RESUMO
The south region is the only area in Brazil that does not present autochthonous cases of visceral leishmaniasis (VL), however, in the state of Parana, dogs and humans have been found showing a VL compatible clinical profile. In view of this problem, the present work aimed at isolating and identifying the parasite and determining the cases autochthony. All animals clinically suspect of VL were clinically evaluated, and had samples of their blood collected for hemoculture (NNN culture medium), serology, PCR and RAPD-PCR, hemogram, and biochemical assays. The dogs presenting VL clinical profile had their lymph nodes and/or bone marrow punctured and their content inoculated in NNN culture medium. The protozoan isolated was identified by PCR and PCR-RAPD. Strains of Leishmania were isolated in 19 out of the 24 studied animals. Fourteen isolates were identified as L. (Leishmania) infantum, and five were L. (Viannia) braziliensis. In the epidemiological analysis, it was possible to determine that all dogs with L. (L.) infantum being allochthonous cases. Leishmaniasis is a zoonose that has the domestic dog as reservoir, the migration ofsuch animals can disseminate the parasite to other regions, provided the agent finds an adequate ecotope and a specific vector (Lutzomyia longipalpis).
O presente trabalho teve como objetivo pesquisar a ocorrência de leishmaniose visceral em cães com sinais clínicos compatíveis, procedentes de clínicas veterinárias das diferentes regiões do Estado do Paraná e em caso positivo verificar a autoctonia dos mesmos. Dos animais com suspeita clínica e epidemiológica de LV, foi coletada amostra de sangue para realização de hemograma, provas bioquímicas, sorologia, cultura do parasito, PCR e RAPD. Os cães portadores de quadro clínico, como febre, hiperqueratose, onicogrifose e emagrecimento exagerado, tiveram gânglio poplíteo e/ou medula óssea puncionados e o conteúdo inoculado em meio de cultivo NNN. A extração de DNA do parasito em sangue e cultura foi realizada pelo método fenol/clorofórmio. A amplificação de DNA do protozoário foi feita por PCR e RAPD. Dos 24 animais analisados, o parasito foi isolado em 19 cães. As técnicas moleculares permitiram identificar 14 isolados como L. (Leihmania) infantum e cinco como L. (Viannia) braziliensis. A análise epidemiológica dos casos permitiu determinar o local de transmissão e definir que todos os cães com LV diagnosticados eram casos alóctones, ou seja eram importados de regiões endêmicas. Sugere-se que a migração dos cães de regiões endêmicas para regiões indenes poderá permitir a instalação de novos focos, desde que o agente encontre ecótopo adequado e vetor específico (Lutzomyia longipalpis).
RESUMO
The beta-hemolytic group C streptococci (Lancefield's group) has been considered an emergent human pathogen, showing an important role as an opportunist agent, being responsible for nosocomial infections and outbreaks. This study is reporting the first outbreak of nosocomial infection caused by Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis in Brazil. From January, 2002, to December, 2004, S. equisimilis was isolated in 67/207 (32.37%) samples from secretions of patients' infected wounds, interned at the Hospital of Sanitary Dermatology in the State of Paraná (HDSPR). The prevalence of this microorganism increased from 11/42 (26.19%) in 2002, 14/65 (21.54%) in 2003 to 42/100 (42.00%) in 2004. This increase was statistically significant (p=0.024), and this microorganism became the most frequently isolated in these patients, overtaking the rates of isolation of Pseudomonas aeruginosa. The S. equisimilis grew in pure culture, as a unique microorganism, in six samples (2.9%) out of 207. Fresh feces of 15 animals (horses and sheep) living in the proximities of the hospital were also examined and three of them positive for S. equisimilis. The biochemical profile of the strains isolated from the patients and from the animals was the same. These animals might have been the source of the dissemination of the outbreak in the hospital. New studies will be necessary to confirm the genetic relationship between the strains isolated from patients and animals.
