RESUMO
Os tumores de pele são os tipos de cânceres mais comuns, sendo que os melanomas são a principal causa de morte entre eles. A progressão do câncer envolve a capacidade das células tumorais de comunicarem-se com seu microambiente. Esta comunicação pode ocorrer através de vesículas extracelulares (EVs), capazes de participar na transferência horizontal de proteínas de sinalização, RNAs (mRNAs, microRNAs e outros non-coding RNAs) e outras moléculas entre as células tumorais e as células do microambiente tumoral contribuindo para o processo de progressão tumoral. É sabido que tumores primários secretam EVs que atuam sobre progenitores hematopoiéticos da medula óssea. Sob a ação dessas EVs, populações específicas da medula óssea são dirigidas aos futuros sítios de formação de metástases (sítio pré-metastático). Entre os tipos mais importantes de EVs secretadas pelas células estão os exossomos. Diversas proteínas da via endocítica estão envolvidas no processo de formação, composição e secreção das EVs (dos exossomos em particular) e podem estar correlacionadas às características patológicas e clínicas dos tumores. O presente projeto teve como objetivo avaliar proteínas associadas à formação e secreção de exossomos, TRP2, Rab27a e Rab27b em tecidos de melanomas humanos, quantificar EVs no plasma destes pacientes e determinar os níveis da co-chaperona STI1/HOP nestas EVs. Estas variáveis experimentais foram comparadas entre si e sua correlação com a progressão tumoral foi avaliada. Os resultados apontaram que as proteínas Rab27a, Rab27b e TRP2 apresentam uma maior expressão em melanomas metastáticos (estádios III e IV) quando comparados a não metastáticos (estádios in situ, I e II). A quantificação das EVs, bem como seu conteúdo proteico total, não mostrou diferenças entre os diversos estadios tumorais. Desta forma, não foi encontrada correlação entre a expressão das 3 proteínas (Rab27a, Rab27b e TRP2) e a concentração de EVs do plasma. As EVs circulantes no plasma dos pacientes com melanoma em estadios mais avançados apresentaram um aumento na concentração de STI1/HOP quando comparadas aquelas provenientes do plasma de pacientes portadores de melanomas em estádios mais precoces. Juntos estes resultados sugerem um papel para as proteínas relacionadas as vias de biogênese e secreção de exosomos na progressão do melanoma e que a ST1/HOP contida nas EVs circulantes no plasma pode ter um papel no microambiente e na progressão tumoral. Metodologias mais adequadas devem ser desenvolvidas para isolamento de EVs tumorais do pool de EVs do plasma, uma vez que a presença de marcadores específicos presentes nas EVs derivadas das células tumorais podem estar mascarados.
Skin cancers are the most common type of cancer, and among them melanoma is the major cause of death. Tumor progression involves the ability of tumor cells to communicate with the microenvironment. This communication can occur through extracellular vesicles (EVs) which are able to participate in the horizontal transfer of proteins, RNAs (mRNAs, microRNAs and other non-coding RNAs) and other molecules between tumor cells and cells from the microenvironment, thus interfering with the tumor progression. It is well known that primary tumors secrete EVs that act over hematopoietic progenitors from bone marrow. Under the effect of these EVs, specific cell populations from the bone marrow are send to the future metastasis site (pre-metastatic niche). Exosomes are among the most important types of EVs.. Several proteins from endocytic pathway are involved in the process of formation, packing and secretion of the exosomes) and can be correlated to the pathological and clinical characteristics of the tumors. The aim of this project was evaluate the proteins associated with the formation and secretion of exosomes, TRP2, Rab27a and Rab27b in tumor tissues from patients with melanoma, to quantify the EVs at the plasma of these patients and to determine the protein levels of the co-chaperonin STI1/HOP within these EVs. These experimental variables were compared and their correlation with the tumor progression was evaluated. Results showed that Rab27a, Rab27b and TRP2 presented higher expression in metastatic melanoma (stage III and IV) when compared to the non-metastatic melanomas (stage in situ, I and II). The quantification of the EVs, as well as their total protein content did not point differences between tumor stages. Moreover, no correlation was found between the expression of the 3 proteins (Rab27a, Rab27b and TRP2) and the concentration of EVs in the plasma. On the other hand, EVs isolated from the plasma of patients with more advanced stages of melanoma contain higher concentrations of STI1/HOP when compared to ones from the plasma of patients with early stages of the disease. Together, these data suggest that tumor expression of proteins related to biogenesis and secretion of exosomes may participate in melanoma progression. In addition, STI1/HOP within EVs can have a role in tumor microenvironment and melanoma progression. Methodologies that are more adequate must be developed to allow the isolation of tumor-derived exosomes from the pool of plasma EVs, since specific markers present in the former EVs may be masked.