RESUMO

A pecuária corresponde hoje a mais da metade da produção agrícola em países desenvolvidos e mais de um quarto em países em desenvolvimento. Em resposta ao crescimento populacional e ao padrão de consumo que se eleva conforme a renda do consumidor, a pecuária cresce mais rápido do que outros setores da agricultura. Atualmente, o aumento na produção visa não só a expansão do número de animais, mas, principalmente, o aumento de sua eficiência.

RESUMO

The present study examined the viability of bovine nuclear transferred embryos. Oocytes were matured in vitro for 17 hours and enucleated after aspiration of the first polar body and the metaphase plate. Fibroblasts from a 10-year-old Nellore cow and 45-day-old male fetus collected from slaughterhouse were used as nuclei donor. Enucleated oocytes were fused with adult and fetal fibroblasts with an electric stimulus. After electrical fusion, the couplets were incubated in TCM199 plus 10% FCS supplemented with cycloheximide and cytochalasin D for 1 hour and then cycloheximide alone for an additional 4 hours. The activated reconstructed embryos were co-cultured with granulosa cells in TCM 199 for 7–9 days. A total of 569 couplets were reconstructed from adult and 668 from fetal fibroblasts. After electrofusion, 181 (adult cells) and 212 (fetal cells) embryos became fused and 30 (16.6%) and 32 (15.1%) reached the blastocyst stage, respectively. After transferring 21 (adult cells) and 18 (fetal cells) blastocysts, pregnancy rates at day 90 were 19% (4) and 16.7% (3), respectively. There was no significant difference (P 0.05) between the pregnancy rates. Two pregnancies from adult cells aborted at the 4th and 5th months of gestation. One recipient that received an embryo from adult fibroblasts produced a healthy Nellore female calf weighting 40 kg. The other recipient that receive

Este trabalho examinou a viabilidade de embriões bovinos obtidos por transferência nuclear. Oócitos foram maturados in vitro por 17 horas e enucleados após a aspiração do primeiro corpúsculo polar e da placa metafásica. Fibroblastos de uma vaca Nelore de 10 anos de idade e de um feto macho de 45 dias coletado em abatedouro foram utilizados como doadores de núcleos. Os oócitos enucleados foram fusionados com fibroblastos de origem adulta e fetal após estímulo elétrico. Após fusão elétrica, as estruturas reconstruídas foram incubadas em TCM199 acrescido de 10%de SFB e suplementado com cicloheximida e citocalasina D por 1 hora e depois mais 4 horas apenas em cicloheximida. Os embriões reconstruídos e ativados foram co-cultivados em TCM199 com células da granulosa por 7-9 dias. Um total de 569 embriões foram reconstruídos com fibroblasto adulto e 668 com fibroblasto fetal. Após a eletrofusão, 181 e 212 embriões oriundos de células adultas e fetais, respectivamente, fundiram e desses 16,6% e 15,1% chegaram ao estágio de blastocisto. Após transferir 21 e 18 blastocistos oriundos de células adultas e fetais, respectivamenet, as taxas de prenhez aos 90 dias foram 19% e 16, 7%. Não houve diferença estatística (p 0,05) entre as taxas de prenhez. Duas gestações originadas de células adultas abortaram ao 4º e 5º mês de gestação. Uma receptora que recebeu embrião de fibroblasto adulto pa

RESUMO

The present study examined the viability of bovine nuclear transferred embryos. Oocytes were matured in vitro for 17 hours and enucleated after aspiration of the first polar body and the metaphase plate. Fibroblasts from a 10-year-old Nellore cow and 45-day-old male fetus collected from slaughterhouse were used as nuclei donor. Enucleated oocytes were fused with adult and fetal fibroblasts with an electric stimulus. After electrical fusion, the couplets were incubated in TCM199 plus 10% FCS supplemented with cycloheximide and cytochalasin D for 1 hour and then cycloheximide alone for an additional 4 hours. The activated reconstructed embryos were co-cultured with granulosa cells in TCM 199 for 7–9 days. A total of 569 couplets were reconstructed from adult and 668 from fetal fibroblasts. After electrofusion, 181 (adult cells) and 212 (fetal cells) embryos became fused and 30 (16.6%) and 32 (15.1%) reached the blastocyst stage, respectively. After transferring 21 (adult cells) and 18 (fetal cells) blastocysts, pregnancy rates at day 90 were 19% (4) and 16.7% (3), respectively. There was no significant difference (P 0.05) between the pregnancy rates. Two pregnancies from adult cells aborted at the 4th and 5th months of gestation. One recipient that received an embryo from adult fibroblasts produced a healthy Nellore female calf weighting 40 kg. The other recipient that receive

