyte was evaluated. 15 animals were selected, five for each group, and they were evaluated for correlation about atypical lymphocyte and lymphocyte proliferation or apoptosis of CD5+ cells. The results of this study showed that the absolute and relative values of atypical lymphocytes were higher in group PL. Regarding atypical lymphocytes, lymphocytes Gumprecht shadow, lymphocyte and monocytoid lymphocytes with dual core, were found in the three study groups, but more commonly found in animals infected with BLV especially in animals with PL. The apoptosis of CD5+ cells has a positive correlation with lymphocytes with dual core, which did not occur in other cell populations. The negative correlation between lymphocyte proliferation and monocytoid lymphocytes was observed, which did not occur i
O presente trabalho teve o objetivo avaliar a atipia linfocitária, em bovinos da raça Holandesa Preto e Branco naturalmente infectados pelo vírus da leucemia bovina (BLV) correlacionando-a com as duas formas de manifestação da doença, linfocitose persistente (LP) e alinfocitóticos (AL). Assim, foram selecionados 56 animais, que foram divididos em três grupos distintos, sendo eles negativos (N, n=25), alinfocitóticos ( n=12) e com linfocitose persistente (n=19), de acordo com resultados do leucograma e do sorodiagnóstico da Leucose Enzoótica Bovina (LEB) pela imunodifusão em agar gel e pelo ensaio imunoenzimático. Destes, foram avaliadas as atipias linfocitárias. Em 15 animais, cinco de cada grupo, realizou-se análise de correlação entre as atipias linfocitárias e com os índices de proliferação de linfócitos e apoptose de células CD5+. Os resultados deste estudo mostraram que os linfócitos atípicos, e suas diferentes morfologias: sombra de Gümprecht, linfócito monocitóide e linfócito com núcleo duplo, foram encontrados nos três grupos, porém mais comumente em animais infectados pelo BLV, predominantemente no grupo manifestando LP. Na análise da correlação entre a apoptose de células CD5+ e a porcentagem das populações linfocitárias, observou-se que a apoptose teve correlação negativa com atipia linfocitária. Na correlação entre a proliferação, observou-se que quanto maior a porc
RESUMO
O objetivo do presente trabalho foi avaliar a frequência e número absoluto de linfócitos B e das subpopulações de linfócitos T em bovinos infectados pelo vírus da leucemia bovina (BLV) com distintos perfis leucocitários conhecidos como não leucêmicos (AL) e com linfocitose persistente (LP). Deste modo, 15 animais foram selecionados e divididos uniformemente em três grupos (negativo, AL e LP). A infecção pelo vírus da BLV foi detectada por imunodifusão em ágar gel e por ensaio imunoenzimático. A quantificação das populações de linfócitos B e T foi determinada por citometria de fluxo utilizando anticorpos monoclonais. Os resultados do presente estudo apontaram para aumento da população de linfócitos B, e também das células CD5+ e CD11b+, que geralmente são alvo da infecção pelo vírus da BLV, nos animais com LP. Consequentemente pode-se observar redução da porcentagem de linfócitos T, T CD4+ no sangue periférico, e de linfócitos T, T CD4+ e T CD8+ nas células mononucleares do sangue periférico isoladas por gradiente de centrifugação. No entanto, nenhuma alteração no número absoluto de linfócitos T, T CD4+ e T CD8+ no sangue periférico foi encontrada nos animais manifestando LP. Entretanto, encontrou-se correlação alta e significativa entre o número absoluto de linfócitos T e T CD8+ e o número absoluto de linfócitos B no sangue periférico nos animais manifestando LP, não encontrand
The aim of the present trial was to determine the frequencies and absolute number of B and T lymphocytes subpopulations in bovine leukemia virus (BLV)-infected dairy cows with distinct lymphocyte profile known as non-leukemic (AL) and persistent lymphocytosis (PL). Thus, 15 animals were selected and divided uniformly in three groups (negative, AL, PL). The BLV infection was detected by agar gel immunodiffusion and enzyme-linked immunosorbent-assay. The lymphocytes subsets were evaluated using monoclonal antibodies by flow cytometry. The results of the present study pointed out to an increase in B lymphocytes, and also an augment in CD5+ and CD11b+ cells in animals showing PL. Consequently, it can be observed a decrease in the percentage of T cells subsets in these animals. Conversely, no significant alterations in the absolute number of the T lymphocytes, T CD4+ cells and T CD8+ lymphocytes were found in BLV-infected dairy cows with PL. Therefore, the correlation between the absolute numbers of B- and T cell subsets in the peripheral blood applied to each group showed a significant and positive strong correlation between numbers of B cells and T cells or T CD8+ cells in the PL animals, although the same cannot be predicted for T CD4+ lymphocytes. No such correlation was encountered for the AL and negative-control animals.
