RESUMO
A shoot regeneration system for Plectranthus neochilus was studied from leaf explants. Leaves developed under in vitro conditions were cultured on Wood Plant Medium supplemented with 0.2mg dm-3 -naphthaleneacetic acid (NAA) and different 6-benzilaminopurine (BAP) or thidiazuron (TDZ) concentrations (0, 1.5, 3.0, 4.5 and 6.0mg dm-3). An increase in percentage of responsive explants (85.3%) and in the number of shoots developed per explant (3.2) was observed when the explants were treated with 5.3 and 4.7mg dm-3 BAP, respectively. The leaf explants cultured on media supplemented with TDZ became vitreous and did not form buds. The regeneration system used is efficient for boldo bud induction and shoot development, showing high potential for advanced cellular and molecular studies.
O objetivo do presente trabalho foi adequar um protocolo de regeneração a partir de explantes foliares de Plectranthus neochilus. Folhas desenvolvidas sob condições in vitro foram cultivadas em meio WPM suplementado com 0,2mg L-1 de ácido -naftaleno acético (ANA) e diferentes concentrações (0; 1,5; 3,0; 4,5 e 6,0mg L-1) de 6-benzilaminopurina (BAP) ou thidiazuron (TDZ). Observou-se o aumento na percentagem de explantes regenerantes (85,3%) e no número de brotações por explante (3,2), quando os explantes foliares foram cultivados em meio contendo 5,3 e 4,7mg L-1 de BAP, respectivamente. Os explantes foliares cultivados em TDZ tornaram-se vítreos e não formaram gemas. O protocolo utilizado é eficiente para a indução de gemas e brotações, demonstrando a potencialidade de seu uso para estudos mais avançados de biologia celular e molecular.
RESUMO
The aim of the present study was to optimize a cv. Gaucho melon cotyledon explant regeneration protocol, evaluating the germination media composition and the explant exposition period in these media. For this purpose, seeds were germinated in semi-solid MS medium containing either BAP or ANA, and without growth regulators. The seeds were kept in these media for one, two, three or four days; afterwards, their cotyledons were inoculated in MS medium containing different BAP concentrations (0.5; 0.9; 1.5 and 2.0mg L-1). The highest regeneration rates occurred with cotyledons from seeds which had been kept for one or two days in media containing 0.5 and 0.9mg L-1 BAP. Both the increase in the explant exposition time in germination media and high BAP concentrations in regeneration media decreased explant organogenic capacity, and increased callus formation.
O objetivo do presente trabalho foi otimizar um protocolo de regeneração de explantes cotiledonares de melão, cultivar 'Gaúcho', avaliando a composição de meios de germinação e o tempo de permanência dos explantes nesses meios. Para isso, as sementes foram germinadas em meio MS semi-sólido contendo BAP ou ANA e sem esses reguladores de crescimento. As sementes permaneceram nesses meios por um, dois, três e quatro dias, sendo então seus cotilédones inoculados em meio MS contendo diferentes concentrações de BAP (0,5; 0,9; 1,5 e 2,0mg L-1). As maiores taxas de regeneração ocorreram nos cotilédones oriundos de sementes mantidas durante um e dois dias nos meios contendo 0,5 e 0,9mg L-1 de BAP. O aumento da permanência dos explantes nos meios de germinação e as elevadas concentrações de BAP nos meios de regeneração diminuíram a capacidade organogênica dos explantes e incrementaram a formação de calos.
RESUMO
The manipulation of concentration of trace elements in the culture medium represents a good strategy to increase the production of secondary metabolites in tissue culture. This study aimed to demonstrate the influence of copper sulphate in the production of betacyanin and the multiplication of plants of Alternanthera philoxeroides (alligator weed) cultured in vitro. Nodal segments, obtained from plants pre-stablished and after three subcultures, were inoculated in basic MS with different concentrations of CuSO4 (0, 25, 75, 125, 175, 200µM). The results were subjected to analysis of variance, polynomial regression and correlation analysis between the morphological variables and the production of betacyanin. The experimental design was completely randomized with six concentration of CuSO4 and five replicates represented by a bottle containing four explants. Concentrations above 75µM decreased the height of the plant, number of shoots and buds and root growth, while the concentration of 125µM resulted in the highest fresh mass production. Betacyanin production increased 60% over control with 175µM CuSO4. Plant growth occurred in all tested concentrations of CuSO4, with the exception of 200µM which was toxic.
