RESUMO
The genetic diversity of C. albicans oral isolates from 75 healthy schoolchildren from eight schools located in different geographic areas of Piracicaba city, São Paulo state, Brazil, was established using isoenzymes marker (Multilocus Enzyme Electrophoresis - MLEE) and cluster analysis. Patterns of monoclonal and polyclonal oral colonization by C. albicans within and between groups of schoolchildren were identified. However, significant divergence between the observed and the expected genotypic frequencies (Hardy-Weinberg equilibrium test) was not detected in the geographically adjacent groups, suggesting the hypothesis that populations of healthy schoolchildren do not correspond to the selection factor (differential survival) of strains. Two highly polymorphic and distantly genetically related taxa (A and B) were identified within the total population of yeasts, each contained subgroups (A1, A2, A3, A4, B1 and B2) and clusters of moderately related strains (from I to X), suggesting the existence of strains restricted or not to certain groups of geographically limited, healthy students. However, the coexistence of identical strains in healthy schoolchildren from the same school (geographically related) reinforces the hypothesis of oral transmission, where the sources of propagation could be explored. Furthermore, this could also be used in current and retrospective analyses of C. albicans isolated from immunocompetent and immunocompromised people, in order to detect commensal or potentially pathogenic yeast groups, predominantly in candidiasis, and in the development of strategies to prevent transmission or human propagation.
RESUMO
Candida-associated denture stomatitis is the most common form of oral candidal infection, with Candida albicans being the principal etiological agent. Candida adheres directly or via an intermediary layer of plaque-forming bacteria to denture acrylic. Despite antifungal therapy to treat denture stomatitis, infection is reestablished soon after the treatment ceases. In addition, many predisposing factors have been identified as important in the development of oral candidiasis, including malnourishment, common endocrine disorders, such as diabetis mellitus, antibacterial drug therapy, corticosteroids, radiotherapy and other immunocompromised conditions, such as acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). These often results in increased tolerance to the most commonly used antifungals. So this review suggests new therapies to oral candidiasis.
RESUMO
Candida albicans oral strains collected from caries-free and caries-active healthy children ranging from 24 to 36 months old, were studied. The aim of the study was to determine proteinase and phospholipase activities produced by Candida albicans in the two groups and to determine the phenotypic diversity of these enzymes based on genetic polymorphism using the AP-PCR method. Strains identified by morphological and fermentation tests as C. albicans were grown in proteinase and phospholipase agar media at 37ºC for 7 and 4 days, respectively. After the incubation period, the enzyme activity of the proteinase and phospholipase positive strains was measured. All strains were subjected to AP-PCR, using the arbitrary primer AP-3. The enzymatic analysis showed no differences between the two groups. The AP-PCR method was effective in demonstrating intra-individual genetic polymorphism in C. albicans, showing a greater clonal diversity in caries-active versus caries-free children. Dendograms of similarity showed only intra-individual clonal lineage. The results suggest that the enzymatic profile does not depend on the genotypic characteristics of the strains.
Cepas orais de Candida albicans coletadas de crianças saudáveis cárie ativas e livres de cárie com idade variando de 24 a 36 meses, foram estudadas. O propósito do estudo foi determinar a atividade da proteinase e da fosfolipase produzida por Candida albicans nos dois grupos e comparar com a diversidade genotípica usando o método AP-PCR. As cepas identificadas como C. albicans por testes morfológicos e de fermentação, foram cultivadas em meio ágar proteinase e fosfolipase a 37ºC por 7 e 4 dias, respectivamente. Após o período de incubação, a atividade enzimática das cepas proteinase e fosfolipase positiva foram medidas. Todas as cepas foram submetidas a técnica genotípica AP-PCR, usando o primer arbitrário AP-3. A análise enzimática demonstrou que não há diferença entre os dois grupos estudados. O método AP-PCR foi eficiente em demonstrar o polimorfismo genético de C. albicans intra indivíduos demonstrando uma maior diversidade clonal em crianças cárie ativas em relação as livres de cárie. Dendogramas de similaridade demonstraram semelhança na linhagem clonal apenas intra-indivíduos. Os resultados sugerem que o perfil enzimático não depende das características genotípicas das cepas.