Este trabalho examinou a viabilidade de embriões bovinos obtidos por transferência nuclear. Oócitos foram maturados in vitro por 17 horas e enucleados após a aspiração do primeiro corpúsculo polar e da placa metafásica. Fibroblastos de uma vaca Nelore de 10 anos de idade e de um feto macho de 45 dias coletado em abatedouro foram utilizados como doadores de núcleos. Os oócitos enucleados foram fusionados com fibroblastos de origem adulta e fetal após estímulo elétrico. Após fusão elétrica, as estruturas reconstruídas foram incubadas em TCM199 acrescido de 10%de SFB e suplementado com cicloheximida e citocalasina D por 1 hora e depois mais 4 horas apenas em cicloheximida. Os embriões reconstruídos e ativados foram co-cultivados em TCM199 com células da granulosa por 7-9 dias. Um total de 569 embriões foram reconstruídos com fibroblasto adulto e 668 com fibroblasto fetal. Após a eletrofusão, 181 e 212 embriões oriundos de células adultas e fetais, respectivamente, fundiram e desses 16,6% e 15,1% chegaram ao estágio de blastocisto. Após transferir 21 e 18 blastocistos oriundos de células adultas e fetais, respectivamenet, as taxas de prenhez aos 90 dias foram 19% e 16, 7%. Não houve diferença estatística (p 0,05) entre as taxas de prenhez. Duas gestações originadas de células adultas abortaram ao 4º e 5º mês de gestação. Uma receptora que recebeu embrião de fibroblasto adulto pa

RESUMO

A pecuária corresponde hoje a mais da metade da produção agrícola em países desenvolvidos e mais de um quarto em países em desenvolvimento. Em resposta ao crescimento populacional e ao padrão de consumo que se eleva conforme a renda do consumidor, a pecuária cresce mais rápido do que outros setores da agricultura. Atualmente, o aumento na produção visa não só a expansão do número de animais, mas, principalmente, o aumento de sua eficiência.

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The aim of this particular study was to test in vitro sperm capacitation protocols, using heparin (100mg/ml) and calcium ionophore (5mM). Propidium iodide and carboxifluorescein diacetate (IP/CFDA) in a fluorescence microscope as well as triple stain (congo red, neutral red and Giemsa) in Phase contrast microscope were used as staining. The spermatozoa were classified according to its viability (alive or dead) and acrossome integrity (damaged or intact). They were considered as follows: capacitated (alive and damaged); non capacitated (alive and not damaged) and dead (damaged or intact). The heparin group showed a ratio of 64.54% and 39.16% of capacitated spermatozoa in IP/CFDA and triple stain, respectively. In the calcium group, 36.41% and 18.11% of spermatozoa were capacitated in IP/CFDA and triple stain, respectively. Bulls were divided into 3 groups according to their fertility rates as follows: Group A 63%, Group B from 63 to 68% and Group C >; 68%. For all three groups there was significant differences (p;0.01), when observed capacitated, non capacitated and dead spermatozoa among groups A and B; A and C; B and C, using heparin and calcium ionophore in both stains. No correlation was seen between capacitation and fertility rates. Therefore heparin treatment showed better sperm capacitation rates than calcium ionophore. The IP/CFDA technique showed itself as being