A manipulação da concentração dos microelementos no meio de cultura representa uma boa estratégia para aumentar a produção de metabólitos secundários em cultura de tecidos. Este trabalho teve por objetivo demonstrar a influência do sulfato de cobre na produção de betacianina e na multiplicação de plantas de Alternanthera philoxeroides (erva-de-jacaré) cultivadas in vitro. Segmentos nodais, obtidos de plantas pré-estabelecidas e após três subcultivos, foram inoculados em meio MS, com diferentes concentrações de CuSO4 (0; 25; 75; 125; 175; 200µM). O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, com seis concentrações de CuSO4 e cinco repetições representadas por um frasco contendo quatro explantes. Os resultados foram submetidos à análise de variância, à regressão polinomial e a análises de correlação entre as variáveis morfológicas e a produção de betacianina. Concentrações acima de 75µM diminuíram a altura das plantas, o número de brotos e gemas e o crescimento radicular, enquanto que, na concentração de 125µM, houve a maior produção de massa fresca. A produção de betacianina aumentou 60% em relação ao controle com 175µM de CuSO4. Ocorreu crescimento das plantas em todas as concentrações de CuSO4 testadas, com exceção de 200µM, sendo esta considerada tóxica.
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A shoot regeneration system for Plectranthus neochilus was studied from leaf explants. Leaves developed under in vitro conditions were cultured on Wood Plant Medium supplemented with 0.2mg dm-3 -naphthaleneacetic acid (NAA) and different 6-benzilaminopurine (BAP) or thidiazuron (TDZ) concentrations (0, 1.5, 3.0, 4.5 and 6.0mg dm-3). An increase in percentage of responsive explants (85.3%) and in the number of shoots developed per explant (3.2) was observed when the explants were treated with 5.3 and 4.7mg dm-3 BAP, respectively. The leaf explants cultured on media supplemented with TDZ became vitreous and did not form buds. The regeneration system used is efficient for boldo bud induction and shoot development, showing high potential for advanced cellular and molecular studies.
O objetivo do presente trabalho foi adequar um protocolo de regeneração a partir de explantes foliares de Plectranthus neochilus. Folhas desenvolvidas sob condições in vitro foram cultivadas em meio WPM suplementado com 0,2mg L-1 de ácido -naftaleno acético (ANA) e diferentes concentrações (0; 1,5; 3,0; 4,5 e 6,0mg L-1) de 6-benzilaminopurina (BAP) ou thidiazuron (TDZ). Observou-se o aumento na percentagem de explantes regenerantes (85,3%) e no número de brotações por explante (3,2), quando os explantes foliares foram cultivados em meio contendo 5,3 e 4,7mg L-1 de BAP, respectivamente. Os explantes foliares cultivados em TDZ tornaram-se vítreos e não formaram gemas. O protocolo utilizado é eficiente para a indução de gemas e brotações, demonstrando a potencialidade de seu uso para estudos mais avançados de biologia celular e molecular.
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The aim of the present study was to optimize a cv. Gaucho melon cotyledon explant regeneration protocol, evaluating the germination media composition and the explant exposition period in these media. For this purpose, seeds were germinated in semi-solid MS medium containing either BAP or ANA, and without growth regulators. The seeds were kept in these media for one, two, three or four days; afterwards, their cotyledons were inoculated in MS medium containing different BAP concentrations (0.5; 0.9; 1.5 and 2.0mg L-1). The highest regeneration rates occurred with cotyledons from seeds which had been kept for one or two days in media containing 0.5 and 0.9mg L-1 BAP. Both the increase in the explant exposition time in germination media and high BAP concentrations in regeneration media decreased explant organogenic capacity, and increased callus formation.
O objetivo do presente trabalho foi otimizar um protocolo de regeneração de explantes cotiledonares de melão, cultivar 'Gaúcho', avaliando a composição de meios de germinação e o tempo de permanência dos explantes nesses meios. Para isso, as sementes foram germinadas em meio MS semi-sólido contendo BAP ou ANA e sem esses reguladores de crescimento. As sementes permaneceram nesses meios por um, dois, três e quatro dias, sendo então seus cotilédones inoculados em meio MS contendo diferentes concentrações de BAP (0,5; 0,9; 1,5 e 2,0mg L-1). As maiores taxas de regeneração ocorreram nos cotilédones oriundos de sementes mantidas durante um e dois dias nos meios contendo 0,5 e 0,9mg L-1 de BAP. O aumento da permanência dos explantes nos meios de germinação e as elevadas concentrações de BAP nos meios de regeneração diminuíram a capacidade organogênica dos explantes e incrementaram a formação de calos.
