RESUMO

The identification of dairy cows with greater or lower potential to develop mastits has been pursued for many years among different segments of the milk industry, including governmental organizations. Genomic studies have suggested that Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) within the pattern recognition receptors (PRR) could lead to different responses to pathogens, and consequently result in mastitis resistance or susceptibility. To investigate whether toll like receptor 4 (TLR4) gene is associated with subclinical mastitis in Holstein cows from a property in the state of Goiás, Brazil, TaqMan allelic discrimination and somatic cell count were performed. One hundred and fifty milk samples were analyzed for SCC and centesimal composition. Twenty percent of those samples with SCC above 200,000 (n=13) were screened for real-time PCR identification of microorganisms and blood samples were genotyped for TLR4 SNPs. There was a higher prevalence of Gram-positive bacteria in the analyzed samples (88.9%) and animals that had the combined genotypes AACCCC, GGTCGG and GACCGC presented the lowest somatic cell scores, and consequently those genotypes have the potential to be applied as molecular markers for assisted animal selection to improve milk quality.

RESUMO

This study was conducted to evaluate a protocol and to select novel primers for the species-specific identification of Taenia saginata and Taenia solium by PCR and duplex-PCR assays. Sequences of the LSU rRNA gene of taenids were obtained from the GenBank (T. saginata access n° AB020399 and T. solium access n° AB020395). The sequences were aligned and then used for primer design. The generic primer TBR3 (5'-ggcttgtttgaatggtttgacg- 3') was selected from a conserved region. The T. saginata specific primer TBR-4 (5'-cgactcatgaagataaacaaggt-3') as well as T. solium specific primers TBR-5 (5'-cggtcgaacagaccataaatct-3') and TBR-6 (5'-gctactacacctaaattctaacc- 3') were selected from different semi-conserved regions. The selected sequences were examined in for similarities with other organisms through the GenBank Blast procedure and experimentally by PCR using total DNA (tDNA) extracted from cysticerci and proglottids from both parasites. The primer pair TBR-3/TBR-4 amplified specific fragments of 328 bp from T. saginata tDNA. The pairs TBR-3/TBR5 and TBR-3/TBR-6 amplified, respectively, the expected and specific fragments of 310bp and 286bp from the T. solium tDNA. Sequencing of the amplicons followed by comparison to GenBank reference sequences confirmed the identities of the PCR products. The detection sensitivity was equivalent to 1fg of T. solium tDNA and 0,2fg of T. saginata tDNA. The combination of primers TBR-3/TBR-4 and TBR3/TBR-6 and the size of amplicons allowed the establishment of a duplex-PCR assay to detect T. saginata and T. solium DNA. No cross reaction was observed with any combination of primers in reactions with tDNA of the parasites Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana and Moniezia expansa, nether from the hosts tDNA Homo sapiens, Bos taurus nor Sus scrofa.