O objetivo deste estudo foi avaliar os protocolos de capacitação espermática in vitro com 100 mg/ml de heparina e 5 mM de cálcio ionóforo e correlacionar a capacitação com a fertilidade in vivo. A capacitação espermática foi avaliada pela coloração com iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceína e pela coloração tripla com vermelho congo, vermelho neutro e giemsa. Os espermatozóides foram avaliados quanto a viabilidade (vivos ou mortos) e a qualidade do acrossomo (lesados ou íntegros), sendo caracterizados como capacitados (vivos e lesados), não capacitados (vivos e íntegros) e mortos (lesados ou íntegros). A heparina apresentou 64,54% e 39,16% e o cálcio ionóforo 36,41% e 18,11% de espermatozóides capacitados, respectivamente, pela epifluorescência e coloração tripla. Os touros foram divididos em três grupos de fertilidade, sendo o Grupo A ;68%. Nos três grupos houve diferença significativa (p;0,01) para os espermatozóides capacitados, não capacitados e mortos entre os grupos A, B e C, tanto na epifluorescência quanto na coloração tripla para ambos capacitores (heparina e cálcio ionóforo). Não houve correlação entre os espermatozóides capacitados in vitro e a taxa de fertilidade a campo. A heparina apresentou melhor taxa de espermatozóides capacitados e a epifluorescência mostrou-se mais eficiente na detecção da capacitação espermática (p 0,01).

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The in vitro and in vivo development of mouse morulae after cryopreservation through different methods was examined. The slow-freezing involved an equilibration in 1.5M ethylene glycol (EG) and cooled at 0.5; 0.7; 1.0 or 1.2ºC/minute. The vitrification involved a 3 minutes equilibration in 20% EG and 60 seconds in solution containing 40% EG, 18% ficoll and 10.26% sucrose. The quick-freezing involved an equilibration in 3M EG + 0.3M sucrose for 5 minutes and 2 minutes in nitrogen vapor. In all three methods the straws were thawed in air for 10 seconds and in water at 25ºC for 20 seconds and the embryos cultured in vitro for 72 hours to estimate blastocyst rate. To assess viability in vivo, frozen morulae as well as fresh embryos were transferred into recipients. The in vitro development rates with 0.5, 0.7; 1.0 and 1.2ºC/minute were, respectively, 72.3; 79.6; 76.5 and 84.8%. There was no significant difference among the cooling rates of 0.7; 1.0 and 1.2ºC/minute (p >; 0.01). The in vitro survival rates of vitrification and quick-freezing (84.5 and 74.3%, respectively) were similar to the slow-freezing. In vivo, the implantation rate and number of fetuses from embryos frozen through slow-freezing at 1.2ºC/minute, vitrification and quick-freezing were not significantly different.

Este trabalho avaliou o desenvolvimento in vitro e in vivo de mórulas de camundongos congeladas por diferentes métodos. A congelação lenta foi realizada em 1,5M de etileno glicol (EG) sendo os embriões resfriados a 0,5; 0,7; 1,0 e 1,2ºC/minuto. Na vitrificação, as mórulas foram equilibradas por 3 minutos em 20% de EG e vitrificadas em solução contendo 40% de EG, 18% de ficol e 10,26% de sacarose após 60 segundos de exposição. A congelação rápida em vapor de nitrogênio foi realizada em solução contendo 3M de EG + 0,3M de sacarose após 2 ou 5 minutos de exposição. Os embriões dos três métodos foram descongelados pela exposição das palhetas ao ar por 10 segundos e imersão em água a 25ºC por 20 segundos. Todos os embriões descongelados foram cultivados in vitro por 72 horas para avaliação da sobrevivência in vitro. Para avaliação da sobrevivência in vivo, mórulas congeladas e não congeladas (controle) foram transferidas para receptoras. O desenvolvimento in vitro nas velocidades de 0,5; 0,7; 1,0 e 1,2ºC/minuto foi, respectivamente, 72,3; 79,6; 76,5 e 84,8%. Não houve diferença estatística entre as velocidades de 0,7; 1,0 e 1,2ºC/minuto (p >; 0,01). O desenvolvimento in vitro das mórulas congeladas por vitrificação e pelo método rápido (84,5 e 74,3%, respectivamente) foi semelhante ao método lento. In vivo, a taxa de implantação e o número de fetos vivos não diferiram estatistica

