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Replication timing of allelic gene pairs is strictly regulated according to expression, genome stability, and epigenetic changes, and tumorigenesis may be associated with changes in the allelic replication in various tumors. Our aim was to determine whether such alterations had a prognostic value in Ewing's family tumor (EFT) patients. The KIF14 and MDM4 / PI3KC 2ß and the centromeric satellite sequence of chromosomes 8 and 12 were used for replication timing assessments. Aneuploidy was assessed by enumerating the copy numbers of chromosomes 8 and 12. Replication timing and aneuploidy were detected cytogenetically using multicolors fluorescence in situ hybridization assay applied in 135 EFT. Patients with trisomy 8 presented an association with an asynchronous replication pattern (SD) of MDM4 / PI3KC 2ß genes ( p = 0.013). Trisomy 12 was associated with a synchronous pattern (DD) of KIF14 probe signals ( p = 0.04). The DD synchronous replication pattern of KIF14 showed a correlation with age ( p < 0.0001), and the SS synchronous replication pattern of the same locus showed a correlation with lung metastatic ( p = 0.012). The subgroup of patients presenting with multiplet signals of MDM4 / PI3KC 2ß showed an association with treatment response ( p = 0.045) and age ( p = 0.033). Replication pattern of KIF14 may, significantly, be associated with chromosomal instability as MDM4 / PI3KC 2ß may be a considerably new marker of poor treatment response in EFT patients.

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Introdução: A fusão EWS-ETS é um evento genético envolvido na patogênesis dos tumores de Ewing (TE); entretanto, a progressão dessa doença é devido à adição de outras alterações genéticas. Objetivo: Analisar o impacto prognóstico de regiões genéticas específicas em um série de pacientes com TE. Material e Métodos: Através de análises in silico usando o banco de dados Progenetix, os cromossomos 7, 8 e 12 e as regiões 1q e 16q foram identificadas como alterações genéticas mais recorrentes na progressão de TE, mas sem consistência quanto ao prognóstico. Lâminas de TMA, incluindo 132 pacientes com TE do Hopsital A.C. Camargo, foram construídas para análises de alterações no número de cópias gênicas (ANC) dos cromossomos 7, 8 12 e regiões 1q32.1 (KIF14/MDM4/PIK3C2B/DDX59) e 16q21 (CDH11), por hidridação por fluorescência in situ em núcleos interfásicos (iFISH). Essas análises foram feitas através da construção de sondas caseiras (BAC) (laboratório de citogenética molecular, Canadá) para as regiões 1q32.1 e 16q21 e através de sondas comerciais de centrômeros 7, 8 e 12. Ao final, a frequência de ANC foram correlacionadas com as características clínico-patológicas e sobrevida dos pacientes. Resultados: Análises de ANC mostraram ganhos em 1q32.1 em 15/121 (12.4%) pacientes. Anormalidades em 16q21 foram vistas em 24/115 (20.9%) pacientes: um grupo com 11/115 (9.6%) pacientes apresentaram deleções por hemizigose, e o outro, 13/115 (11.3%) pacientes apresentaram ganhos em 16q21. Aneussomias dos cromossomos 7, 8 e 12 foram vistas em 9.7%, 21.8% e 14.5%, respectivamente. Análises univariadas mostraram associação entre ganhos de 16q21 (p=0.029) ou 1q32.1 (p=0.005) e recorrência da doença em pacientes portadores de TE com doença localizada. As curvas de sobrevida global mostraram ganhos em 16q21 como prognóstico desfavorável (p=0.04) para doença localizada. ...

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UNLABELLED: We associated clinical-pathological features of 142 OSCC with the expression pattern of GLUT1 and GLUT3 in order to estimate their prognostic value. METHODS: Clinical-pathological features and overall survival data of 142 patients with Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) were retrospectively reviewed from A.C.Camargo hospital records. A tissue microarray (TMA) was built for the immunohistochemical (IHC) analysis of GLUT 1 and GLUT 3. IHC results were evaluated according to the staining pattern and number of positive cells. RESULTS: GLUT 1 was over expressed in 50.3% of OSSC cases showing membrane staining pattern. However, nuclear expression was observed in 49.7% of the analyzed cases. GLUT 3 over expression was detected in 21.1% of OSCC cases. The pattern of GLUT 1 expression showed significant association with alcohol consumption (p = 0.004). Positive cell membrane GLUT 3 protein expression was associated with advanced clinic-staging of tumours (p = 0.005) as well as with vascular embolization (p = 0.005). Positive expression of GLUT 3 was associated with unfavorable free-disease survival (p = 0.021). CONCLUSION: GLUT1 and GLUT3 protein expression evaluated by immunohistochemistry are, significantly, indicators of poor prognosis outcome in oral squamous cell carcinoma, probably due to the enhanced glycolytic metabolism of more aggressive neoplastic cells.