RESUMO
O objetivo do presente trabalho foi avaliar a frequência e número absoluto de linfócitos B e das subpopulações de linfócitos T em bovinos infectados pelo vírus da leucemia bovina (BLV) com distintos perfis leucocitários conhecidos como não leucêmicos (AL) e com linfocitose persistente (LP). Deste modo, 15 animais foram selecionados e divididos uniformemente em três grupos (negativo, AL e LP). A infecção pelo vírus da BLV foi detectada por imunodifusão em ágar gel e por ensaio imunoenzimático. A quantificação das populações de linfócitos B e T foi determinada por citometria de fluxo utilizando anticorpos monoclonais. Os resultados do presente estudo apontaram para aumento da população de linfócitos B, e também das células CD5+ e CD11b+, que geralmente são alvo da infecção pelo vírus da BLV, nos animais com LP. Consequentemente pode-se observar redução da porcentagem de linfócitos T, T CD4+ no sangue periférico, e de linfócitos T, T CD4+ e T CD8+ nas células mononucleares do sangue periférico isoladas por gradiente de centrifugação. No entanto, nenhuma alteração no número absoluto de linfócitos T, T CD4+ e T CD8+ no sangue periférico foi encontrada nos animais manifestando LP. Entretanto, encontrou-se correlação alta e significativa entre o número absoluto de linfócitos T e T CD8+ e o número absoluto de linfócitos B no sangue periférico nos animais manifestando LP, não encontrand
The aim of the present trial was to determine the frequencies and absolute number of B and T lymphocytes subpopulations in bovine leukemia virus (BLV)-infected dairy cows with distinct lymphocyte profile known as non-leukemic (AL) and persistent lymphocytosis (PL). Thus, 15 animals were selected and divided uniformly in three groups (negative, AL, PL). The BLV infection was detected by agar gel immunodiffusion and enzyme-linked immunosorbent-assay. The lymphocytes subsets were evaluated using monoclonal antibodies by flow cytometry. The results of the present study pointed out to an increase in B lymphocytes, and also an augment in CD5+ and CD11b+ cells in animals showing PL. Consequently, it can be observed a decrease in the percentage of T cells subsets in these animals. Conversely, no significant alterations in the absolute number of the T lymphocytes, T CD4+ cells and T CD8+ lymphocytes were found in BLV-infected dairy cows with PL. Therefore, the correlation between the absolute numbers of B- and T cell subsets in the peripheral blood applied to each group showed a significant and positive strong correlation between numbers of B cells and T cells or T CD8+ cells in the PL animals, although the same cannot be predicted for T CD4+ lymphocytes. No such correlation was encountered for the AL and negative-control animals.
RESUMO
The measurement of pH in milk is one of the most important and frequent procedures performed in biochemistry practices. This variable is applied to the diagnosis of mammary gland disease, assessment of industrial yields, and identification of metabolic diseases. The objective of this study was to evaluate de effect of freezing the milk from healthy and infected mammary glands of Santa Ines ewes on the pH. The bacteriological culture of 183 milk samples was analyzed resulting in 146 negative and 37 positive samples. From these, the hydrogen ion concentration was determined on sampling day and after freezing at -20C for 30 months. A reduction on pH was observed after freezing, and the bacteriological positive samples showed the highest pH values. A higher decrease of the pH after freezing was seen in positive samples. Thus, the kind of conservation of milk samples should be considered, as well as the results of parameters that could be influenced by such variation.KEYWORDS: pH, freezing, milk, ewes.