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Compacted mouse morulae were frozen at 0.3ºC/min. or 0.5ºC/min. from -6ºC to -24ºC or -32ºC in 10% of glycerol plus different sucrose concentrations with or without 0.1% of honeybee royal jelly. Embryos were thawed in water bath at 22ºC for 20 seconds and cryoprotectant dilution was done in three steps. Embryos were cultured in Whittens medium for 24, 48 and 72 hours at 37ºC, 5% of CO2 and 100% of humidity. The in vitro development ranged from 56.6% to 100% after 72 hours. Expanded blastocysts were transferred to pseudopregnant recipients on the third day of the estrous cycle. Viable fetuses rates for embryos frozen to -24 or -32ºC at 0.3ºC/minute in 10% glycerol + 10% sucrose, 10% glycerol + 10% sucrose + 0.1% honeybee royal jelly, 10% glycerol + 0.1% honeybee royal jelly or 10% glycerol were respectively: 28.1% and 13.6%, 48.7% and 31.9%, 28.6% and 13.2%, 20.0% and 42.4%. Viable fetuses for embryos frozen to -24ºC or -32ºC at 0.5ºC/minute in 10% glycerol + 10% sucrose or 10% glycerol + 10% sucrose + 0.1% honeybee royal jelly were respectively 29.0% and 15.3%, 48.8% and 32.0%. We can conclude that addition of 10% sucrose to 10% glycerol was efficient for embryo freezing at 0.3 or 0.5ºC/minute and plunged in liquid nitrogen at -24ºC. The honeybee royal jelly addition provided higher viable fetuses rates when embryos were cooled at 0.3 or 0.5ºC/minute and plunged in liquid nitr

Embriões de camundongos foram congelados em 10% de glicerol adicionado de várias concentrações de sacarose e/ou 0,1% de geléia real, nas velocidades de 0,3ºC ou 0,5ºC/minuto até -24ºC ou -32ºC e descongelados em água a 22ºC durante 20 segundos. A diluição dos crioprotetores foi realizada em três etapas e o cultivo dos embriões no meio de Whitten em estufa com 5% de CO2, 100% de umidade e 37ºC por 72 horas. O desenvolvimento in vitro até blastocisto variou entre 56,6% e 93,4%, mostrando que 10% de sacarose + 10% de glicerol foi eficiente na congelação. Blastocistos expandidos oriundos de embriões congelados até -24 ou -32ºC à velocidade de 0,3ºC/minuto em soluções contendo 10% de glicerol + 10% de sacarose; 10% de glicerol + 10% de sacarose + 0,1% de geléia real; 10% de glicerol + 0,1% de geléia real ou 10% de glicerol, transferidos para receptoras pseudoprenhes, apresentaram, respectivamente, taxas de fetos viáveis de 28,1% e 13,6%, 48,7% e 31,9%, 28,6% e 13,2%, 20,0% e 42,4%. Embriões congelados até -24ºC ou -32ºC a 0,5ºC/minuto nas soluções de 10% de glicerol + 10% de sacarose ou 10% de glicerol + 10% de sacarose + 0,1% de geléia real apresentaram, respectivamente, taxas de fetos viáveis de 29,0% e 15,3%, 48,8% e 32,0%. Adição de sacarose e de geléia real ao meio de congelação contendo 10% de glicerol proporcionou maiores taxas de fetos viáveis a 0,3ºC e 0,5ºC/minuto e imersã

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Mouse embryos were cultured and co-cultured in mouse (MOEC) and bovine (BOEC) oviduct epithelial cells suspension. Embryos were co-cultured from one cell and two-cell stage to blastocyst stage. Cell culture (MOEC and BOEC) was made at a 100 µl drop under oil. Embryos were recovered 24-26 hours in the case of zygotes and 46-48 hours in the case of 2 cell embryos after hCG injection. Total embryos were randomly split into 3 groups: control (cultured), MOEC and BOEC (co-cultured) with CZB, TCM199 and B2 mediums. In CZB group, 44 zygotes (38.26%) from the control achieved blastocyst stage (expanded or hatched), being statistically different (p =0.05) from MOEC (1.89%) and BOEC (6.72%). Co-culture with zygotes in TCM199 and B2 didnt pass 2 cell block. Two cell embryos cultured in CZB achieved blastocyst stage at a rate of 43.80% for the control, 38.79% for MOEC and 29.60% for BOEC group. Statistical difference (p =0.05) appears from the control with BOEC groups. In TCM 199 medium, total of blastocyst were 48.15% for the control, 39.08% for MOEC and 48.49% for the BOEC groups, having no statistical difference among groups. This study allowed concluding that zygote block in TCM199 and B2 medium may be related to the presence of glucose. And that mouse embryos development is not species-specific.