RESUMO
The in vitro study of the interactions between S. mutans and S. sobrinus is important to determine the role of these microorganisms in the formation of biofilms on dental structures and their potential to induce carious lesions. The objective of this research was to study the suppression of bacterial plaque formation and its recolonization by rifampycin-resistant S.mutans and streptomycin-resistant S. sobrinus. To study the competitive relationship between these species, previously standardized strains were incubated in media containing different fermentable carbohydrates. At determined time intervals, samples were collected from mixed cultures of S. mutans and S. sobrinus, diluted and plated on BHI-agar containing rifampycin or streptomycin to determine the number of viable cells of each species by counting colony-forming units. In order to study the bacterial colonization process and in vitro recolonization of bacterial plaque, three experiments were performed: I - co-cultivation of S. mutans and S. sobrinus; II - inoculation of bacterial plaque pre formed by S. sobrinus with S. mutans; and III - bacterial plaque pre formed by S. mutans dispersed and plated on BHI- agar containing streptomycin or rifampicin to determine the number of viable cells for each species. The results indicated a predominance of S. mutans in relation to S. sobrinus, demonstrating the capacity of S. mutans to inhibit plaque formation by S. sobrinus and recolonize the surfaces.
O estudo in vitro das interações entre S. mutans e S. sobrinus pode ser importante na determinação do papel desses microrganismos na formação de biofilmes nas estruturas dentais e seu potencial em induzir lesões cariosas. O objetivo da presente pesquisa foi estudar a supressão da formação da placa dental e sua recolonização por S. mutans rifampicina-resistentes e S. sobrinus estreptomicina-resistentes in vitro. Para avaliar as relações de competitividade entre essas espécies, cepas que foram previamente padronizadas foram incubadas em meio de cultura contendo diferentes carboidratos fermentáveis. Em intervalos de tempo determinados, amostras de S. mutans e S. sobrinus foram coletadas a partir de culturas mistas, diluídas e semeadas em placas com meio BHI-ágar contendo rifampicina ou estreptomicina para determinação do número de células viáveis de cada espécie por contagem de unidades formadoras de colônia. Para a avaliação da colonização bacteriana e recolonização da placa bacteriana in vitro, três experimentos foram realizados: I - co-cultivo de S. mutans e S. sobrinus; II - inoculação de S. mutans em placa bacteriana pré-formada por S. sobrinus; e III - placa bacteriana pré-formada por S. mutans dispersada e plaqueada em meio BHI-ágar contendo estreptomicina ou rifampicina para determinação do número de células viáveis para cada espécie. Os resultados indicaram uma predominância de S. mutans em relação ao S. sobrinus, demonstrando a capacidade do S. mutans em inibir a formação de placa por S. sobrinus e recolonizar a superfície dentária.
RESUMO
Twenty-one Streptococcus mutans strains were clustered by Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE). Six isoenzymes showed strong infra-specific discriminatory power (M1P, MPI, PLP, NSP, GOT, and LAP). MLEE is a robust technique that may be used to explore clonal diversity of S. mutans isolates in epidemiological surveys.
Vinte e uma cepas de Streptococcus mutans foram agrupadas pela eletroforese de enzimas codificadas por multilocus (MLEE). Seis isoenzimas apresentaram forte poder discriminatório (M1P, MPI, PLP, NSP, GOT e LAP). A MLEE é uma técnica robusta que pode ser empregada no estudo da diversidade clonal de cepas de S. mutans, em estudos epidemiológicos.