A mensuração do pH do leite é um dos procedimentos mais importantes e frequentes na prática bioquímica. Essa variável aplica-se ao diagnóstico de doenças da glândula mamária, avaliação de rendimento industrial e identificação de síndromes metabólicas. O presente estudo teve por objetivo avaliar o efeito sobre o pH, do congelamento do leite de ovelhas da raça Santa Inês proveniente de glândulas mamárias consideradas sadias e infectadas. Foram analisadas 183 amostras, sendo estas divididas em negativas (146) e positivas (37), segundo o resultado da cultura bacteriológica. Dessas amostras determinou-se o pH no momento da coleta e após o congelamento a -20 C por trinta meses. Observou-se redução do pH após o congelamento, sendo os valores maiores nas amostras que apresentaram resultado positivo na cultura bacteriológica. Houve maior decréscimo do pH após congelamento nas que apresentaram resultado positivo na cultura bacteriol?gica. O tipo de conservação das amostras lácteas deve ser considerado, bem como a análise de parâmetros que podem ser influenciados por essa variação.PALAVRAS-CHAVES: pH, congelamento, leite, mastite, ovelhas.?
RESUMO
Milk samples from 45 halves were collected from lactating ewes to evaluate the effect of freezing and incubation of the whole milk on the qualitative results of bacteriologic culture. Thus, these milk samples were submitted to the following treatments: standard culture technique (T1), incubation for 18h at 37C (T2) and thawing at -20C for 24h (T3). After these periods, the milk samples from T2 and T3 were submitted to standard culture technique. The T2 showed an increase in the proportion of coagulase-negative staphylococci (CNS) recovery compared to T1, although the same cannot be predicted by T3. Conversely, the T2 allows the growth of some bacteria present in clinically healthy teats ducts as Bacillus spp.. The results of the present study indicated that the incubation of the whole milk can be applied to detection of CNS in ewes milk in attempt to reduce the false-negative culture milk samples that can lead to a more efficient use of laboratory resources and reduce costs to herd owners.
O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do congelamento e da incubação do leite de ovelhas da raça Santa Inês sobre os resultados da cultura bacteriológica. Desta forma, 45 amostras de leite ovino foram coletadas, e submetidas aos seguintes tratamentos: cultura bacteriológica (T1), e simultaneamente incubadas a 37C por 18 horas (T2) e congeladas a -20C por 24 horas (T3). Após esses períodos, as amostras dos T2 e T3 foram submetidas à cultura bacteriológica. O T2 possibilitou aumento no isolamento de estafilococos coagulase-negativo (ECN) comparadas ao T1, não ocorrendo o mesmo com o T3. No entanto, o T2 permitiu o desenvolvimento de bactérias normalmente presentes na microbiota dos ductos dos tetos em ovelhas sadias, como o Bacillus spp.. Os resultados do presente estudo indicam que a incubação pode ser aplicada para a detecção de ECN na tentativa de reduzir resultados falso-negativos na cultura bacteriológica do leite de ovelhas da raça Santa Inês, determinando o uso mais eficiente dos recursos laboratoriais e a redução dos custos para os proprietários.
RESUMO
The measurement of pH in milk is one of the most important and frequent procedures performed in biochemistry practices. This variable is applied to the diagnosis of mammary gland disease, assessment of industrial yields, and identification of metabolic diseases. The objective of this study was to evaluate de effect of freezing the milk from healthy and infected mammary glands of Santa Ines ewes on the pH. The bacteriological culture of 183 milk samples was analyzed resulting in 146 negative and 37 positive samples. From these, the hydrogen ion concentration was determined on sampling day and after freezing at -20C for 30 months. A reduction on pH was observed after freezing, and the bacteriological positive samples showed the highest pH values. A higher decrease of the pH after freezing was seen in positive samples. Thus, the kind of conservation of milk samples should be considered, as well as the results of parameters that could be influenced by such variation.KEYWORDS: pH, freezing, milk, ewes.