O estreptococo beta-hemolítico do grupo C de Lancefield tem sido considerado patógeno humano emergente, mostrando importante papel como agente oportunista, implicado algumas vezes em infecções hospitalares e surtos. Este estudo está relatando o primeiro surto de infecção hospitalar causado pelos Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis no Brasil. De janeiro de 2002 a dezembro de 2004, isolou-se S. equisimilis em 67/207 (32,37%) das amostras de secreções de lesões de feridas coletadas de pacientes internados no Hospital de Dermatologia Sanitária do Paraná (HDSPR). A prevalência deste microrganismo aumentou de 11/42 (26,19%) em 2002, 14/65 (21,54%) em 2003 para 42/100 (42,00%) em 2004. Este aumento foi estatisticamente significante (p=0.024), tornando este microrganismo o mais freqüentemente isolado nos pacientes, ultrapassando as taxas de isolamento de Pseudomonas aeruginosa. Em seis amostras (2,9%) entre as 207 examinadas, S. equisimilis cresceu em cultivo puro, como único microrganismo. Também foram examinadas fezes frescas de 15 animais (cavalos e ovelhas) que vivem nas proximidades do hospital, e três amostras foram positivas para S. equisimilis. O perfil bioquímico encontrado entre os isolados dos pacientes foi o mesmo encontrado entre os isolados das fezes dos animais. Acredita-se que estes animais possam ter sido a fonte de disseminação do surto no hospital. Novos estudos serão necessários para confirmar o relacionamento genético entre os isolados dos pacientes e animais.
RESUMO
Dermatobia hominis larvae cause ulcerative lesions and damage to subcutaneous tissue and skin of the host. Leather is the subproduct which undergoes major depreciation, making it difficult to industrial use. Nowadays, the chemical control is utilized against dermatobiosis, therefore it leads to rising toxic chemicals in the animals and environment. The immunological challenge with D. hominis larval extract may represent an important altervative for this parasitosis control. Humoral and cellular immune responses were tested in bovine using an antigenic extract prepared with D. hominis larvae. Three groups of 10 months old Nelore females were used. The first group (A) received immunogenic larval extract of D. hominis with fifteen-days interval between injections; the group (B) was the control and has not received any sort of treatment; and the group (C) received an ectoparasitecide treatment based on Dichlorvos associated to Cypermetrina. Aditionally, leucogram and levels of IgG against D. hominis by immunoassay technique were evaluated. As for the humoral immunity, animals from group A presented higher IgG production against D. hominis with maximum levels of circulating antibodies at the 45th day after the first injection. These animals also showed higher production of neutrophils, eosinophils and monocytes than those from groups B and C. The number of D. hominis larvae nodules observed in animals from the group C was 148.3% larger than those from group A and B. The evidence concerning both cellular and humoral immune responses as well as the reduction on nodules number are an indication that the immunization against D. hominis was partially protective for the immunized bovines.
As larvas da Dermatobia hominis provocam lesões ulcerativas, danificando o tecido subcutâneo e conseqüentemente a pele do hospedeiro. O couro é o subproduto que sofre maior depreciação, o que, muitas vezes, impossibilita seu aproveitamento na industrialização. Atualmente o controle químico é utilizado como forma de combate à dermatobiose, entretanto, leva ao acúmulo de substâncias tóxicas nos animais e no ambiente. No presente trabalho, foram avaliadas as respostas imune-humoral e celular de bovinos imunizados com extrato antigênico preparado com larvas de D. hominis. Três grupos de oito bezerras da raça Nelore com 10 meses de idade foram usados, tendo o primeiro grupo (A) recebido aplicação de extrato imunogênico de larvas de D. hominis, com intervalos de quinze dias; o grupo (B), utilizado como controle, não recebendo nenhum tipo de tratamento; e o grupo (C) recebendo o tratamento ectoparasiticida à base de Dichlorvos associado a Cypermetrina. Neste mesmo período, foram avaliados o leucograma e os níveis de IgG contra D. hominis pela técnica de enzimoimunoensaio-ELISA. Quanto à avaliação da imunidade humoral, verificou-se que os animais do grupo A apresentaram maior produção de IgG contra D. hominis, com níveis máximos de anticorpos circulantes aos 45 dias após a primeira imunização. Estes animais também apresentaram maior produção de neutrófilos, eosinófilos e monócitos que os dos grupos B e C. O número de nódulos de larvas encontrado nos animais do grupo C foi 148,3% maior que nos animais dos grupos A e B. A comprovação da resposta imune celular e humoral, parcialmente caracterizadas, bem como a redução do número de nódulos, são indicadores que a imunização contra D. hominis foi parcialmente protetora para os bovinos imunizados.
