RESUMO
Between November 2017 and August 2018, in order to determine the occurrence of tuberculosis in cattle slaughtered in the semi-arid region of Rio Grande do Norte, 11,610 bovine carcasses underwent a routine post-mortem inspection. One animal presented suggestive lesions and samples from lung, spleen and heart were submitted to microbiological culture in Stonebrink medium for 90 days and molecular analysis by nested-PCR. For histopathological examination and Ziehl Neelsen staining, the omentum was used. In the cultured samples, two of them (heart and spleen) showed growth, but were not confirmed as M. bovis by conventional PCR. At nested-PCR, the samples showed amplification for the TbD1 region. The presence of numerous granulomas was detected in the histopathological examination characterized by anecrotic center and areas of mineralization, as well as the presence of acid-fast bacilli (AFB) in the Ziehl Neelsen stain. Microbiological culture can show false negative results, despite being considered a gold standard technique, although it takes time. Nested-PCR and histopathology show fast and effective results for the diagnosis of the disease. The presence of positive animals represents a public health risk in the studied region. Therefore, one of the essential systems applied to the control of bovine tuberculosis is the epidemiological surveillance of animals in slaughterhouses.
Entre novembro de 2017 e agosto de 2018, com objetivo de determinar a ocorrência de tuberculose em bovinos abatidos no semiárido do Rio Grande do Norte, 11.610 carcaças de bovinos passaram por inspeção post-mortem de rotina. Um animal apresentou lesões sugestivas e amostras de pulmão, baço e coração foram submetidas ao cultivo microbiológico em meio Stonebrink por 90 dias e análise molecular pela nested-PCR. O omento foi utilizado para exame histopatológico e coloração de Ziehl Neelsen. Nas amostras cultivadas, duas (coração e baço) evidenciaram crescimento, mas M. bovis não foi confirmado na PCR convencional. Já na nested-PCR, as amostras exibiram amplificação para a região TbD1. Foi detectada a presença de inúmeros granulomas no exame histopatológico caracterizados por possuírem um centro necrótico e áreas de mineralização, bem como a presença de bacilos Álcool-ácido resistentes (BAAR)na coloração de Ziehl-Neelsen. A cultura microbiológica pode apresentar resultados falso-negativos, apesar de ser considerada uma técnica padrão-ouro, embora demorada. A nested-PCR e a histopatologia apresentam resultados rápidos e eficazes para o diagnóstico da enfermidade. A presença de animais positivos representa um risco a saúde pública na região estudada. Portanto, um dos sistemas essenciais aplicados ao controle da tuberculose bovina é a vigilância epidemiológica dos animais em abatedouros.
Assuntos
Animais , Bovinos , Doenças dos Bovinos/diagnóstico , Infecções por Mycobacterium/diagnóstico , Infecções por Mycobacterium/veterinária , Tuberculose/diagnóstico , Tuberculose/veterináriaRESUMO
Between November 2017 and August 2018, in order to determine the occurrence of tuberculosis in cattle slaughtered in the semi-arid region of Rio Grande do Norte, 11,610 bovine carcasses underwent a routine post-mortem inspection. One animal presented suggestive lesions and samples from lung, spleen and heart were submitted to microbiological culture in Stonebrink medium for 90 days and molecular analysis by nested-PCR. For histopathological examination and Ziehl Neelsen staining, the omentum was used. In the cultured samples, two of them (heart and spleen) showed growth, but were not confirmed as M. bovis by conventional PCR. At nested-PCR, the samples showed amplification for the TbD1 region. The presence of numerous granulomas was detected in the histopathological examination characterized by anecrotic center and areas of mineralization, as well as the presence of acid-fast bacilli (AFB) in the Ziehl Neelsen stain. Microbiological culture can show false negative results, despite being considered a gold standard technique, although it takes time. Nested-PCR and histopathology show fast and effective results for the diagnosis of the disease. The presence of positive animals represents a public health risk in the studied region. Therefore, one of the essential systems applied to the control of bovine tuberculosis is the epidemiological surveillance of animals in slaughterhouses.(AU)
