RESUMO
The aim of this investigation was the assessment of toxicity of two new isolates of Bacillus thuringiensis, and the aqueous extract of Melia azedarach through in vivo assays in CF1 mice. Bt 1958-2, Bt 2014-2 and the BTh Thuricide 63 standard isolates were grown in liquid usual glicosed medium, and Cry proteins were purified by centrifugation on a sucrose gradient. The supernatant was autoclaved at 121º C, 15min. to maintain the exotoxins. Dehydrated leaves of M. azedarach were used to prepare a 10% aqueous extract. Mice were treated either orally or intraperitoneally with a whole bacterial suspension (1.1010 UFC/mL), a culture supernatant or purified crystal protein (50 µg/mL), and with the plant extract (50 µg/mL). The stomachs of the mice were collected and observed in stereomicroscopy, and the stomach contents were analyzed in 10% SDS-PAGE. Results showed that none of the oral treatments were toxic to mice, but intraperitoneal bacterial suspensions were lethal to the animals 6 - 24 hours after injection. In conclusion, the Cry proteins of the new B. thuringiensis isolates must be evaluated for their use as tools in the biotechnology field, since they do not show toxicity against mammals, intragastrically or peritoneally, just like the M. azedarach aqueous extract (10%), with those being indicated for the biological control of pest insects. (AU)
TOXICIDADE VIA INTRAGÁSTRICA E INTRAPERITONEAL DE BACILLUSTHURINGIENSIS E MELIA AZEDARACH, EM CAMUNDONGOS. O objetivo deste estudo foi a avaliação da toxicidade de dois novos isolados de Bacillus thuringiensis e o extrato aquoso de Melia azedarach, através de ensaios in vivo em camundongos CF1. Os isolados Bt 1958-2, Bt 2014-2 e o isolado padrão BTH Thuricide 63 foram cultivados em meio usual glicosado, e as proteínas Cry foram purificadas por centrifugação em gradiente de sacarose. O sobrenadante foi tratado em autoclave a 121º C, 15 min para manter as exotoxinas. As folhas desidratadas de M. azedarach foram utilizadas para preparar um extrato aquoso a 10%. Camundongos foram tratados, via oral ou por via intraperitoneal, com a suspensão bacteriana (1.1010 UFC/mL), o sobrenadante de cultura ou a proteína do cristal purificada (50 µg/mL), e com o extrato da planta (50 µg/mL). Os estômagos dos ratos foram coletados e observados em estereomicroscópio e os conteúdos estomacais foram analisados em SDS-PAGE a 10%. Os resultados mostraram que nenhum dos tratamentos orais foram tóxicos para os camundongos, mas, via intraperitoneal, as suspensões bacterianas foram letais para os animais entre 6 e 24 horas após a injeção. Em conclusão, as proteínas Cry dos novos isolados de B. thuringiensis devem ser avaliadas para sua utilização como ferramenta no campo da biotecnologia, uma vez que elas não mostram toxicidade contra mamíferos, intragástrica ou intraperitoneal, assim como o extrato aquoso (10%) de M. azedarach, podendo ser indicado para o controle biológico de insetos-praga. (AU)
Assuntos
Animais , Testes de Toxicidade/veterinária , Bacillus thuringiensis/patogenicidade , Controle de Pragas/instrumentação , Camundongos/classificação , Bacteriologia/tendênciasRESUMO
The aim of this investigation was the assessment of toxicity of two new isolates of Bacillus thuringiensis, and the aqueous extract of Melia azedarach through in vivo assays in CF1 mice. Bt 1958-2, Bt 2014-2 and the BTh Thuricide 63 standard isolates were grown in liquid usual glicosed medium, and Cry proteins were purified by centrifugation on a sucrose gradient. The supernatant was autoclaved at 121º C, 15min. to maintain the exotoxins. Dehydrated leaves of M. azedarach were used to prepare a 10% aqueous extract. Mice were treated either orally or intraperitoneally with a whole bacterial suspension (1.10(10) UFC/mL), a culture supernatant or purified crystal protein (50 µg/mL), and with the plant extract (50 µg/mL). The stomachs of the mice were collected and observed in stereomicroscopy, and the stomach contents were analyzed in 10% SDS-PAGE. Results showed that none of the oral treatments were toxic to mice, but intraperitoneal bacterial suspensions were lethal to the animals 6 - 24 hours after injection. In conclusion, the Cry proteins of the new B. thuringiensis isolates must be evaluated for their use as tools in the biotechnology field, since they do not show toxicity against mammals, intragastrically or peritoneally, just like the M. azedarach aqueous extract (10%), with those being indicated for the biological control of pest insects.