A mensuração do pH do leite é um dos procedimentos mais importantes e frequentes na prática bioquímica. Essa variável aplica-se ao diagnóstico de doenças da glândula mamária, avaliação de rendimento industrial e identificação de síndromes metabólicas. O presente estudo teve por objetivo avaliar o efeito sobre o pH, do congelamento do leite de ovelhas da raça Santa Inês proveniente de glândulas mamárias consideradas sadias e infectadas. Foram analisadas 183 amostras, sendo estas divididas em negativas (146) e positivas (37), segundo o resultado da cultura bacteriológica. Dessas amostras determinou-se o pH no momento da coleta e após o congelamento a -20 C por trinta meses. Observou-se redução do pH após o congelamento, sendo os valores maiores nas amostras que apresentaram resultado positivo na cultura bacteriológica. Houve maior decréscimo do pH após congelamento nas que apresentaram resultado positivo na cultura bacteriol?gica. O tipo de conservação das amostras lácteas deve ser considerado, bem como a análise de parâmetros que podem ser influenciados por essa variação.PALAVRAS-CHAVES: pH, congelamento, leite, mastite, ovelhas.?
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Milk samples from 45 halves were collected from lactating ewes to evaluate the effect of freezing and incubation of the whole milk on the qualitative results of bacteriologic culture. Thus, these milk samples were submitted to the following treatments: standard culture technique (T1), incubation for 18h at 37C (T2) and thawing at -20C for 24h (T3). After these periods, the milk samples from T2 and T3 were submitted to standard culture technique. The T2 showed an increase in the proportion of coagulase-negative staphylococci (CNS) recovery compared to T1, although the same cannot be predicted by T3. Conversely, the T2 allows the growth of some bacteria present in clinically healthy teats ducts as Bacillus spp.. The results of the present study indicated that the incubation of the whole milk can be applied to detection of CNS in ewes milk in attempt to reduce the false-negative culture milk samples that can lead to a more efficient use of laboratory resources and reduce costs to herd owners.
O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do congelamento e da incubação do leite de ovelhas da raça Santa Inês sobre os resultados da cultura bacteriológica. Desta forma, 45 amostras de leite ovino foram coletadas, e submetidas aos seguintes tratamentos: cultura bacteriológica (T1), e simultaneamente incubadas a 37C por 18 horas (T2) e congeladas a -20C por 24 horas (T3). Após esses períodos, as amostras dos T2 e T3 foram submetidas à cultura bacteriológica. O T2 possibilitou aumento no isolamento de estafilococos coagulase-negativo (ECN) comparadas ao T1, não ocorrendo o mesmo com o T3. No entanto, o T2 permitiu o desenvolvimento de bactérias normalmente presentes na microbiota dos ductos dos tetos em ovelhas sadias, como o Bacillus spp.. Os resultados do presente estudo indicam que a incubação pode ser aplicada para a detecção de ECN na tentativa de reduzir resultados falso-negativos na cultura bacteriológica do leite de ovelhas da raça Santa Inês, determinando o uso mais eficiente dos recursos laboratoriais e a redução dos custos para os proprietários.