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A shoot regeneration system for Plectranthus neochilus was studied from leaf explants. Leaves developed under in vitro conditions were cultured on Wood Plant Medium supplemented with 0.2mg dm-3 -naphthaleneacetic acid (NAA) and different 6-benzilaminopurine (BAP) or thidiazuron (TDZ) concentrations (0, 1.5, 3.0, 4.5 and 6.0mg dm-3). An increase in percentage of responsive explants (85.3%) and in the number of shoots developed per explant (3.2) was observed when the explants were treated with 5.3 and 4.7mg dm-3 BAP, respectively. The leaf explants cultured on media supplemented with TDZ became vitreous and did not form buds. The regeneration system used is efficient for boldo bud induction and shoot development, showing high potential for advanced cellular and molecular studies.
O objetivo do presente trabalho foi adequar um protocolo de regeneração a partir de explantes foliares de Plectranthus neochilus. Folhas desenvolvidas sob condições in vitro foram cultivadas em meio WPM suplementado com 0,2mg L-1 de ácido -naftaleno acético (ANA) e diferentes concentrações (0; 1,5; 3,0; 4,5 e 6,0mg L-1) de 6-benzilaminopurina (BAP) ou thidiazuron (TDZ). Observou-se o aumento na percentagem de explantes regenerantes (85,3%) e no número de brotações por explante (3,2), quando os explantes foliares foram cultivados em meio contendo 5,3 e 4,7mg L-1 de BAP, respectivamente. Os explantes foliares cultivados em TDZ tornaram-se vítreos e não formaram gemas. O protocolo utilizado é eficiente para a indução de gemas e brotações, demonstrando a potencialidade de seu uso para estudos mais avançados de biologia celular e molecular.
RESUMO
The manipulation of concentration of trace elements in the culture medium represents a good strategy to increase the production of secondary metabolites in tissue culture. This study aimed to demonstrate the influence of copper sulphate in the production of betacyanin and the multiplication of plants of Alternanthera philoxeroides (alligator weed) cultured in vitro. Nodal segments, obtained from plants pre-stablished and after three subcultures, were inoculated in basic MS with different concentrations of CuSO4 (0, 25, 75, 125, 175, 200µM). The results were subjected to analysis of variance, polynomial regression and correlation analysis between the morphological variables and the production of betacyanin. The experimental design was completely randomized with six concentration of CuSO4 and five replicates represented by a bottle containing four explants. Concentrations above 75µM decreased the height of the plant, number of shoots and buds and root growth, while the concentration of 125µM resulted in the highest fresh mass production. Betacyanin production increased 60% over control with 175µM CuSO4. Plant growth occurred in all tested concentrations of CuSO4, with the exception of 200µM which was toxic.
A manipulação da concentração dos microelementos no meio de cultura representa uma boa estratégia para aumentar a produção de metabólitos secundários em cultura de tecidos. Este trabalho teve por objetivo demonstrar a influência do sulfato de cobre na produção de betacianina e na multiplicação de plantas de Alternanthera philoxeroides (erva-de-jacaré) cultivadas in vitro. Segmentos nodais, obtidos de plantas pré-estabelecidas e após três subcultivos, foram inoculados em meio MS, com diferentes concentrações de CuSO4 (0; 25; 75; 125; 175; 200µM). O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, com seis concentrações de CuSO4 e cinco repetições representadas por um frasco contendo quatro explantes. Os resultados foram submetidos à análise de variância, à regressão polinomial e a análises de correlação entre as variáveis morfológicas e a produção de betacianina. Concentrações acima de 75µM diminuíram a altura das plantas, o número de brotos e gemas e o crescimento radicular, enquanto que, na concentração de 125µM, houve a maior produção de massa fresca. A produção de betacianina aumentou 60% em relação ao controle com 175µM de CuSO4. Ocorreu crescimento das plantas em todas as concentrações de CuSO4 testadas, com exceção de 200µM, sendo esta considerada tóxica.
RESUMO
The aim of the present study was to optimize a cv. Gaucho melon cotyledon explant regeneration protocol, evaluating the germination media composition and the explant exposition period in these media. For this purpose, seeds were germinated in semi-solid MS medium containing either BAP or ANA, and without growth regulators. The seeds were kept in these media for one, two, three or four days; afterwards, their cotyledons were inoculated in MS medium containing different BAP concentrations (0.5; 0.9; 1.5 and 2.0mg L-1). The highest regeneration rates occurred with cotyledons from seeds which had been kept for one or two days in media containing 0.5 and 0.9mg L-1 BAP. Both the increase in the explant exposition time in germination media and high BAP concentrations in regeneration media decreased explant organogenic capacity, and increased callus formation.
