RESUMO
Three extracts from Saccharomyces cerevisiae were obtained by salting out with ammonium sulfate, these were I-G, EFRL-II-G and III-G. Fraction EFRL-II-G showed the highest photoreactivating activity on DNA str2000 irradiated with far UV light. However, the same fraction did not reactivate DNA str2000 previously inactivated by near UV irradiation. We think that the inactivation by near-UV was not due to photochemically-formed pyrimidine dimers. Decrease in spontaneous mutation frequency of cells transformed with DNA str2000 irradiated with near-UV light, was the same with the DNA treated with active or heat inactivated EFRL-II-G, therefore we may conclude that DNA lesions responsible for the effect are difference to pyrimidine dimers.
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Dano ao DNA , Reparo do DNA , DNA Bacteriano/efeitos da radiação , Haemophilus influenzae/genética , Transformação Bacteriana/efeitos da radiação , Raios Ultravioleta , Desoxirribodipirimidina Fotoliase/isolamento & purificação , Desoxirribodipirimidina Fotoliase/metabolismo , Proteínas Fúngicas/isolamento & purificação , Proteínas Fúngicas/metabolismo , Haemophilus influenzae/efeitos da radiação , Mutagênese , Dímeros de Pirimidina/química , Saccharomyces cerevisiae/enzimologiaRESUMO
Transforming DNA containing the streptomycin resistance marker, was irradiated for 8 h with broad near ultraviolet light (325-400 nm) at pH 4.8, and the inactivation kinetics determined. After selection of streptomycin resistant transformants, they were grown until a turbidity of 150-200 Klett units. In these cultures we looked for new markers coming from the irradiated transforming DNA. We looked and found the novobiocin resistance marker and one that conveys to protoporphyrin IX utilization, measured as an increase in the mutation frequency of these markers in the streptomycin resistant population. In other experiments, we found a decline in spontaneous mutation frequency for the same markers in the cells transformed with irradiated DNA. This last finding rises the possibility of alterations on the mutator genes as a result of near ultraviolet irradiation.
Assuntos
DNA Bacteriano/efeitos da radiação , Haemophilus influenzae/genética , Mutação , Transformação Bacteriana , Raios Ultravioleta , Dano ao DNA , Reparo do DNA , DNA Bacteriano/genética , Resistência Microbiana a Medicamentos/genética , Haemophilus influenzae/efeitos dos fármacos , Haemophilus influenzae/metabolismo , Novobiocina/farmacologia , Protoporfirinas/metabolismo , Estreptomicina/farmacologiaRESUMO
La irradiación con luz ultravioleta a - 70-C de DNA transformante desnaturalizado, el cual fue posteriormente sonicado y renaturalizado con DNA no irradiado, así como el DNA no irradiado y sometido a los otros tratamientos, provocaron un fuerte efecto letal sobre H. influenzae, el cual fue detecto al efectuarse la cuenta viable de las mezclas de transformación, encontrándose la disminución de la viabilidad de las células de un 98% para el caso del DNA irradiado y de un 97.2% para el DNA sin irradiar. Pensamos que la letalidad pueda deberse, tanto a la integración al genóforo de la célula receptora de los marcadores letales provados por la luz UV, como a la activación de un fago defectuoso causada por la penetración del DNA transformante irradiado o no con luz UV. La irradiación con luz UV del DNA transformante desnaturalizado, el cual fue renaturalizado consifo mismo, hizo aumentar ligeramente el número de mutantes resistentes a Kanamicina en células competentes de H. influenzae. Al someterse a lisis sónica del DNA irradiado, antes de renaturalizarse con DNA no irradiado, el resultaod obtenido fue aproximadamente el mismo que en el caso anterior. Sin embargo, cuando el número de mutantes resistentes a novobiocina se corrigió por la cuenta viable de la mezcla de transformación y el efecto mutagenético se cuantificó con relación a las frecuencias de mutación, encontramos un aumento de dichas frecuencias de 74 veces respecto a los testigos de células no tratadas con DNA. Este efecto puede, en principio, deberse a la integración en el genoma receptor de las lesiones mutagenéticas causadas por la irradiación con luz UV a - 70-C del DNA transformante, mas la afirmación concluyente de esto, requerirá la demostración de que dicha integración se lleva a cabo. Proponemos que estas lesiones mutagenéticas pudieran ser del tipo 5-timinil-5, 6-dihidrotimina. Fue interesante que del SNA no irradiado con luz UV, provocara también un aumento aunque menor al producido por el DNA irradiado, de las frecuencias de mutación. La explicación de este hecho, necesitará de un análisis experimental detallado posterior, utilizando mutantes rec y uvr de H. influenzae
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Haemophilus influenzae , Técnicas In Vitro , Células , DNA , Resistência a Canamicina , Mutação , Novobiocina , FotoquimioterapiaAssuntos
DNA Bacteriano/efeitos da radiação , Haemophilus influenzae/genética , Transformação Bacteriana/efeitos da radiação , Dano ao DNA , DNA Bacteriano/genética , Congelamento , Marcadores Genéticos , Desnaturação de Ácido Nucleico , Dímeros de Pirimidina/genética , Recombinação Genética , Raios UltravioletaRESUMO
Las temperaturas de 45, 47, 50 y 55-C mostraron un efecto letal sobre H. influenzae, siendo más acentuado cuando se calentó en un medio sintético que en extracto cerebro-corazón. A 45 y 47-C fue muy notable un "hombro" de resistencia a tiempos cortos de calentamiento. Se observaron dos pendientes de letalidad, lo cual sugiere dos mecanismos de inactivación por el calor y la presencia de procesos reparativos en la célula. La incubación a 37-C en extracto cerebro corazón de células previamente inactivadas a 45 ó 47-C produjo una reversión del efecto letal. La curva de inactivación a 45-C mostró tres zonas el "hombro" inicial de resistencia, en seguida la fase exponencial de inactivación y finalmente otra zona de resistencia entre los 10 y 30 minutos de tratamiento. Esta última zona sugiere la presencia de una mutante termoresistente. Todos los datos anteriores sugieren al ácido desoxirribonucleico como uno de los blancos importantes al tratar a Haemophilus influenzae con el calor
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Temperatura Alta , Meios de CulturaAssuntos
DNA Bacteriano/genética , Marcadores Genéticos/efeitos da radiação , Haemophilus influenzae/genética , Transformação Bacteriana/efeitos da radiação , Raios Ultravioleta , Aerobiose , Anaerobiose , DNA Bacteriano/efeitos da radiação , Testes de Mutagenicidade , Novobiocina/farmacologia , Estreptomicina/farmacologiaAssuntos
DNA Bacteriano/efeitos da radiação , Haemophilus influenzae/genética , Nitritos/farmacologia , Ácido Nitroso/farmacologia , Transformação Genética , Haemophilus influenzae/efeitos dos fármacos , Haemophilus influenzae/efeitos da radiação , Desnaturação de Ácido Nucleico , Transformação Genética/efeitos dos fármacos , Transformação Genética/efeitos da radiação , Raios UltravioletaRESUMO
La luz cercana al ultravioleta (325-420nm) por meio de un efecto independiente del oxigeno, origino una disminucion de la actividad transformante del DNA de H. Influenzae libre de factores fotodinamicos celulares. Dicha disminucion no fue acompanada de gran variacion en el contenido de bases, en comparacion con la muestra de DNA no iluminado. En los hidrolizados de los DNAs aparecio un componente posiblemente nuevo que absorbio luz ultravioleta