RESUMO
Although the existence of O-linked oligosaccharide residues in glycoproteins of Plasmodium falciparum has been shown, the existence of N-linked glycoproteins is still a matter of controversy and skepticism. This report demonstrates the unequivocal presence of N-linked glycoproteins in P. falciparum, principally in the ring and young trophozoite stages of the intraerythrocytic cycle. These glycoproteins lose their capacity to bind to concanavalin A-Sepharose after treatment of cultures with tunicamycin under conditions that do not affect protein synthesis. When the glycoproteins were treated with N-Glycanase(R), oligosaccharides were released. It was possible to identify an N-linked glycoprotein of >200 kDa in the ring stage and also N-linked glycoproteins in the range of 200-30 kDa in the trophozoite stage. Treatment of trophozoites with 12 microM tunicamycin inhibited differentiation to the schizont stage. To our knowledge, this is the first report in the literature unequivocally showing N-linked glycoproteins in trophozoites of P. falciparum as well as their importance for the differentiation of the intraerythrocytic stages of this parasite.
Assuntos
Eritrócitos/parasitologia , Glicoproteínas/biossíntese , Plasmodium falciparum/fisiologia , Proteínas de Protozoários/biossíntese , Amidoidrolases , Animais , Radioisótopos de Carbono , Cromatografia de Afinidade , Cromatografia em Gel , Cromatografia em Papel , Cromatografia em Camada Fina , Cicloeximida/farmacologia , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Glucose/metabolismo , Glicoproteínas/isolamento & purificação , Humanos , Cinética , Malária Falciparum/sangue , Manose/metabolismo , Metionina/metabolismo , Peso Molecular , Oligossacarídeos/química , Oligossacarídeos/isolamento & purificação , Parasitemia/sangue , Peptídeo-N4-(N-acetil-beta-glucosaminil) Asparagina Amidase , Plasmodium falciparum/efeitos dos fármacos , Plasmodium falciparum/patogenicidade , Proteínas de Protozoários/isolamento & purificação , Radioisótopos de Enxofre , Tunicamicina/farmacologiaRESUMO
Tc-85, an 85-kDa surface glycoprotein specific for the trypomastigote stage of Trypanosoma cruzi, has been implicated in the invasion of host cells by the parasite. Radioactive palmitic acid was incorporated into Tc-85 immunoprecipitated from the culture medium with the H1A10 monoclonal antibody, suggesting that shedding occurs with Tc-85 bearing its GPI anchor. In contrast to the glycoprotein remaining in the parasites, the glycosylphosphatidylinositol moiety in shed Tc-85 is resistant to phosphatidylinositol phospholipase C and becomes susceptible to the enzyme following alkali treatment. An alkylglycerol was identified by thin layer chromatography of an ether extract after the enzymatic reaction. Resistance to cleavage by phospholipase C is due to fatty acid esterification of the inositol residue in shed Tc-85. This is the first example of inositol modification in anchors from a glycoprotein of Trypanosoma cruzi.
Assuntos
Glicoproteínas/química , Glicosilfosfatidilinositóis/análise , Proteínas de Membrana/química , Proteínas de Protozoários/química , Trypanosoma cruzi/química , Animais , Anticorpos Monoclonais/imunologia , Western Blotting , Cromatografia em Camada Fina , Testes de PrecipitinaRESUMO
A hydrophobic fraction isolated from trypomastigotes of Trypanosoma cruzi is being characterized using immunological and chemical techniques. The lipopeptidophosphoglycan (LPPG) was identified in this fraction since it gave a positive reaction with anti-LPPG rabbit serum and had similar structural features such as the presence of ceramide as the lipid moiety, furanoic galactose, and a glycan moiety consistent with that obtained from an authentic sample of epimastigote LPPG, as judged by thin-layer chromatography. Furthermore, the hydrophobic fraction contained other glycolipids with different structural features. The lipid moiety of these compounds is alkylglycerol rather than a ceramide, the carbohydrate chain appears to be less complex than that in LPPG and no reactivity was observed towards an anti-LPPG serum.