RESUMO
Dermatobia hominis larvae cause ulcerative lesions and damage to subcutaneous tissue and skin of the host. Leather is the subproduct which undergoes major depreciation, making it difficult to industrial use. Nowadays, the chemical control is utilized against dermatobiosis, therefore it leads to rising toxic chemicals in the animals and environment. The immunological challenge with D. hominis larval extract may represent an important altervative for this parasitosis control. Humoral and cellular immune responses were tested in bovine using an antigenic extract prepared with D. hominis larvae. Three groups of 10 months old Nelore females were used. The first group (A) received immunogenic larval extract of D. hominis with fifteen-days interval between injections; the group (B) was the control and has not received any sort of treatment; and the group (C) received an ectoparasitecide treatment based on Dichlorvos associated to Cypermetrina. Aditionally, leucogram and levels of IgG against D. hominis by immunoassay technique were evaluated. As for the humoral immunity, animals from group A presented higher IgG production against D. hominis with maximum levels of circulating antibodies at the 45th day after the first injection. These animals also showed higher production of neutrophils, eosinophils and monocytes than those from groups B and C. The number of D. hominis larvae nodules observed in animals from the group C was 148.3% larger than those from group A and B. The evidence concerning both cellular and humoral immune responses as well as the reduction on nodules number are an indication that the immunization against D. hominis was partially protective for the immunized bovines.
As larvas da Dermatobia hominis provocam lesões ulcerativas, danificando o tecido subcutâneo e conseqüentemente a pele do hospedeiro. O couro é o subproduto que sofre maior depreciação, o que, muitas vezes, impossibilita seu aproveitamento na industrialização. Atualmente o controle químico é utilizado como forma de combate à dermatobiose, entretanto, leva ao acúmulo de substâncias tóxicas nos animais e no ambiente. No presente trabalho, foram avaliadas as respostas imune-humoral e celular de bovinos imunizados com extrato antigênico preparado com larvas de D. hominis. Três grupos de oito bezerras da raça Nelore com 10 meses de idade foram usados, tendo o primeiro grupo (A) recebido aplicação de extrato imunogênico de larvas de D. hominis, com intervalos de quinze dias; o grupo (B), utilizado como controle, não recebendo nenhum tipo de tratamento; e o grupo (C) recebendo o tratamento ectoparasiticida à base de Dichlorvos associado a Cypermetrina. Neste mesmo período, foram avaliados o leucograma e os níveis de IgG contra D. hominis pela técnica de enzimoimunoensaio-ELISA. Quanto à avaliação da imunidade humoral, verificou-se que os animais do grupo A apresentaram maior produção de IgG contra D. hominis, com níveis máximos de anticorpos circulantes aos 45 dias após a primeira imunização. Estes animais também apresentaram maior produção de neutrófilos, eosinófilos e monócitos que os dos grupos B e C. O número de nódulos de larvas encontrado nos animais do grupo C foi 148,3% maior que nos animais dos grupos A e B. A comprovação da resposta imune celular e humoral, parcialmente caracterizadas, bem como a redução do número de nódulos, são indicadores que a imunização contra D. hominis foi parcialmente protetora para os bovinos imunizados.