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Introdução: Uma das características comuns em neoplasias humanas é o aumento do metabolismo glicolítico que serve para que as células neoplásicas se multipliquem. Entre os mecanismos que contribuem para esse fenótipo glicolítco, a expressão das proteínas transportadoras de glicose, especialmente a GLUT-1 e GLUT-3, têm sido encontrada em uma variedade de tumores, incluindo CECP e ovário. Recentemente, a avaliação do metabolismo glicolítico em tumores através do exame de imagem FDG-Pet Scan tem sido usada para identificar tumores particularmente agressivos. O objetivo desse estudo foi analisar a expressão dessas proteínas envolvidas na captação de glicose pela célula, verificar a sua influência nos resultados de Pet Scan e sua associação com variáveis clínico-patológicas e sobrevida dos pacientes portadores de CECP oral. Métodos: As análises retrospectivas da expressão de GLUT-1 e GLUT-3 foram avaliadas em dois grupos distintos de pacientes. O primeiro deles foram àqueles reconhecidos a partir do Departamento de Imagem, Setor de Medicina Nuclear, Hospital A C Camargo, 30 casos de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço e 24 casos de neoplasia ovariana. O segundo foi a partir de série retrospectiva de pacientes portadores de CECP de boca, oriundos do Departamento de Cirurgia de Cabeça e Pescoço do mesmo hospital. Para o primeiro grupo de pacientes foram feitas análises imunoistoquímicas em lâminas convencionais. Para o segundo grupo, confeccionou-se um tissue micro array (TMA) a partir de 151 casos de CECP levantados de nossos arquivos. Esses últimos casos foram analisados em duplicata, contendo 302 cilindros. A análise imunoistoquímica foi realizada pela técnica da estreptavidina-biotina peroxidase. As análises do TMA foram feitas baseadas no local da marcação das células e na quantidade de células positivas. A freqüência de células marcadas foi classificada baseado no nível de corte de 85% de células positivas para o biomarcador. Nos casos de corte convencional, a análise foi baseada num sistema de escore definido pelo produto da intensidade da reação e número de células positivas. Para as análises de associação entre as variáveis consideradas, verificou-se os métodos de &*61539;2 ou teste exato de Fisher. Para as análises de sobrevida global, o cálculo foi realizado pela técnica de Kaplan-Meier e as comparações entre as curvas de sobrevida, pelo teste de Log-rank. A análise multivariada foi feita pelo modelo de riscos proporcionais de Cox. Foi considerado o nível de significância de 5%. Resultados: Nossos resultados em relação ao primeiro grupo de pacientes aqui estudados, mostraram uma expressão positiva para GLUT-1 (91,7%) na membrana das células de tumores CECP. E 16,7% de expressão positiva para GLUT-3 na membrana das células desse tumor. Os resultados mostraram uma boa concordância entre a proteína GLUT-1 e os achados desse exame de imagem. Em relação à proteína GLUT-3, houve uma fraca correspondência. Para os pacientes portadores de neoplasia ovariana, encontramos GLUT-1 expressa na membrana das células (87%). Para a proteína GLUT-3, foi 21,7% de expressão positiva na membrana das células. Houve boa relação entre a proteína GLUT-1 e os resultados do Pet Scan. A proteína GLUT-3, mostrou uma fraca relação com o Pet Scan. Para os pacientes analisados através da técnica de TMA, mostraram uma associação significativamente positiva entre a expressão do padrão de GLUT-1 com o gênero do paciente (p=0,017), consumo de álcool (p=0,004). Nenhuma associação da expressão padrão de GLUT-1 com o estadiamento clínico foi encontrada, nem com a embolização vascular. Foi observada a existência de associação significativa negativamente entre a expressão de GLUT-3 e o estadiamento clínico (p=0,005) e com a embolização vascular (p=0,005). Em relação ao número de células marcadas, foi observada uma forte associação significativa entre GLUT-1 e o gênero do paciente (p=0,001), estadiamento clínico (p=0,028). Não foi observada qualquer associação significativa com a embolização vascular. Houve uma tendência de associação entre a expressão de GLUT-1 e GLUT-3 (p=0,059). Em relação à sobrevida global, foi observada uma associação significativa com a expressão de padrão agrupado (M e MN/N) (p=0,015) e estratificado de GLUT-1(p=0,041) e também com a proteína GLUT-3 (p=0,002). Foi observada uma associação significativa entre a sobrevida livre de doença e a expressão da proteína GLUT-3 (p=0,021). Pela análise multivariada, observou-se que o estadiamento clínico (p=0,006) permaneceu como fator de prognóstico independente para recorrência. A embolização vascular (p=0,003), a expressão de GLUT-1 (M e MN/N) (p=0,006) e a expressão de GLUT-3 (p=0,018) permaneceram como fatores prognósticos independentes para óbito. Conclusão: No presente trabalho, verificamos que o exame de Pet Scan independe da expressão de GLUT-1 e GLUT-3 para a detecção de carcinomas da cabeça e pescoço e de ovário. Em CECP bucal, a presença da expressão nuclear de GLUT-1 se associa com o maior consumo de álcool e pior sobrevida global. A presença da expressão de GLUT-1 ocorre mais freqüentemente em carcinoma epidermóide da boca do que GLUT-3. Pela detecção imunoistquímica de GLUT-3 e através das análises estatísticas, tanto univariada quanto multivariada, ele é um fator de pior sobrevida global assim como GLUT-1 e embolização vascular.