Entre novembro de 2017 e agosto de 2018, com objetivo de determinar a ocorrência de tuberculose em bovinos abatidos no semiárido do Rio Grande do Norte, 11.610 carcaças de bovinos passaram por inspeção post-mortem de rotina. Um animal apresentou lesões sugestivas e amostras de pulmão, baço e coração foram submetidas ao cultivo microbiológico em meio Stonebrink por 90 dias e análise molecular pela nested-PCR. O omento foi utilizado para exame histopatológico e coloração de Ziehl Neelsen. Nas amostras cultivadas, duas (coração e baço) evidenciaram crescimento, mas M. bovis não foi confirmado na PCR convencional. Já na nested-PCR, as amostras exibiram amplificação para a região TbD1. Foi detectada a presença de inúmeros granulomas no exame histopatológico caracterizados por possuírem um centro necrótico e áreas de mineralização, bem como a presença de bacilos Álcool-ácido resistentes (BAAR)na coloração de Ziehl-Neelsen. A cultura microbiológica pode apresentar resultados falso-negativos, apesar de ser considerada uma técnica padrão-ouro, embora demorada. A nested-PCR e a histopatologia apresentam resultados rápidos e eficazes para o diagnóstico da enfermidade. A presença de animais positivos representa um risco a saúde pública na região estudada. Portanto, um dos sistemas essenciais aplicados ao controle da tuberculose bovina é a vigilância epidemiológica dos animais em abatedouros.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Doenças dos Bovinos/diagnóstico , Tuberculose/diagnóstico , Tuberculose/veterinária , Infecções por Mycobacterium/diagnóstico , Infecções por Mycobacterium/veterináriaRESUMO
The aim of the present study was to detect and identify Mycobaterium spp. in 50 samples of coalho cheese sold in the Northeast region of Brazil. Of the 50 analyzed samples, 35 were produced by the artisanal process, using raw milk, and 15 originated from industrialized establishments that pasteurize milk. Conventional and real-time nested PCR for the rv2807 gene of the M. tuberculosis complex was performed directly from the 50 analyzed samples. Samples of coalho cheese were grown simultaneously in Stonebrink medium, and conventional PCR was performed from the bacterial isolates with primers that flank differentiation region 4 (DR4), specific to M. bovis, mb400F. Bacterial isolates negative by PCR for RD4 were subjected to PCR for hsp65 of Mycobacterium spp., with subsequent DNA sequencing. The cultures were negative for the M. tuberculosis complex, but two samples (4%) from the artisanal process (with raw milk) exhibited identity with hsp65 of Mycobacterium lehmanii (Sequence ID: KY933786.1, identities: 312/363 [86%]); and Mycobacterium rutilum (sequence ID: LT629971.1, identities: 331/371 [89%]), showing to be indicative environmental contamination. Non-tuberculous mycobacteria are emergent and ubiquitous microorganisms; therefore, they deserve greater attention in the cheese production chain, both in terms of Good Agricultural Practices (GAP)
O presente estudo teve como objetivo detectar e identificar Mycobaterium spp. em 50 amostras de queijo de coalho comercializados na região Nordeste do Brasil. Das 50 amostras analisadas, 35 foram produzidas pelo processo artesanal, com leite cru e 15 provenientes de estabelecimentos industrializados que realizam a pasteurização do leite. Nested-PCR convencional e em tempo real para o gene rv2807 do Complexo M. tuberculosis foi realizada diretamente das cinquenta amostras analisadas. Paralelamente, as amostras de queijo de coalho foram cultivadas em meio de Stonebrink e dos isolados bacterianos foi realizada PCR convencional com iniciadores que flanqueiam a região de diferenciação 4 (RD4), específica de M. bovis, mb400F. Os isolados bacterianos negativos na PCR para RD4 foram submetidos à PCR para hsp65 de Mycobacterium spp., com posterior sequenciamento do DNA. As culturas mostraram-se negativas para o Complexo M. tuberculosis, porém duas amostras oriundas do processo artesanal (com leite cru) (4%) apresentaram identidade com hsp65 de Mycobacterium lehmanii (ID da sequência: KY933786.1, identidades: 312/363 [86%]); e Mycobacterium rutilum (ID da sequência: LT629971.1, identidades: 331/371 [89%]), apontando-se como indicativos de contaminação ambiental. As micobactérias-não-tuberculosas (MNT) são microrganismos emergentes e de natureza ubíqua. Devido a essas características merecem maior atenção na cadeia produtiva de queijos, tanto nas boas práticas agropecuárias (BPAs) quanto nas boas práticas de fabricação de alimentos (BPFs).