Zigotos e embriões de 2 células de camundongos F1 (C57/DBA) foram cultivados (controle) e co-cultivados em suspensões de células epiteliais de ovidutos de camundongos (MOEC) e de bovinos (BOEC) até o estádio de blastocistos nos meios CZB, TCM199 e Ménézo B2. Os zigotos que atingiram os estádios de blastocistos expandido e eclodido no CZB foram 44 (38,26%) para o controle, 2 (1,89%) para as MOEC e 8 (6,72%) para as BOEC, sendo que o controle apresentou-se estatisticamente diferente (p =0,05) em relação às MOEC e às BOEC. Os zigotos cultivados e co-cultivados nos meios TCM199 e B2 não clivaram além de 2 células. Os embriões de 2 células que desenvolveram até blastocistos no CZB foram 46 (43,80%) para o controle, 45 (38,79%) para as MOEC e 37 (29,60%) para as BOEC, sendo que o controle apresentou-se estatisticamente diferente (p =0,05) em relação às BOEC. No TCM199, o total de blastocistos foi de 52 (48,15%) para o controle, 68 (39,08%) para as MOEC e 64 (48,49%) para as BOEC, não havendo diferença estatística (p>;0,05) entre os três grupos. No B2, o total de blastocistos foi de 28 (24,78%) para o controle, 34 (28,10%) para as MOEC e 25 (23,81%) para as BOEC, não havendo diferença estatística (p>;0,05) entre os três grupos. Concluiu-se que o bloqueio dos zigotos nos meios TCM199 e B2 pode estar relacionado à presença da glicose e que o oviduto não é espécie-específico

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The aim of this study was to evaluate the influence of the dominant follicle during its growing, static and regression phases on the superovulatory response in 18 estral cycles of nelore heifers. The follicular development was monitored by ultrasound from Day 6 to Day 10 (Day 0=estrus) of the oestrus cycle, when the diameter of the largest follicle was measured and the number of subordinate follicles counted. The animals where superovulated with 400 or 500IU of FSH/LH twice daily for 4 days begining on day 10 of the oestrus cycle I was injected PGF2alpha concomitantly with the fifth dose of FSH/LH. Artificial insemination was done 12 and 24 hours after the begining of the estrus. Embryos were recovered on day 6.5 after the first insemination. If a dominant follicle was present before superovulation, it was observed subordinate follicles atretic and low response to superovulatory treatment. The best result of transferable and total embryos was observed when the dominant follicle was in regression phase (3.67 and 10.17) at the beginning of the superovulatory treatment.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do folículo dominante nas fases de crescimento, estática e de regressão sobre a resposta superovulatória em 18 ciclos estrais de 9 novilhas da raça Nelore. Avaliaram-se os ovários entre o dia 6 e o dia 10 do ciclo estral pela técnica de ultra-sonografia, medindo-se o diâmetro do maior folículo e contando-se o número de folículos subordinados. Os animais foram superovulados com 400 ou 500 UI de FSH/LH, iniciando-se no dia 10 do ciclo estral, em subdoses decrescentes, por 4 dias consecutivos. Aplicou-se PGF2alfa concomitante com a quinta subdose de FSH/LH e realizaram-se inseminações artificiais às l2 horas e às 24 horas após o início dos sintomas de estro. Os embriões foram colhidos no dia 6,5 após a primeira inseminação artificial, obtendo-se 3,00; 3,83 e 10,17 embriões, respectivamente, nas fases de crescimento, estática e regressão. Observaram-se melhores resultados quanto ao número de embriões quando o folículo dominante se encontrava em fase de regressão.