RESUMO
An indirect ELISA (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY) was developed for searching of antibodies against-Cysticercus bovis in bovine. Three antigens were studied: partial antigen of C. cellulosae, total antigen of C. bovis, and total antigen of C. longicollis. In the standardization of the ELISA the following combinations were analyzed: antigen 250 and 500 ng of protein/well, dilution of the sera 50, 100, 200, and 400 times, dilution of the conjugated (anti bovine -IgG conjugated IgG of goat with peroxidase) 400 and 800 times. The crossing of the conditions above resulted in the following standardization: antigen 250 ng/well, sera and conjugated diluted 100 and 400 times respectively. The reaction cut-off between reagents and non-reagents animals was determined by the average of the optic densities of 54 negative sera plus three standard deviation resulting in the value of 0,303. The reactivity of the three antigens used in the ELISA test was compared using sera from experimentally infected calves, using sera dilutions and conjugated standardized previously. Using the antigen of C. bovis was verified high correlation with the test standardized with C. cellulosae. However, the absorbance values were significantly smaller. With C. longicollis was observed low reactivity, but increasing the amount of antigen, up to 3000ng/well, there was a proportional increase of the response. The kinetics of antibodies anti-C. bovis production was studied in ten calves experimentally infected with 2 x 104 T. saginata eggs. Six non-infected calves were used as control. After 90 days from the infection date, the animals were killed. Thirteen samples of sera of each animal were analyzed. The first was picked in the day of the infection and the remaining at each 15 days. The maximum production of antibody was observed between 30 and 60 days post infection. With the standardized test it was detected antibodies against-C. bovis, in 2 from 20 cattle considerated as non-holder of cyst by the inspection service. These animals could be considered possible cyst holders.
Um teste de ELISA indireto (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY) foi desenvolvido para pesquisa de anticorpos contra-C. bovis em bovinos experimental e naturalmente infectados. Foram estudados três antígenos: antígeno parcial de C. cellulosae, antígeno total de C. bovis e antígeno total de C. longicollis. Na padronização do ELISA foram analisadas as seguintes combinações: antígeno 250 e 500ng de proteína/cavidade, diluição dos soros 50, 100, 200 e 400 vezes, diluição do conjugado (IgG de cabra anti-IgG bovina conjugada com peroxidase) 400 e 800 vezes. Do cruzamento das condições acima resultou a seguinte padronização: antígeno 250ng/cavidade, soro e conjugado diluídos 100 e 400 vezes, respectivamente. O nível de corte (cut-off) da reação entre animais reagentes e não reagentes foi determinado pela média das densidades óticas de 54 soros negativos acrescidas de três desvio-padrão, resultando no valor de 0,303. Através da prova ELISA foram comparadas as reatividades dos antígenos parcial de C. cellulosae, total de C. bovis e total de C. longicollis com soros de bovinos portadores de cisticercose, empregando as diluições de soros e de conjugados padronizados anteriormente. O antígeno de C. bovis mostrou alta correlação com o teste padronizado com C. cellulosae. Entretanto, os valores de absorbância foram sensivelmente menores. Com C. longicollis observou-se reatividade bastante baixa, porém aumentando-se a quantidade de antígeno, até 3000ng/cavidade, houve um aumento proporcional da resposta. Após a padronização do teste foi analisado o comportamento imunológico de bezerros infectados experimentalmente com ovos de Taenia saginata. Dez bezerros foram infetados oralmente com 2 x 104 ovos de T. saginata. Seis bezerros não infetados foram usados como controle. Treze amostras de soro de cada animal foram analisadas. A primeira foi colhida no dia da infecção e o restante, quinzenalmente até o abate. A produção máxima de anticorpos foi observada entre 30 e 60 dias pós-infecção. Depois de 90 dias da infecção os animais foram sacrificados e o número de cistos contados e comparados com a resposta imunológica dos animais. Com o teste padronizado pesquisou-se anticorpos contra-C. bovis, em soros de bovinos considerados não portadores de cisticercos pelo serviço de inspeção e, de 20 amostras de soros analisadas, duas apresentaram valores de absorbância acima do "cut-off" indicando serem portadores de cisticercos .