Este estudo teve como objetivo a padronização de protocolos e a seleção de novos primers para a identificação espécie-específica de Taenia saginata e Taenia solium através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e duplex-PCR. Inicialmente, foram recuperadas seqüências depositadas no GenBank (acesso n° AB020399 para T. saginata e n° AB020395 para T. solium) referentes ao gene da subunidade maior do ribossomo (LSU RNAr) de tenídeos. A partir do alinhamento das seqüências, um primer genérico denominado TBR-3 (5'-ggcttgtttgaatggtttgacg- 3') foi selecionado de região conservada e, de diferentes regiões semi-conservadas, os primers específicos TBR-4 para T. saginata (5'-cgactcatgaagataaacaaggt-3') e TBR-5 (5'-cggtcgaacagaccataaatct-3') e TBR-6 (5'-gctactacacctaaattctaacc- 3') para T. solium. Os primers foram avaliados quanto à especificidade através da PCR empregando-se DNA total (DNAt) de amostras de cisticercos e proglotes dos parasitos, previamente identificadas por critérios morfológicos. O par de primers TBR-3/TBR-4 permitiu a amplificação específica do fragmento esperado de 328 pb a partir do DNAt de T. saginata. Os pares TBR-3/TBR-5 e TBR-3/TBR-6 permitiram a amplificação, respectivamente, dos fragmentos específicos de 310pb e 286pb a partir do DNAt de T. solium. A identidade dos produtos de PCR foi comprovada comparando-se a seqüência dos amplicons obtidos às seqüências de referência do gene LSU RNAr registrado no GenBank (n° AB020399 e n° AB020395). As reações apresentaram sensibilidade para detecção de até 1fg do DNAt de T. solium e 0,2fg do DNAt de T. saginata. A combinação dos primers TBR-3/TBR-4 e TBR3/TBR-6 e o tamanho dos fragmentos gênicos obtidos permitiram o estabelecimento de ensaios de duplex-PCR, eficaz na detecção simultânea do DNA de T. saginata e T. solium em sistema único de reação. Os primers utilizados não geraram qualquer produto de amplificação cruzada quando testados com DNAt de Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana e Moniezia expansa, nem frente ao DNAt dos hospedeiros Homo sapiens, Bos taurus e Sus scrofa.

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This study was conducted to evaluate a protocol and to select novel primers for the species-specific identification of Taenia saginata and Taenia solium by PCR and duplex-PCR assays. Sequences of the LSU rRNA gene of taenids were obtained from the GenBank (T. saginata access n° AB020399 and T. solium access n° AB020395). The sequences were aligned and then used for primer design. The generic primer TBR3 (5'-ggcttgtttgaatggtttgacg- 3') was selected from a conserved region. The T. saginata specific primer TBR-4 (5'-cgactcatgaagataaacaaggt-3') as well as T. solium specific primers TBR-5 (5'-cggtcgaacagaccataaatct-3') and TBR-6 (5'-gctactacacctaaattctaacc- 3') were selected from different semi-conserved regions. The selected sequences were examined in for similarities with other organisms through the GenBank Blast procedure and experimentally by PCR using total DNA (tDNA) extracted from cysticerci and proglottids from both parasites. The primer pair TBR-3/TBR-4 amplified specific fragments of 328 bp from T. saginata tDNA. The pairs TBR-3/TBR5 and TBR-3/TBR-6 amplified, respectively, the expected and specific fragments of 310bp and 286bp from the T. solium tDNA. Sequencing of the amplicons followed by comparison to GenBank reference sequences confirmed the identities of the PCR products. The detection sensitivity was equivalent to 1fg of T. solium tDNA and 0,2fg of T. saginata tDNA. The combination of primers TBR-3/TBR-4 and TBR3/TBR-6 and the size of amplicons allowed the establishment of a duplex-PCR assay to detect T. saginata and T. solium DNA. No cross reaction was observed with any combination of primers in reactions with tDNA of the parasites Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana and Moniezia expansa, nether from the hosts tDNA Homo sapiens, Bos taurus nor Sus scrofa.

