RESUMO
La purificación parcial del Hu-IFN-* se logra en un solo paso por adsorción y elución sobre ácido silícico. La recuperación de la actividad antiviral es del 80-100 por ciento, con un aumento de la actividad específica de aproximadamente 20-80 veces. El producto obtenido por este método es estable y apropiado para ser utilizado en terapéuticas locales
Assuntos
Interferon Tipo I/isolamento & purificação , Interferon Tipo I/uso terapêutico , Tecnologia FarmacêuticaRESUMO
Un gen de IFN-* recientemente aislado en nuestro laboratorio a partir de una librería de ADN crosomal humano, fue genéticamente manipulado in vitro para poder acortar la secuencia señal y mejorar el rendimiento de IFN en cultivos bacterianos. Primero, la secuencia señal fue acortada en una extensión equivalente a nueve codones, usando la enzima de restricción HacIII y la secuencia remanente fue fusionada en fase con el codón iniciador del gen lacZ presente en el bacteriófago M13mp8. Uno de los clones recombinantes fue analizado en detalle. Este clon mostró una alta inestabilidad del inserto y una baja producción de actividad IFN, con un rendimiento similar al obtenido con el gen pre-IFN-*2 completo. El gen fusionado lacZ/IFN-* fue entonces transferido por clonaje mplecular al plásmido pBR322. Uno de los clones obtenidos mostró una buena estabilidad del plásmido híbrido, y aunque el rendimiento de actividad de IFN fue bajo (3x 10 a la 5 unidades/ml de extracto bacteriano crudo) la producción se mantuvo aún después de más de 20 pases. Finalmente, la secuencia señal recombinante presente en este clon fue nuevamente acortada en una extensión equivalente a 4 codones y se encontró que uno de los nuevos clones incrementaba aproximadamente en 20 veces el nivel de producción de actividad IFN. A pesar de que el polipéptido sintetizado constituye un producto de fusión, la actividad biológica antiviral de IFN parece quedar conservada