Assuntos
Peptidoglicano/química , Fosfolipídeos/química , Proteínas de Protozoários/química , Trypanosoma cruzi/química , Animais , Sequência de Carboidratos , Cromatografia em Camada Fina , Glicoconjugados/química , Dados de Sequência MolecularRESUMO
A hydrophobic fraction isolated from trypomastigotes of Trypanosoma cruzi is being characterized using immunological and chemical techniques. The lipopeptidophosphoglycan (LPPG) was identified in this fraction since it gave a positive reaction with anti-LPPG rabbit serum and had similar structural features such as the presence of ceramide as the lipid moiety, furanoic galactose, and a glycan moiety consistent with that obtained from an authentic sample of epimastigote LPPG, as judged by thin-layer chromatography. Furthermore, the hydrophobic fraction contained other glycolipids with different structural features. The lipid moiety of these compounds is alkylglycerol rather than a ceramide, the carbohydrate chain appears to be less complex than that in LPPG and no reactivity was observed towards an anti-LPPG serum
Assuntos
Animais , Coelhos , Glicoconjugados/química , Peptidoglicano/química , Fosfolipídeos/química , Trypanosoma cruzi/química , Western Blotting , Sequência de Carboidratos , Glicoproteínas/imunologia , Glicoproteínas/química , Glicoconjugados/imunologia , Dados de Sequência Molecular , Peptidoglicano/imunologia , Fosfolipídeos/imunologia , Trypanosoma cruzi/imunologiaRESUMO
The lipopeptidophosphoglycan (LPPG) from Trypanosoma cruzi, a major constituent of the plasma membrane of epimastigote forms, has been now extracted with butanol/water from delipidated cells and purified by hydrophobic chromatography. We have found that the LPPG undergoes two reactions, characteristic of the glycosylphosphatidylinositol anchors: (a) cleavage of the ceramide by phosphatidylinositol-specific phospholipase C (PtdIns-specific phospholipase C) from Bacillus thuringiensis, (b) nitrous acid deamination of the non-N-acylated glucosamine. Palmitoylsphinganine, palmitoylsphingosine, lignoceroylsphinganine and, as minor components, the stearoylceramides were identified by gas liquid chromatography/mass spectrometry. The presence of cross reacting determinant (CRD) epitopes in the glycophosphoinositol released by PtdIns-specific phospholipase C was investigated by direct and inhibition ELISA. A sample of glycophosphoinositol containing 5 micrograms carbohydrate caused 60% inhibition of the binding of anti-CRD antibodies raised against the soluble form of variant surface glycoprotein.
Assuntos
Glicolipídeos/análise , Peptidoglicano/isolamento & purificação , Fosfatidilinositóis/análise , Fosfolipídeos/isolamento & purificação , Trypanosoma cruzi/análise , Animais , Ceramidas/isolamento & purificação , Cromatografia Líquida de Alta Pressão , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Glicosilfosfatidilinositóis , Oxirredução , Peptidoglicano/análise , Fosfolipídeos/análise , Fosfolipases Tipo CAssuntos
Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Humanos , Masculino , Feminino , Alumínio , Tecnécio , Úlcera PépticaAssuntos
Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Humanos , Masculino , Feminino , Alumínio/diagnóstico , Tecnécio/diagnóstico , Úlcera Péptica/diagnóstico por imagemRESUMO
Se presentan los resultados de un estudio cooperativo sobre la exploracion de la via biliar con 99mTc diisopropil-IDA. Se estudiaron 15 voluntarios normales y 75 pacientes portadores de colecistitis aguda (CA), y cronica (CC), ictericias hepatocelulares (IHC), obstructivas coledocianas incompletas (ICI) y completas (ICC).Se determino el comportamiento biologico del radiofarmaco en los dos grupos estudiados a traves de la medida de los tiempos de captacion y aparicion en el parenquima hepatico, en la via biliar principal intra y extrahepatica, en la vesicula, en el duodeno y en los rinones. Se describen los modelos fisiopatologicos encontrados en la CA, CC, IHC, ICI, ICC. Se concluye que el procedimiento tiene indicacion de eleccion en la CA, que su valor es limitado en la CC y que en las ictericias salvo en situaciones muy especiales el metodo aporta muy poca informacion de utilidad clinica. Se destaca la posibilidad que Servicios Latinoamericanos realicen trabajos cientificos en forma conjunta acrecentando su nivel de eficacia
Assuntos
Lactente , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Humanos , Masculino , Feminino , Colelitíase , Colestase , Cintilografia , Iminoácidos , TecnécioRESUMO