RESUMO
An indirect ELISA (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY) was developed for searching of antibodies against-Cysticercus bovis in bovine. Three antigens were studied: partial antigen of C. cellulosae, total antigen of C. bovis, and total antigen of C. longicollis. In the standardization of the ELISA the following combinations were analyzed: antigen 250 and 500 ng of protein/well, dilution of the sera 50, 100, 200, and 400 times, dilution of the conjugated (anti bovine -IgG conjugated IgG of goat with peroxidase) 400 and 800 times. The crossing of the conditions above resulted in the following standardization: antigen 250 ng/well, sera and conjugated diluted 100 and 400 times respectively. The reaction cut-off between reagents and non-reagents animals was determined by the average of the optic densities of 54 negative sera plus three standard deviation resulting in the value of 0,303. The reactivity of the three antigens used in the ELISA test was compared using sera from experimentally infected calves, using sera dilutions and conjugated standardized previously. Using the antigen of C. bovis was verified high correlation with the test standardized with C. cellulosae. However, the absorbance values were significantly smaller. With C. longicollis was observed low reactivity, but increasing the amount of antigen, up to 3000ng/well, there was a proportional increase of the response. The kinetics of antibodies anti-C. bovis production was studied in ten calves experimentally infected with 2 x 104 T. saginata eggs. Six non-infected calves were used as control. After 90 days from the infection date, the animals were killed. Thirteen samples of sera of each animal were analyzed. The first was picked in the day of the infection and the remaining at each 15 days. The maximum production of antibody was observed between 30 and 60 days post infection. With the standardized test it was detected antibodies against-C. bovis, in 2 from 20 cattle considerated as non-holder of cyst by the inspection service. These animals could be considered possible cyst holders.
Um teste de ELISA indireto (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY) foi desenvolvido para pesquisa de anticorpos contra-C. bovis em bovinos experimental e naturalmente infectados. Foram estudados três antígenos: antígeno parcial de C. cellulosae, antígeno total de C. bovis e antígeno total de C. longicollis. Na padronização do ELISA foram analisadas as seguintes combinações: antígeno 250 e 500ng de proteína/cavidade, diluição dos soros 50, 100, 200 e 400 vezes, diluição do conjugado (IgG de cabra anti-IgG bovina conjugada com peroxidase) 400 e 800 vezes. Do cruzamento das condições acima resultou a seguinte padronização: antígeno 250ng/cavidade, soro e conjugado diluídos 100 e 400 vezes, respectivamente. O nível de corte (cut-off) da reação entre animais reagentes e não reagentes foi determinado pela média das densidades óticas de 54 soros negativos acrescidas de três desvio-padrão, resultando no valor de 0,303. Através da prova ELISA foram comparadas as reatividades dos antígenos parcial de C. cellulosae, total de C. bovis e total de C. longicollis com soros de bovinos portadores de cisticercose, empregando as diluições de soros e de conjugados padronizados anteriormente. O antígeno de C. bovis mostrou alta correlação com o teste padronizado com C. cellulosae. Entretanto, os valores de absorbância foram sensivelmente menores. Com C. longicollis observou-se reatividade bastante baixa, porém aumentando-se a quantidade de antígeno, até 3000ng/cavidade, houve um aumento proporcional da resposta. Após a padronização do teste foi analisado o comportamento imunológico de bezerros infectados experimentalmente com ovos de Taenia saginata. Dez bezerros foram infetados oralmente com 2 x 104 ovos de T. saginata. Seis bezerros não infetados foram usados como controle. Treze amostras de soro de cada animal foram analisadas. A primeira foi colhida no dia da infecção e o restante, quinzenalmente até o abate. A produção máxima de anticorpos foi observada entre 30 e 60 dias pós-infecção. Depois de 90 dias da infecção os animais foram sacrificados e o número de cistos contados e comparados com a resposta imunológica dos animais. Com o teste padronizado pesquisou-se anticorpos contra-C. bovis, em soros de bovinos considerados não portadores de cisticercos pelo serviço de inspeção e, de 20 amostras de soros analisadas, duas apresentaram valores de absorbância acima do "cut-off" indicando serem portadores de cisticercos .