O objetivo do presente trabalho foi otimizar um protocolo de regeneração de explantes cotiledonares de melão, cultivar 'Gaúcho', avaliando a composição de meios de germinação e o tempo de permanência dos explantes nesses meios. Para isso, as sementes foram germinadas em meio MS semi-sólido contendo BAP ou ANA e sem esses reguladores de crescimento. As sementes permaneceram nesses meios por um, dois, três e quatro dias, sendo então seus cotilédones inoculados em meio MS contendo diferentes concentrações de BAP (0,5; 0,9; 1,5 e 2,0mg L-1). As maiores taxas de regeneração ocorreram nos cotilédones oriundos de sementes mantidas durante um e dois dias nos meios contendo 0,5 e 0,9mg L-1 de BAP. O aumento da permanência dos explantes nos meios de germinação e as elevadas concentrações de BAP nos meios de regeneração diminuíram a capacidade organogênica dos explantes e incrementaram a formação de calos.
RESUMO
Isozymic analyses were used to investigate biochemical variations of somaclones from strawberry cultivar Vila Nova, obtained starting from calli. Analyses were performed using young leaves collected from plants during the in vitro multiplication and afther aclimatation at greenhouse. The enzyme systems used for the analysis of the clones consisted of acid phosphatase and esterase (pH 6.5 and 8.3). During the in vitro culture, two patterns of acid phosphatase were detected among the regenerants, however for the esterase all the genotypes exhibited the same pattern of bands. At greenhouse, were found three patterns of bands different for acid phosphatase. Alterations were not verified in relation to the number and band position for esterase (pH 6.5), while, for esterase (pH 8.3) polymorphism was observed among the clones. Both enzyme systems were influenced by the growth condiction (in vitro and in vivo) and by the developing stage of the plants.
Análises isoenzimáticas foram utilizadas para investigar variações bioquímicas em somaclones de morangueiro cultivar Vila Nova, o btidos a partir de calos. Utilizaram-se como amostras folhas jovens de plantas durante a multiplicaç ão in vitro e após a aclimatização em casa de vegetação. Os sistemas enzimáticos utilizados para a análise dos clones foram fosfatase ácida e esterase (pH 6,5 e 8,3). Durante o cultivo in vitro, dois padrões de fosfatase ácida foram detectados entre os regenerantes; já para a esterase, todos os genótipos exibiram o mesmo padrão de bandas. Em casa de vegetação, foram encontrados três padrões de bandas distintos de fosfatase ácida. Não foram verificadas alterações quanto ao número e posição das bandas de esterase em pH 6,5, enquanto que para a esterase em pH 8,3 observou-se polimorfismo entre os clones. Ambos os sistemas enzimáticos mostraram-se influenciados pelas condições de crescimento (in vitro e in vivo) e pelos estádios de desenvolvimento das plantas.
RESUMO
Isozymic analyses were used to investigate biochemical variations of somaclones from strawberry cultivar Vila Nova, obtained starting from calli. Analyses were performed using young leaves collected from plants during the in vitro multiplication and afther aclimatation at greenhouse. The enzyme systems used for the analysis of the clones consisted of acid phosphatase and esterase (pH 6.5 and 8.3). During the in vitro culture, two patterns of acid phosphatase were detected among the regenerants, however for the esterase all the genotypes exhibited the same pattern of bands. At greenhouse, were found three patterns of bands different for acid phosphatase. Alterations were not verified in relation to the number and band position for esterase (pH 6.5), while, for esterase (pH 8.3) polymorphism was observed among the clones. Both enzyme systems were influenced by the growth condiction (in vitro and in vivo) and by the developing stage of the plants.
Análises isoenzimáticas foram utilizadas para investigar variações bioquímicas em somaclones de morangueiro cultivar Vila Nova, o btidos a partir de calos. Utilizaram-se como amostras folhas jovens de plantas durante a multiplicaç ão in vitro e após a aclimatização em casa de vegetação. Os sistemas enzimáticos utilizados para a análise dos clones foram fosfatase ácida e esterase (pH 6,5 e 8,3). Durante o cultivo in vitro, dois padrões de fosfatase ácida foram detectados entre os regenerantes; já para a esterase, todos os genótipos exibiram o mesmo padrão de bandas. Em casa de vegetação, foram encontrados três padrões de bandas distintos de fosfatase ácida. Não foram verificadas alterações quanto ao número e posição das bandas de esterase em pH 6,5, enquanto que para a esterase em pH 8,3 observou-se polimorfismo entre os clones. Ambos os sistemas enzimáticos mostraram-se influenciados pelas condições de crescimento (in vitro e in vivo) e pelos estádios de desenvolvimento das plantas.