Se presentan los resultados de un estudio cooperativo sobre la exploracion de la via biliar con 99mTc diisopropil-IDA. Se estudiaron 15 voluntarios normales y 75 pacientes portadores de colecistitis aguda (CA), y cronica (CC), ictericias hepatocelulares (IHC), obstructivas coledocianas incompletas (ICI) y completas (ICC).Se determino el comportamiento biologico del radiofarmaco en los dos grupos estudiados a traves de la medida de los tiempos de captacion y aparicion en el parenquima hepatico, en la via biliar principal intra y extrahepatica, en la vesicula, en el duodeno y en los rinones. Se describen los modelos fisiopatologicos encontrados en la CA, CC, IHC, ICI, ICC. Se concluye que el procedimiento tiene indicacion de eleccion en la CA, que su valor es limitado en la CC y que en las ictericias salvo en situaciones muy especiales el metodo aporta muy poca informacion de utilidad clinica. Se destaca la posibilidad que Servicios Latinoamericanos realicen trabajos cientificos en forma conjunta acrecentando su nivel de eficacia
Assuntos
Lactente , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Humanos , Masculino , Feminino , Cintilografia , Colelitíase , Colestase , Iminoácidos , TecnécioRESUMO
En 7 casos con hernia hiatal comprobada radiologicamente se realizo centellograma esofagogastrico. Se describe la tecnica utilizada. En 6 se obtuvo evidencia centellografica de reflujo, mientras que la radiografia simple habia detectado 4. Resulta un metodo confortable para los pacientes ya que elimina el uso de la sonda nasogastrica
Assuntos
Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Humanos , Masculino , Feminino , Refluxo Gastroesofágico , Hérnia Hiatal , CintilografiaRESUMO
Con el objeto de estudiar la influencia del dano inducido por el alcohol sobre la captacion hepatica de radiocoloides, fueron estudiados tres grupos de pacientes con deterioro creciente de la arquitectura hepatica: un grupo de sujetos normales, un grupo de hepatopatias alcoholicas que no llegaban a configurar el cuadro histologico de cirrosis y un grupo de cirrosis. En todos ellos, ademas de efectuar una biopsia hepatica y pruebas funcionales, se estudio en forma dinamica la captacion hepatica de un radiocoloide luego de su inyeccion en una vena periferica. La actividad a nivel del higado fue medida externamente con una camara gamma, analizandose la evolucion temporal de dicha actividad hasta que la depuracion plasmatica fue completa.En todos los casos estudiados se comprobo que dicha evolucion se apartaba de un curso monoexponencial. La determinacion de la pendiente (logaritmo de dicha concentracion a lo largo del tiempo) en dos puntos diferentes (50% y 90% del valor final) mostro que, al aumentar el grado de compromiso en la estructura hepatica, crecia la diferencia entre ambas pendientes. Se considera que este hallazgo puede ser tomado como evidencia de la irregular distribucion sanguinea intrahepatica y que el cociente entre ambas pendientes puede ser utilizado como un indice del grado de compromiso de la misma
Assuntos
Coloides , Hepatopatias AlcoólicasRESUMO
Con el objeto de estudiar la influencia del dano inducido por el alcohol sobre la captacion hepatica de radiocoloides, fueron estudiados tres grupos de pacientes con deterioro creciente de la arquitectura hepatica: un grupo de sujetos normales, un grupo de hepatopatias alcoholicas que no llegaban a configurar el cuadro histologico de cirrosis y un grupo de cirrosis. En todos ellos, ademas de efectuar una biopsia hepatica y pruebas funcionales, se estudio en forma dinamica la captacion hepatica de un radiocoloide luego de su inyeccion en una vena periferica. La actividad a nivel del higado fue medida externamente con una camara gamma, analizandose la evolucion temporal de dicha actividad hasta que la depuracion plasmatica fue completa.En todos los casos estudiados se comprobo que dicha evolucion se apartaba de un curso monoexponencial. La determinacion de la pendiente (logaritmo de dicha concentracion a lo largo del tiempo) en dos puntos diferentes (50% y 90% del valor final) mostro que, al aumentar el grado de compromiso en la estructura hepatica, crecia la diferencia entre ambas pendientes. Se considera que este hallazgo puede ser tomado como evidencia de la irregular distribucion sanguinea intrahepatica y que el cociente entre ambas pendientes puede ser utilizado como un indice del grado de compromiso de la misma
Assuntos
Coloides , Hepatopatias AlcoólicasRESUMO
En 7 casos con hernia hiatal comprobada radiologicamente se realizo centellograma esofagogastrico. Se describe la tecnica utilizada. En 6 se obtuvo evidencia centellografica de reflujo, mientras que la radiografia simple habia detectado 4. Resulta un metodo confortable para los pacientes ya que elimina el uso de la sonda nasogastrica