RESUMO
The aim of the present research was to evaluate the protein polymorphism degrees among forty-eight C. albicans isolates from fourteen anatomical sites of clinical patients by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and numerical analyzes, in order to identify subspecies and their similarities in some infectious niches. Cell cultures were grown in YEPD medium, collected by centrifugation, and washed in cold saline solution. The whole-cell proteins were extracted by cell disruption using glass beads and submitted to SDS-PAGE technique. After electrophoresis, the protein bands were stained with coomassie-blue and analyzed by statistics package NTSYS-pc version 1.70 software. Similarity matrixes and dendrograms were generated by application of similarity coefficient of simple matching and UPGMA algorithm, respectively. The results obtained showed several C. albicans subtypes and their similarity degrees (80% to 100%). Such data showed that same patients may be infected by two or more C. albicans subtypes in certain anatomical sites (i.e. only in oral cavity of immunocompromised patients, blood, or tracheal secretion), or yet, two or more patients can be infected in identical anatomical sites (i.e. bronchial washing, urine, oral cavity, tracheal secretion, vaginal secretion, and healthy saliva) with a same C. albicans subtype. However, two or more patients also can show infections in corresponding sites (i.e. oral cavity of immunocompromised patients, blood, oropharyngeal secretion, oral cavity, tracheal secretion, vaginal secretion, and healthy saliva) by different C. albicans subtypes. Besides, two or more patients also can be infected with identical or different C. albicans subtypes in different anatomical sites (i.e.1. identical subtypes in vaginal secretion, tracheal secretion, and urine; abdominal secretion and spittle; drainage and oral cavity; catheter and healthy saliva - i.e.2. subtypes different in bronchial washing, oropharyngeal secretion, pulmonary secretion, oral cavity of immunocompromised patients, and blood). Complementary studies involving C. albicans sample isolated from several anatomical sites of immunocompetent or immunocompromised patients (before, during and after specifics therapies) and their families or hospital workers must be done in order to establish the sources of C. albicans colonization. The whole-cell proteins profile performed by SDS-PAGE associated with computer-assisted numerical analysis may provide preliminary criteria for taxonomic and epidemiological studies of such microorganisms.
O objetivo da presente pesquisa foi analisar os graus de polimorfismos protéicos entre isolados de C. albicans provenientes de diversos sítios anatômicos de quarenta e dois pacientes clínicos, através do emprego da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e análise numérica, a fim de se identificar subespécies e suas similaridades nos diversos nichos infecciosos. Culturas celulares foram desenvolvidas em meio YEPD, coletadas por centrifugação e lavadas com solução salina gelada. As proteínas celulares totais, foram extraídas por rompimento celular, usando pérolas de vidro e submetidas à técnica de SDS-PAGE. Após a eletroforese, as bandas de proteínas foram coradas com coomassie-blue e analisadas pelo conjunto de programas estatístico NTSYS-pc versão 1,70. Matrizes de similaridade e dendrogramas foram gerados pela aplicação do coeficiente de similaridade simple-matching e do algoritmo UPGMA, respectivamente. Os resultados obtidos revelaram vários subtipos de C. albicans e seus graus de similaridade (80% a 100%). Tais dados permitiram demonstrar que, certos pacientes podem estar infectados com dois ou mais subtipos de C. albicans em determinados sítios anatômicos (i.e. apenas na cavidade oral de pacientes imunocomprometidos, sangue ou secreção traqueal), ou ainda, dois ou mais pacientes podem estar infectados em sítios anatômicos idênticos (i.e. apenas em lavagem brônquica, urina, cavidade oral, secreção traqueal, secreção vaginal ou saliva saudável) com um mesmo subtipo de C. albicans. No entanto, dois ou mais pacientes também podem apresentar infecções em sítios correspondentes (i.e. apenas na cavidade oral de pacientes imunocomprometidos, sangue, secreção orofaríngea, cavidade oral, secreção traqueal, secreção vaginal e saliva saudável) por diferentes subtipos de C. albicans. Além disso, dois ou mais pacientes também podem estar infectados com subtipos idênticos ou não de C. albicans em diferentes sítios anatômicos (i.e.1. idênticos subtipos na secreção vaginal, secreção traqueal e urina; secreção abdominal e escarro; drenagem e cavidade oral; cateter e saliva saudável - i.e.2. diferentes subtipos em lavagem brônquica, secreção orofaríngea, secreção pulmonar, cavidade oral de pacientes imunocomprometidos e sangue). Dados complementares envolvendo amostras de C. albicans isoladas de vários sítios anatômicos de pacientes imunocompetentes ou imunocomprometidos (antes, durante e após terapias específicas) e seus familiares ou trabalhadores hospitalares, deverão ser obtidos a fim de se estabelecer as possíveis fontes de colonização por esses microrganismos. De modo geral, os perfis de proteínas totais obtidos por SDS-PAGE associados com análise numérica computadorizada, permitem a obtenção de critérios adicionais para os estudos epidemiológicos e taxonômicos de C. albicans.
