RESUMO

Anaplasma marginale (A. marginale) is a worldwide pathogen that infects a variety of ruminants, but mostly cattle. The present study aimed to describe an isolation technique for A. marginale, using chicken embryo Þ broblast (CEF) cell culture. Blood and tick samples were collected from 5 calves from 2 to 3 months old, which were considered to be infected with A.marginale due to anemia, jaundiced mucous membranes, and prostration. DNA extraction and PCR were performed for diagnosis using blood and tick samples. All tick and blood samples tested positive in PCR. Additionally, ticks were crushed with the aid of a blender for inoculation in CEF cell culture. After inoculation, the cultures were kept at 37ºC and 5% CO2 for 15 days. The cell supernatant of cell cultures was again analyzed using PCR and Wright stain method to conÞ rm A. marginale isolation. Cell cultures tested positive in PCR, and the presence of the agent was demonstrated by Wright stain. Therefore, by using CEF cell culture it was possible to isolate and amplify the A. marginale in a concentration of 1.3 x 107.2 bodies per mL. The CEF cells are undemanding and easy to preserve; they are an option for isolation and production of A. marginale under laboratory conditions.(AU)

Anaplasma marginale (A. marginale) é um patógeno mundial que infecta uma variedade de ruminantes, mas principalmente bovinos. O presente estudo teve como objetivo descrever uma técnica de isolamento para A. marginale, utilizando cultivo celular de Þ broblastos de embriões (CFE) de galinhas. Para isso, foram coletadas amostras de sangue e de carrapatos de 5 bezerros, entre 2 e 3 meses de idade, os quais, devido a anemia, icterícia de mucosas e prostração, foram considerados supostamente infectados com A. marginale. Ethics Approval This study was approved by Credenciamento Institucional para Atividades com Animais em Ensino ou Pesquisa (CIAEP: 02.0420.2021). Consent to participate Not applicable Consent to publish Not applicable Data availability Not applicable Para o diagnóstico, realizaram-se extração de DNA e posterior PCR a partir das amostras de sangue e de carrapatos coletados. Todos os carrapatos e amostras de sangue foram positivas para o teste de PCR. Além disso, os carrapatos foram triturados com o auxílio de um liquidiÞ cador para inoculação em CFE. Após a inoculação, as culturas foram mantidas a 37ºC e a 5% de CO2 durante 15 dias. O sobrenadante celular das culturas foi novamente analisado por PCR e pela técnica de coloração de Wright para conÞ rmar o isolamento de Anaplasma marginale. As culturas celulares foram po sitivas por PCR, e a presença do agente foi comprovada por meio da coloração de Wright. Portanto, utilizando CFE, foi possível isolar e ampliÞ car o A. marginale em uma concentração de 1,3x107,2 bactérias por ml. As células da CEF são pouco exigentes, de fácil manutenção e uma boa opção para isolamento e produção de A. marginale em condição laboratorial.(AU)

Assuntos

RESUMO

Senecavirus A (SVA) has been a problem in Brazil since the end of 2014. The infections caused by SVA have disrupted the productive chain in Brazil, as it can be confused with foot-and-mouth disease. Although, the virus has remained endemic in the country, an increase in the number of cases of the disease was observed in 2018. The aim of the present study was to conduct the differential diagnosis of foot-and-mouth disease in an outbreak of vesicular disease in finishing swine. Animals (160-170 days old) were kept on a farm with 6000 pigs in Minas Gerais State, Brazil. The morbidity and mortality rates were 20% and 2.2%, respectively. The diagnosis was performed by RT-PCR, using primers that determine the amplification of an internal region of the 3D gene. Furthermore, samples were inoculated into BHK-21 cell culture for viral isolation. In the first passage under cultivation, a cytopathogenic effect compatible with SVA replication (rounding and detachment of the cell monolayer) was observed. The viral identity was confirmed using two additional assays: indirect immunofluorescence assay (IFA) and nucleotide sequencing. Both tests confirmed that the infection was caused by SVA. In summary, we described a method for the diagnosis and viral isolation of SVA, a virus that arrived in Brazil in 2014 and has become endemic in the country.(AU)