O objetivo deste estudo foi a avaliação da toxicidade de dois novos isolados de Bacillus thuringiensis e o extrato aquoso de Melia azedarach, através de ensaios in vivo em camundongos CF1. Os isolados Bt 1958-2, Bt 2014-2 e o isolado padrão BTH Thuricide 63 foram cultivados em meio usual glicosado, e as proteínas Cry foram purificadas por centrifugação em gradiente de sacarose. O sobrenadante foi tratado em autoclave a 121º C, 15 min para manter as exotoxinas. As folhas desidratadas de M. azedarach foram utilizadas para preparar um extrato aquoso a 10%. Camundongos foram tratados, via oral ou por via intraperitoneal, com a suspensão bacteriana (1.10(10) UFC/mL), o sobrenadante de cultura ou a proteína do cristal purificada (50 µg/mL), e com o extrato da planta (50 µg/mL). Os estômagos dos ratos foram coletados e observados em estereomicroscópio e os conteúdos estomacais foram analisados em SDS-PAGE a 10%. Os resultados mostraram que nenhum dos tratamentos orais foram tóxicos para os camundongos, mas, via intraperitoneal, as suspensões bacterianas foram letais para os animais entre 6 e 24 horas após a injeção. Em conclusão, as proteínas Cry dos novos isolados de B. thuringiensis devem ser avaliadas para sua utilização como ferramenta no campo da biotecnologia, uma vez que elas não mostram toxicidade contra mamíferos, intragástrica ou intraperitoneal, assim como o extrato aquoso (10%) de M. azedarach, podendo ser indicado para o controle biológico de insetos-praga.
RESUMO
The aim of this investigation was the assessment of toxicity of two new isolates of Bacillus thuringiensis, and the aqueous extract of Melia azedarach through in vivo assays in CF1 mice. Bt 1958-2, Bt 2014-2 and the BTh Thuricide 63 standard isolates were grown in liquid usual glicosed medium, and Cry proteins were purified by centrifugation on a sucrose gradient. The supernatant was autoclaved at 121º C, 15min. to maintain the exotoxins. Dehydrated leaves of M. azedarach were used to prepare a 10% aqueous extract. Mice were treated either orally or intraperitoneally with a whole bacterial suspension (1.1010 UFC/mL), a culture supernatant or purified crystal protein (50 µg/mL), and with the plant extract (50 µg/mL). The stomachs of the mice were collected and observed in stereomicroscopy, and the stomach contents were analyzed in 10% SDS-PAGE. Results showed that none of the oral treatments were toxic to mice, but intraperitoneal bacterial suspensions were lethal to the animals 6 - 24 hours after injection. In conclusion, the Cry proteins of the new B. thuringiensis isolates must be evaluated for their use as tools in the biotechnology field, since they do not show toxicity against mammals, intragastrically or peritoneally, just like the M. azedarach aqueous extract (10%), with those being indicated for the biological control of pest insects.
TOXICIDADE VIA INTRAGÁSTRICA E INTRAPERITONEAL DE BACILLUSTHURINGIENSIS E MELIA AZEDARACH, EM CAMUNDONGOS. O objetivo deste estudo foi a avaliação da toxicidade de dois novos isolados de Bacillus thuringiensis e o extrato aquoso de Melia azedarach, através de ensaios in vivo em camundongos CF1. Os isolados Bt 1958-2, Bt 2014-2 e o isolado padrão BTH Thuricide 63 foram cultivados em meio usual glicosado, e as proteínas Cry foram purificadas por centrifugação em gradiente de sacarose. O sobrenadante foi tratado em autoclave a 121º C, 15 min para manter as exotoxinas. As folhas desidratadas de M. azedarach foram utilizadas para preparar um extrato aquoso a 10%. Camundongos foram tratados, via oral ou por via intraperitoneal, com a suspensão bacteriana (1.1010 UFC/mL), o sobrenadante de cultura ou a proteína do cristal purificada (50 µg/mL), e com o extrato da planta (50 µg/mL). Os estômagos dos ratos foram coletados e observados em estereomicroscópio e os conteúdos estomacais foram analisados em SDS-PAGE a 10%. Os resultados mostraram que nenhum dos tratamentos orais foram tóxicos para os camundongos, mas, via intraperitoneal, as suspensões bacterianas foram letais para os animais entre 6 e 24 horas após a injeção. Em conclusão, as proteínas Cry dos novos isolados de B. thuringiensis devem ser avaliadas para sua utilização como ferramenta no campo da biotecnologia, uma vez que elas não mostram toxicidade contra mamíferos, intragástrica ou intraperitoneal, assim como o extrato aquoso (10%) de M. azedarach, podendo ser indicado para o controle biológico de insetos-praga.