Assuntos
Infecções por Mycobacterium/diagnóstico , Mycobacterium/classificação , Padrão de Identidade e Qualidade para Produtos e Serviços , Queijo/economia , Queijo/microbiologiaRESUMO
The aim of the present study was to detect and identify Mycobaterium spp. in 50 samples of coalho cheese sold in the Northeast region of Brazil. Of the 50 analyzed samples, 35 were produced by the artisanal process, using raw milk, and 15 originated from industrialized establishments that pasteurize milk. Conventional and real-time nested PCR for the rv2807 gene of the M. tuberculosis complex was performed directly from the 50 analyzed samples. Samples of coalho cheese were grown simultaneously in Stonebrink medium, and conventional PCR was performed from the bacterial isolates with primers that flank differentiation region 4 (DR4), specific to M. bovis, mb400F. Bacterial isolates negative by PCR for RD4 were subjected to PCR for hsp65 of Mycobacterium spp., with subsequent DNA sequencing. The cultures were negative for the M. tuberculosis complex, but two samples (4%) from the artisanal process (with raw milk) exhibited identity with hsp65 of Mycobacterium lehmanii (Sequence ID: KY933786.1, identities: 312/363 [86%]); and Mycobacterium rutilum (sequence ID: LT629971.1, identities: 331/371 [89%]), showing to be indicative environmental contamination. Non-tuberculous mycobacteria are emergent and ubiquitous microorganisms; therefore, they deserve greater attention in the cheese production chain, both in terms of Good Agricultural Practices (GAP)(AU)
O presente estudo teve como objetivo detectar e identificar Mycobaterium spp. em 50 amostras de queijo de coalho comercializados na região Nordeste do Brasil. Das 50 amostras analisadas, 35 foram produzidas pelo processo artesanal, com leite cru e 15 provenientes de estabelecimentos industrializados que realizam a pasteurização do leite. Nested-PCR convencional e em tempo real para o gene rv2807 do Complexo M. tuberculosis foi realizada diretamente das cinquenta amostras analisadas. Paralelamente, as amostras de queijo de coalho foram cultivadas em meio de Stonebrink e dos isolados bacterianos foi realizada PCR convencional com iniciadores que flanqueiam a região de diferenciação 4 (RD4), específica de M. bovis, mb400F. Os isolados bacterianos negativos na PCR para RD4 foram submetidos à PCR para hsp65 de Mycobacterium spp., com posterior sequenciamento do DNA. As culturas mostraram-se negativas para o Complexo M. tuberculosis, porém duas amostras oriundas do processo artesanal (com leite cru) (4%) apresentaram identidade com hsp65 de Mycobacterium lehmanii (ID da sequência: KY933786.1, identidades: 312/363 [86%]); e Mycobacterium rutilum (ID da sequência: LT629971.1, identidades: 331/371 [89%]), apontando-se como indicativos de contaminação ambiental. As micobactérias-não-tuberculosas (MNT) são microrganismos emergentes e de natureza ubíqua. Devido a essas características merecem maior atenção na cadeia produtiva de queijos, tanto nas boas práticas agropecuárias (BPAs) quanto nas boas práticas de fabricação de alimentos (BPFs).(AU)