Senecavírus A (SVA) é um problema no Brasil desde o final de 2014. As infecções causadas pelo SVA têm causado problemas para a cadeia produtiva no Brasil, pois podem ser confundidas com febre aftosa. Embora o vírus permaneça endêmico no país, foi observado um aumento no número de casos em 2018. O objetivo do presente estudo foi realizar o diagnostico diferencial de febre aftosa em um surto de doença vesicular em suínos de terminação. Os animais (160 a 170 dias de idade) eram mantidos em uma granja com 6.000 suínos no estado de Minas Gerais, Brasil. As taxas de morbidade e mortalidade foram de 20% e 2,2%, respectivamente. O diagnostico foi realizado por RT-PCR, utilizando primers que determinam a amplificação de uma região interna do gene 3D. Além disso, as amostras foram inoculadas na cultura de células BHK-21 para isolamento viral. Na primeira passagem em cultivo, foi observado efeito citopatogênico compatível com a replicação do SVA (arredondamento e descolamento da monocamada celular). A identidade viral foi confirmada usando duas técnicas adicionais: ensaio de imunofluorescência indireta (IFA) e sequenciamento de nucleotídeos. Ambos os testes confirmaram que a infecção foi causada por SVA. Em resumo, descrevemos um método para o diagnóstico e isolamento viral do SVA, um vírus que chegou ao Brasil em 2014 e se tornou endêmico no país.(AU)

Assuntos

RESUMO

ABSTRACT: Senecavirus A (SVA) has been a problem in Brazil since the end of 2014. The infections caused by SVA have disrupted the productive chain in Brazil, as it can be confused with foot-and-mouth disease. Although, the virus has remained endemic in the country, an increase in the number of cases of the disease was observed in 2018. The aim of the present study was to conduct the differential diagnosis of foot-and-mouth disease in an outbreak of vesicular disease in finishing swine. Animals (160-170 days old) were kept on a farm with 6000 pigs in Minas Gerais State, Brazil. The morbidity and mortality rates were 20% and 2.2%, respectively. The diagnosis was performed by RT-PCR, using primers that determine the amplification of an internal region of the 3D gene. Furthermore, samples were inoculated into BHK-21 cell culture for viral isolation. In the first passage under cultivation, a cytopathogenic effect compatible with SVA replication (rounding and detachment of the cell monolayer) was observed. The viral identity was confirmed using two additional assays: indirect immunofluorescence assay (IFA) and nucleotide sequencing. Both tests confirmed that the infection was caused by SVA. In summary, we described a method for the diagnosis and viral isolation of SVA, a virus that arrived in Brazil in 2014 and has become endemic in the country.

RESUMO: Senecavírus A (SVA) é um problema no Brasil desde o final de 2014. As infecções causadas pelo SVA têm causado problemas para a cadeia produtiva no Brasil, pois podem ser confundidas com febre aftosa. Embora o vírus permaneça endêmico no país, foi observado um aumento no número de casos em 2018. O objetivo do presente estudo foi realizar o diagnostico diferencial de febre aftosa em um surto de doença vesicular em suínos de terminação. Os animais (160 a 170 dias de idade) eram mantidos em uma granja com 6.000 suínos no estado de Minas Gerais, Brasil. As taxas de morbidade e mortalidade foram de 20% e 2,2%, respectivamente. O diagnostico foi realizado por RT-PCR, utilizando primers que determinam a amplificação de uma região interna do gene 3D. Além disso, as amostras foram inoculadas na cultura de células BHK-21 para isolamento viral. Na primeira passagem em cultivo, foi observado efeito citopatogênico compatível com a replicação do SVA (arredondamento e descolamento da monocamada celular). A identidade viral foi confirmada usando duas técnicas adicionais: ensaio de imunofluorescência indireta (IFA) e sequenciamento de nucleotídeos. Ambos os testes confirmaram que a infecção foi causada por SVA. Em resumo, descrevemos um método para o diagnóstico e isolamento viral do SVA, um vírus que chegou ao Brasil em 2014 e se tornou endêmico no país.