RESUMO
The dry period is considered to be a phase when cows are very vulnerable to mastitis and phagocytosis mechanisms are specially important at this moment. The objective of the present trial was to evaluate the influence of dry cow therapy drugs available in the market on the phagocytic function of leukocytes obtained from cow milk. In order to do that, paired milk samples negative in bacteriological examination were submitted to in vitro phagocytosis test, after they were exposed to solutions of the following drugs: anhydrous cephalonium (M1), Gentamicin (M2), Benzylpenicillin procaine associated with Nafcillin and Dihydrostreptomycin (M3) and Cloxacillin benzathine (M4). Mean phagocytosis rates of control samples and of cells submitted to treatments M1 and M3 were, respectively, (58.88% ± 12.04), (64.87% ± 15.36) and (65.14% ± 17.96) there were no differences among these samples, as well as in the comparison with the control group. Mean phagocytosis rate obtained in cells submitted to treatment M4 (46.90% ± 22.08) was lower than that of the control group, and than that of cells submitted to treatments M1 and M3. On the other hand, mean phagocytosis rate of cells submitted to treatment M2 (0.68% ± 1.63) was lower than that observed in the control group, and than that of all other treatments. These results show that the use of drugs available for dry cow therapy may no be totally
O período seco é considerado uma fase da lactação muito vulnerável à mastite, e os mecanismos de fagocitose são especialmente importantes nessa etapa. Para avaliar a influência de medicamentos indicados para o tratamento de mastite no período seco sobre a função fagocítica de leucócitos obtidos do leite de vacas, foram utilizadas amostras pareadas de leite de vacas, negativas ao exame bacteriológico. Submeteram-se essas células à prova de fagocitose in vitro, após serem expostas à solução contendo os seguintes medicamentos: cefalônio anidro (M1), gentamicina (M2), benzilpenicilina procaína em associação com naficilina e dihidroestreptomicina (M3) e cloxacilina benzatina (M4). A média dos índices de fagocitose das amostras-controle e das células submetidas aos tratamentos M1 e M3 foram, respectivamente, (58,88% ± 12,04), (64,87% ± 15,36) e (65,14% ± 17,96) e não apresentaram diferenças entre si, bem como em relação ao controle. A média dos índices de fagocitose das células submetidas ao tratamento M4 (46,90% ± 22,08) mostrou-se menor que o controle, assim como menor do que aquela obtida das células submetidas aos tratamentos M1 e M3. Por sua vez, a média dos índices de fagocitose das células submetidas ao tratamento M2 (0,68% ± 1,63) foi expressivamente inferior àquelas encontradas no controle e nos demais tratamentos. Tais resultados sugerem a utilização de certos medicamentos
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The dry period is considered to be a phase when cows are very vulnerable to mastitis and phagocytosis mechanisms are specially important at this moment. The objective of the present trial was to evaluate the influence of dry cow therapy drugs available in the market on the phagocytic function of leukocytes obtained from cow milk. In order to do that, paired milk samples negative in bacteriological examination were submitted to in vitro phagocytosis test, after they were exposed to solutions of the following drugs: anhydrous cephalonium (M1), Gentamicin (M2), Benzylpenicillin procaine associated with Nafcillin and Dihydrostreptomycin (M3) and Cloxacillin benzathine (M4). Mean phagocytosis rates of control samples and of cells submitted to treatments M1 and M3 were, respectively, (58.88% ± 12.04), (64.87% ± 15.36) and (65.14% ± 17.96) there were no differences among these samples, as well as in the comparison with the control group. Mean phagocytosis rate obtained in cells submitted to treatment M4 (46.90% ± 22.08) was lower than that of the control group, and than that of cells submitted to treatments M1 and M3. On the other hand, mean phagocytosis rate of cells submitted to treatment M2 (0.68% ± 1.63) was lower than that observed in the control group, and than that of all other treatments. These results show that the use of drugs available for dry cow therapy may no be totally
O período seco é considerado uma fase da lactação muito vulnerável à mastite, e os mecanismos de fagocitose são especialmente importantes nessa etapa. Para avaliar a influência de medicamentos indicados para o tratamento de mastite no período seco sobre a função fagocítica de leucócitos obtidos do leite de vacas, foram utilizadas amostras pareadas de leite de vacas, negativas ao exame bacteriológico. Submeteram-se essas células à prova de fagocitose in vitro, após serem expostas à solução contendo os seguintes medicamentos: cefalônio anidro (M1), gentamicina (M2), benzilpenicilina procaína em associação com naficilina e dihidroestreptomicina (M3) e cloxacilina benzatina (M4). A média dos índices de fagocitose das amostras-controle e das células submetidas aos tratamentos M1 e M3 foram, respectivamente, (58,88% ± 12,04), (64,87% ± 15,36) e (65,14% ± 17,96) e não apresentaram diferenças entre si, bem como em relação ao controle. A média dos índices de fagocitose das células submetidas ao tratamento M4 (46,90% ± 22,08) mostrou-se menor que o controle, assim como menor do que aquela obtida das células submetidas aos tratamentos M1 e M3. Por sua vez, a média dos índices de fagocitose das células submetidas ao tratamento M2 (0,68% ± 1,63) foi expressivamente inferior àquelas encontradas no controle e nos demais tratamentos. Tais resultados sugerem a utilização de certos medicamentos