RESUMO
O sucesso das biotecnologias reprodutivas assistidas, especialmente a clonagem por transferência nuclear de células somáticas, envolve múltiplos fatores e cada um destes pode influenciar a eficiência final. Em geral, os protocolos de isolamento, caracterização e criopreservação de células das espécies a serem clonadas constituem a etapa inicial para a obtenção de descendência clone viável, além de contribuir para outros estudos relacionados à biotecnologia celular. Neste contexto, o sucesso desta etapa pode ser alcançado pela associação da escolha do tipo celular, estabelecimento de altas taxas de viabilidade, atividade proliferativa e metabólica após o cultivo in vitro e criopreservação, além da sincronia do ciclo celular antes da reconstrução do embrião clone. Os fibroblastos e outras células derivadas da pele oriundas da região auricular de fetos ou animais adultos representam a fonte de fácil manipulação e mais adequada para a obtenção de carioplastos. Adicionalmente, avanços nesta área têm mostrado a possibilidade da produção de células pluripotentes a partir de células somáticas modificadas. Assim, o objetivo deste manuscrito é realizar uma revisão sobre os aspectos práticos da obtenção e estabelecimento de células doadoras de núcleo derivadas da pele para a reconstrução embrionária, descrevendo os fatores relacionados em cada procedimento que interferem no resultado final.
The success of assisted reproductive biotechnology, especially cloning by somatic cell nuclear transfer, involves multiple factors and each of these may influence the final efficiency. Ingeneral, the protocols for the isolation, characterization and cryopreservation of cells of the species to be cloned consist in initial step for obtaining viable clone offspring, and contribute to other studies on cell biotechnology. In this context, the success of this step may be achieved by association of the choice of cell type, establishment of high rates of viability, metabolic and proliferative activities after in vitroculture and cryopreservation, and cell cycle synchronization prior to embryo reconstruction. Fibroblasts and other skin derived-cells from ear region of fetal or adult animals represent a source of easy handling and better appropriate for obtaining caryoplasts. Additionally, advances in this area are showing the possibility of induced pluripotent cells from modified somatic cells. Thus, the aim of this manuscript is to describe the practical aspects of obtaining and establishing skin-derived donor cells for embryo reconstruction, with emphasis to the factors listed in each procedure that affect the final outcome.
Assuntos
Biotecnologia , Criopreservação , Técnicas de Transferência Nuclear , FibroblastosRESUMO
O sucesso das biotecnologias reprodutivas assistidas, especialmente a clonagem por transferência nuclear de células somáticas, envolve múltiplos fatores e cada um destes pode influenciar a eficiência final. Em geral, os protocolos de isolamento, caracterização e criopreservação de células das espécies a serem clonadas constituem a etapa inicial para a obtenção de descendência clone viável, além de contribuir para outros estudos relacionados à biotecnologia celular. Neste contexto, o sucesso desta etapa pode ser alcançado pela associação da escolha do tipo celular, estabelecimento de altas taxas de viabilidade, atividade proliferativa e metabólica após o cultivo in vitro e criopreservação, além da sincronia do ciclo celular antes da reconstrução do embrião clone. Os fibroblastos e outras células derivadas da pele oriundas da região auricular de fetos ou animais adultos representam a fonte de fácil manipulação e mais adequada para a obtenção de carioplastos. Adicionalmente, avanços nesta área têm mostrado a possibilidade da produção de células pluripotentes a partir de células somáticas modificadas. Assim, o objetivo deste manuscrito é realizar uma revisão sobre os aspectos práticos da obtenção e estabelecimento de células doadoras de núcleo derivadas da pele para a reconstrução embrionária, descrevendo os fatores relacionados em cada procedimento que interferem no resultado final.(AU)
The success of assisted reproductive biotechnology, especially cloning by somatic cell nuclear transfer, involves multiple factors and each of these may influence the final efficiency. In general, the protocols for the isolation, characterization and cryopreservation of cells of the species to be cloned consist in initial step for obtaining viable clone offspring, and contribute to other studies on cell biotechnology. In this context, the success of this step may be achieved by association of the choice of cell type, establishment of high rates of viability, metabolic and proliferative activities after in vitro culture and cryopreservation, and cell cycle synchronization prior to embryo reconstruction. Fibroblasts and other skin derived-cells from ear region of fetal or adult animals represent a source of easy handling and better appropriate for obtaining caryoplasts. Additionally, advances in this area are showing the possibility of induced pluripotent cells from modified somatic cells. Thus, the aim of this manuscript is to describe the practical aspects of obtaining and establishing skin-derived donor cells for embryo reconstruction, with emphasis to the factors listed in each procedure that affect the final outcome.(AU)