RESUMO
The aim of the present research was to evaluate the protein polymorphism degrees among forty-eight C. albicans isolates from fourteen anatomical sites of clinical patients by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and numerical analyzes, in order to identify subspecies and their similarities in some infectious niches. Cell cultures were grown in YEPD medium, collected by centrifugation, and washed in cold saline solution. The whole-cell proteins were extracted by cell disruption using glass beads and submitted to SDS-PAGE technique. After electrophoresis, the protein bands were stained with coomassie-blue and analyzed by statistics package NTSYS-pc version 1.70 software. Similarity matrixes and dendrograms were generated by application of similarity coefficient of simple matching and UPGMA algorithm, respectively. The results obtained showed several C. albicans subtypes and their similarity degrees (80% to 100%). Such data showed that same patients may be infected by two or more C. albicans subtypes in certain anatomical sites (i.e. only in oral cavity of immunocompromised patients, blood, or tracheal secretion), or yet, two or more patients can be infected in identical anatomical sites (i.e. bronchial washing, urine, oral cavity, tracheal secretion, vaginal secretion, and healthy saliva) with a same C. albicans subtype. However, two or more patients also can show infections in corresponding sites (i.e. oral cavity of immunocompromised patients, blood, oropharyngeal secretion, oral cavity, tracheal secretion, vaginal secretion, and healthy saliva) by different C. albicans subtypes. Besides, two or more patients also can be infected with identical or different C. albicans subtypes in different anatomical sites (i.e.1. identical subtypes in vaginal secretion, tracheal secretion, and urine; abdominal secretion and spittle; drainage and oral cavity; catheter and healthy saliva - i.e.2. subtypes different in bronchial washing, oropharyngeal secretion, pulmonary secretion, oral cavity of immunocompromised patients, and blood). Complementary studies involving C. albicans sample isolated from several anatomical sites of immunocompetent or immunocompromised patients (before, during and after specifics therapies) and their families or hospital workers must be done in order to establish the sources of C. albicans colonization. The whole-cell proteins profile performed by SDS-PAGE associated with computer-assisted numerical analysis may provide preliminary criteria for taxonomic and epidemiological studies of such microorganisms.
O objetivo da presente pesquisa foi analisar os graus de polimorfismos protéicos entre isolados de C. albicans provenientes de diversos sítios anatômicos de quarenta e dois pacientes clínicos, através do emprego da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e análise numérica, a fim de se identificar subespécies e suas similaridades nos diversos nichos infecciosos. Culturas celulares foram desenvolvidas em meio YEPD, coletadas por centrifugação e lavadas com solução salina gelada. As proteínas celulares totais, foram extraídas por rompimento celular, usando pérolas de vidro e submetidas à técnica de SDS-PAGE. Após a eletroforese, as bandas de proteínas foram coradas com coomassie-blue e analisadas pelo conjunto de programas estatístico NTSYS-pc versão 1,70. Matrizes de similaridade e dendrogramas foram gerados pela aplicação do coeficiente de similaridade simple-matching e do algoritmo UPGMA, respectivamente. Os resultados obtidos revelaram vários subtipos de C. albicans e seus graus de similaridade (80% a 100%). Tais dados permitiram demonstrar que, certos pacientes podem estar infectados com dois ou mais subtipos de C. albicans em determinados sítios anatômicos (i.e. apenas na cavidade oral de pacientes imunocomprometidos, sangue ou secreção traqueal), ou ainda, dois ou mais pacientes podem estar infectados em sítios anatômicos idênticos (i.e. apenas em lavagem brônquica, urina, cavidade oral, secreção traqueal, secreção vaginal ou saliva saudável) com um mesmo subtipo de C. albicans. No entanto, dois ou mais pacientes também podem apresentar infecções em sítios correspondentes (i.e. apenas na cavidade oral de pacientes imunocomprometidos, sangue, secreção orofaríngea, cavidade oral, secreção traqueal, secreção vaginal e saliva saudável) por diferentes subtipos de C. albicans. Além disso, dois ou mais pacientes também podem estar infectados com subtipos idênticos ou não de C. albicans em diferentes sítios anatômicos (i.e.1. idênticos subtipos na secreção vaginal, secreção traqueal e urina; secreção abdominal e escarro; drenagem e cavidade oral; cateter e saliva saudável - i.e.2. diferentes subtipos em lavagem brônquica, secreção orofaríngea, secreção pulmonar, cavidade oral de pacientes imunocomprometidos e sangue). Dados complementares envolvendo amostras de C. albicans isoladas de vários sítios anatômicos de pacientes imunocompetentes ou imunocomprometidos (antes, durante e após terapias específicas) e seus familiares ou trabalhadores hospitalares, deverão ser obtidos a fim de se estabelecer as possíveis fontes de colonização por esses microrganismos. De modo geral, os perfis de proteínas totais obtidos por SDS-PAGE associados com análise numérica computadorizada, permitem a obtenção de critérios adicionais para os estudos epidemiológicos e taxonômicos de C. albicans.