Assuntos
Animais , Bacillus thuringiensis/patogenicidade , Controle de Pragas/instrumentação , Testes de Toxicidade/veterinária , Bacteriologia/tendências , Camundongos/classificaçãoRESUMO
The aim of this investigation was the assessment of toxicity of two new isolates of Bacillus thuringiensis, and the aqueous extract of Melia azedarach through in vivo assays in CF1 mice. Bt 1958-2, Bt 2014-2 and the BTh Thuricide 63 standard isolates were grown in liquid usual glicosed medium, and Cry proteins were purified by centrifugation on a sucrose gradient. The supernatant was autoclaved at 121º C, 15min. to maintain the exotoxins. Dehydrated leaves of M. azedarach were used to prepare a 10% aqueous extract. Mice were treated either orally or intraperitoneally with a whole bacterial suspension (1.10(10) UFC/mL), a culture supernatant or purified crystal protein (50 µg/mL), and with the plant extract (50 µg/mL). The stomachs of the mice were collected and observed in stereomicroscopy, and the stomach contents were analyzed in 10% SDS-PAGE. Results showed that none of the oral treatments were toxic to mice, but intraperitoneal bacterial suspensions were lethal to the animals 6 - 24 hours after injection. In conclusion, the Cry proteins of the new B. thuringiensis isolates must be evaluated for their use as tools in the biotechnology field, since they do not show toxicity against mammals, intragastrically or peritoneally, just like the M. azedarach aqueous extract (10%), with those being indicated for the biological control of pest insects.
O objetivo deste estudo foi a avaliação da toxicidade de dois novos isolados de Bacillus thuringiensis e o extrato aquoso de Melia azedarach, através de ensaios in vivo em camundongos CF1. Os isolados Bt 1958-2, Bt 2014-2 e o isolado padrão BTH Thuricide 63 foram cultivados em meio usual glicosado, e as proteínas Cry foram purificadas por centrifugação em gradiente de sacarose. O sobrenadante foi tratado em autoclave a 121º C, 15 min para manter as exotoxinas. As folhas desidratadas de M. azedarach foram utilizadas para preparar um extrato aquoso a 10%. Camundongos foram tratados, via oral ou por via intraperitoneal, com a suspensão bacteriana (1.10(10) UFC/mL), o sobrenadante de cultura ou a proteína do cristal purificada (50 µg/mL), e com o extrato da planta (50 µg/mL). Os estômagos dos ratos foram coletados e observados em estereomicroscópio e os conteúdos estomacais foram analisados em SDS-PAGE a 10%. Os resultados mostraram que nenhum dos tratamentos orais foram tóxicos para os camundongos, mas, via intraperitoneal, as suspensões bacterianas foram letais para os animais entre 6 e 24 horas após a injeção. Em conclusão, as proteínas Cry dos novos isolados de B. thuringiensis devem ser avaliadas para sua utilização como ferramenta no campo da biotecnologia, uma vez que elas não mostram toxicidade contra mamíferos, intragástrica ou intraperitoneal, assim como o extrato aquoso (10%) de M. azedarach, podendo ser indicado para o controle biológico de insetos-praga.
RESUMO
The apparent success in vector control observed between 1950 and 1970 was followed by worldwide resistance to organosynthetic insecticides wherever they were used intensively. Insect resistance to one or more categories of insecticides has limited the effectiveness of these compounds, and their non-selective mode of action adversely affects non-target organisms. This scenario highlights the need for selective agents in integrated vector control programs. This article gives an overview of the main fundamental and applied research topics on entomopathogenic bacteria in relation to their role in vector control.
Assuntos
Bacillus thuringiensis/patogenicidade , Toxinas Bacterianas/farmacologia , Culicidae/microbiologia , Insetos Vetores/microbiologia , Controle Biológico de Vetores/métodos , Animais , Culicidae/crescimento & desenvolvimento , Insetos Vetores/efeitos dos fármacosRESUMO
Bacteria active against dipteran larvae (mosquitoes and black flies) include a wide variety of Bacillus thuringiensis and B. sphaericus strains, as well as isolates of Brevibacillus laterosporus and Clostridium bifermentans. All display different spectra and levels of activity correlated with the nature of the toxins, mainly produced during the sporulation process. This paper describes the structure and mode of action of the main mosquitocidal toxins, in relationship with their potential use in mosquito and/or black fly larvae control. Investigations with laboratory and field colonies of mosquitoes that have become highly resistant to the B. sphaericus Bin toxin have shown that several mechanisms of resistance are involved, some affecting the toxin/receptor binding step, others unknown.