Background: Increased glycolitic metabolism has been established as a characteristic of malignant cells. Among the mecanisms that contribute to the glycolytic phenotype, overexpression of glucose transporters, and especially of GLUT-1 and GLUT-3, has been reported for a large variety of tumors, including squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN) and ovary. Recently, the clinic introduction of positron emission tomography (FDG-PET) provided a means for a noninvasive quantitative assessment of tumor glucose metabolism in vivo. It has been used to identify aggressive tumors. This study was designed initially to measure GLUT-1 and GLUT-3 expression with immunologic techniques involved in the upatke cell glucose in archival specimens of SCCHN and ovary cancer, verifying their influence in the Pet Sacn findings. Also, to study the association with clinicopathological features and survival of the oral SCC patients. Methods: The retrospective anlyses of the GLUT-1 and GLUT-3 expressions were evaluated in two distints groups of patients. The first one, were specimens retrieved from the Image Department of Nuclear Medicine, A C Camargo Hospital, 30 cases of SCCHN and 24 cases of ovarian cancer. The second one, were specimens retrieved from the pathology archives with oral SCC (OSCC), obtened from the Head and Neck Department from the same hospital. For the first group, was submited immunohistochemical analysis in conventional slides. For the second group, was made the tissue micro array (TMA) from 151 cases of oral SCC from our archives. These were analysed in duplicate, incluing 302 cores. The immunohistochemical analysis were achieved by avidin-biotin technique. The criteria for analysis for TMA were based on site of the immunostaning in the cells and also in the frequency of 85% of the positive cells. According to analysis of conventional slides, was based on a score system defined by the product of intensity and frequency of positive cells. Statistical analyses were performed using chi-square or Fisher's tests. Survival curves were constructed according to the method of Kaplan-Meier. For diferences between curves, the P value was calculated using the long rank test. A P value of <0.05 was considered statistically significant. A multivariate COX regression analysis was performed to assess the prognostic significance of different staining patterns and their relationship with other pathological variables. Results: In the first group of patients, 91,7% of the cases were GLUT-1 overexpression in the cell membrane of SCCHN. The positive GLUT-3 expression was seen in 16,7% of the patients in the cell membrane of this tumor. Their relationship with Pet Scan findings in SCCHN, showed a good concordance between GLUT-1. Unlike GLUT-1 protein, the GLUT-3 protein showed low relation with Pet Scan exam. Additionaly, the patients that exhibited ovary cancer were closely related to GLUT-1 overexpression in the membrane of the cells (87%). The GLUT-3 expression was found a low positivity in the membrane of the cells (21,7%). In relation to Pet Scan findings, it was found a good correspondance with GLUT-1. A weak relation was found with GLUT-3 expression and Pet Scan. For the second group of patients, analysed by TMA technique: the pattern of GLUT-1 expression showed significant association with patients gender (p=0,017), showing a strong association with male sex (p=0,008) and alcohol consumption (p=0,004), when in group of pattern expression (M e MN/M) (p=0,042). No statistical association was found neither between GLUT-1 expression and clinical staging, nor vascular embolization. Although, the patients with positive expression of GLUT-3 expression showed negative significance statistical between clinical staging (p=0,005) and vascular embolization (p=0,005). In relation to the proportion of positive cells, was observed a strong association between GLUT-1 and patients gender as well as clinical staging (p=0,028). No statistical association was found between GLUT-1 expression and vascular embolization. There was not significant association between GLUT-1 and GLUT-3 expression, although showed trends to significance. Besides, there was an association between overall survival and GLUT-1 (M e MN/N) (p=0,015), and stratified group (p= 0,041), and also with GLUT-3 (p=0,002). The positive expression of GLUT-3 was associated with free disease survival (p=0,021). In multivariated analysis, only the clinical staging (p=0,006), persisted as independent prognostic marker of relapse. The vascular embolization (p=0,003), GLUT-1 expression (M e MN/N) (p=0,006) and GLUT-3 expression (p=0,018) remaining as independent prognostic markers of overall survival. Conlusion: In the present study, we observed that the detection of recurrent tumor by Pet Scan in SCCHN and ovary cancer no needing of GLUT-1 and GLUT-3 expression. According to our data, the nuclear expression patterns of GLUT-1 is associated with the major alcohol consumption and poor survival as well as GLUT-3 positive expression is a factor of free disease survival, which could be useful prognostic markers. We also demonstrated that the presence of GLUT-1 overexpression occurs more frequently in OSCC than GLUT-3. Furthermore, other clinicopathological parameters like clinical staging indicated that vascular embolization as well as GLUT-1 expression patterns and GLUT-3 expression to be potentials prognostic factors to death that it was noticed by the multivariated analysis.

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