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The aim of this study was to determine whether random amplified polymorphic DNA (AP-PCR) analysis is able to differentiate genetically different clones of mutans streptococci, in 22 Brazilian family members. Stimulated saliva samples were collected from fathers, mothers and infants. For 5-18 months babies with erupting primary dentition, plaque samples were collected using sterile tooth pick tips. From these samples, mutans streptococci were isolated on SB-20 agar plates. After growth, representative colonies were identified by biochemical methods on the basis of carbohydrate fermentation. Streptococcus mutans isolates were obtained from all family members and AP-PCR typed separately with a random primer (OPA-13). Bacterial cell lysates were used as template in PCR reactions and the amplified DNA fragments obtained were compared by agarose gel electrophoresis. Results demonstrated that the father shared the baby's genotype in three families and the mother shared the baby's genotype in 12 families seven babies harbored Streptococcus mutans strains similar to those of their siblings. The technique was able to demonstrate the genetic Streptococcus mutans in Brazilian family members.
O objetivo deste estudo foi determinar, através da técnica de reação em cadeia da polimerase com primers arbitrários (AP-PCR) a capacidade de diferenciar clones geneticamente distintos de Streptococcus mutans e estabelecer o grau de similaridade intrafamilial para os isolados. Para o presente estudo, foram selecionadas 22 famílias brasileiras. Amostras de saliva foram coletadas de todos os membros das famílias. Das crianças com idade entre 5-18 meses obteve-se amostras de placa dental. Após o isolamento das colônias com características morfológicas, realizou-se a identificação bioquímica com base na fermentação de carboidratos. O polimorfismo genético de Streptococcus mutans foi pesquisado através da técnica de AP-PCR utilizando-se o primer OPA-13. Os fragmentos de DNA obtidos foram amplificados e comparados através de eletroforese em gel de agarose. Dentre as espécies identificadas nas 22 famílias analisadas, o pai apresentou cepas com similaridade genética aos dos bebês em três das famílias analisadas; em 12 famílias a mãe apresentou cepas com similaridade com as cepas de Streptococcus mutans do bebê e 7 bebês apresentaram cepas de S. mutans com similaridade genética das cepas do irmão mais velho. A técnica de AP-PCR foi eficaz em demonstrar a heterogeneidade genética de Streptococcus mutans entre os membros das famílias brasileiras analisadas.
RESUMO
O uso de substâncias que neutralizam a ação de agentes químicos antimicrobianos tem sido recomendado para avaliar o potencial de ação de desinfetantes. Para desinfetantes fenólicos e de amônio quaternário, recomenda-se o emprego de meios de cultura (Letheen ágar ou caldo Letheen) - contendo lecitina e tween80 como neutralizantes. A ação neutralizadora do caldo Letheen, preparado com lecitina de soja não purificada, sobre a atividade antimicrobiana de desinfetantes, foi testada em várias diluições de um desinfetante à base de amônio quartenário e dois desinfetantes fenólicos. Os resultados confirmam a açãn neutralizadora do caldo Letheen sobre os desinfetantes testados, mesmo quando preparado com lecitina de soja não purificada, sugerindo o uso desta substância como alternativa para os problemas encontrados na obtenção e ou preparação deste meio.
RESUMO
O uso de substâncias que neutralizam a ação de agentes químicos antimicrobianos tem sido recomendado para avaliar o potencial de ação de desinfetantes. Para desinfetantes fenólicos e de amônio quaternário, recomenda-se o emprego de meios de cultura (Letheen ágar ou caldo Letheen) - contendo lecitina e tween80 como neutralizantes. A ação neutralizadora do caldo Letheen, preparado com lecitina de soja não purificada, sobre a atividade antimicrobiana de desinfetantes, foi testada em várias diluições de um desinfetante à base de amônio quartenário e dois desinfetantes fenólicos. Os resultados confirmam a açãn neutralizadora do caldo Letheen sobre os desinfetantes testados, mesmo quando preparado com lecitina de soja não purificada, sugerindo o uso desta substância como alternativa para os problemas encontrados na obtenção e ou preparação deste meio.
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