Este estudo teve como objetivo a padronização de protocolos e a seleção de novos primers para a identificação espécie-específica de Taenia saginata e Taenia solium através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e duplex-PCR. Inicialmente, foram recuperadas seqüências depositadas no GenBank (acesso n° AB020399 para T. saginata e n° AB020395 para T. solium) referentes ao gene da subunidade maior do ribossomo (LSU RNAr) de tenídeos. A partir do alinhamento das seqüências, um primer genérico denominado TBR-3 (5'-ggcttgtttgaatggtttgacg- 3') foi selecionado de região conservada e, de diferentes regiões semi-conservadas, os primers específicos TBR-4 para T. saginata (5'-cgactcatgaagataaacaaggt-3') e TBR-5 (5'-cggtcgaacagaccataaatct-3') e TBR-6 (5'-gctactacacctaaattctaacc- 3') para T. solium. Os primers foram avaliados quanto à especificidade através da PCR empregando-se DNA total (DNAt) de amostras de cisticercos e proglotes dos parasitos, previamente identificadas por critérios morfológicos. O par de primers TBR-3/TBR-4 permitiu a amplificação específica do fragmento esperado de 328 pb a partir do DNAt de T. saginata. Os pares TBR-3/TBR-5 e TBR-3/TBR-6 permitiram a amplificação, respectivamente, dos fragmentos específicos de 310pb e 286pb a partir do DNAt de T. solium. A identidade dos produtos de PCR foi comprovada comparando-se a seqüência dos amplicons obtidos às seqüências de referência do gene LSU RNAr registrado no GenBank (n° AB020399 e n° AB020395). As reações apresentaram sensibilidade para detecção de até 1fg do DNAt de T. solium e 0,2fg do DNAt de T. saginata. A combinação dos primers TBR-3/TBR-4 e TBR3/TBR-6 e o tamanho dos fragmentos gênicos obtidos permitiram o estabelecimento de ensaios de duplex-PCR, eficaz na detecção simultânea do DNA de T. saginata e T. solium em sistema único de reação. Os primers utilizados não geraram qualquer produto de amplificação cruzada quando testados com DNAt de Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana e Moniezia expansa, nem frente ao DNAt dos hospedeiros Homo sapiens, Bos taurus e Sus scrofa.

RESUMO

This study evaluated the effect of the parenteral administration of etilenodinitrile tetracetate of calcium and copper on the weight gain, eritrograma and the hepatic and renal parenchymas in confined bovines, using 200 animals, distributed in four groups (G) of 50 (I, II, III and IV). The groups I and II were constituted by bovines with the age of 24 months and the groups III and IV by animals of 12 months, which GI was given 100mg of active copper and GIII 75mg, both by subcutaneous way by the beginning of the study. The other groups were used as the control. The weight measure of the animals of all groups was done from 28 to 28 days during the 112 days of confinement. It was done the eritrograma in ten bovines of each group and the dosage of the hepatic and renal concentration of copper and the hystological evaluation, in the animals of the groups I and II. The values found on the eritrograma showed normality and the hepatic and renal concentrations of copper in bovines with the age of 24 months showed depletion levels. It was not verified differences about the hystological evaluation between the groups I and II. There was significant difference on the weight gain media between the groups I and II. On the groups III and IV, it was not observed difference over the weight gain media.

Nesse estudo avaliou-se o efeito da administração parenteral de etilenodinitrilo tetracetato de cálcio e cobre sobre o ganho de peso, eritrograma e parênquimas, hepático e renais, em bovinos confinados, utilizando-se 200 animais, alocados em quatro grupos (G) de 50 (I, II, III e IV). Os grupos I e II foram compostos por bovinos com 24 meses e os grupos III e IV por animais de doze meses, sendo que o GI recebeu 100 mg de cobre ativo e o GIII 75 mg, ambos por via subcutânea ao início do estudo. Os demais grupos foram utilizados como controle. A pesagem dos animais de todos os grupos foi realizada a cada 28 dias durante os 112 dias de confinamento. Realizou-se o eritrograma em dez bovinos de cada grupo e a determinação das concentrações de cobre hepático e renal, bem como a avaliação histológica em dez animais dos grupos I e II. Os valores obtidos para o eritrograma apresentaram-se dentro da normalidade e as concentrações, hepática e renal do cobre nos bovinos na faixa etária de 24 meses indicaram níveis de depleção. Não foram verificadas diferenças quanto aos achados histológicos entre os grupos I e II. Houve diferença significativa entre as médias de ganho de peso entre os grupos I (93.38Kg) e II (88,15 Kg). Nos grupos III e IV não se observou diferença entre os ganhos médios de peso.

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This study evaluated the effect of the parenteral administration of etilenodinitrile tetracetate of calcium and copper on the weight gain, eritrograma and the hepatic and renal parenchymas in confined bovines, using 200 animals, distributed in four groups (G) of 50 (I, II, III and IV). The groups I and II were constituted by bovines with the age of 24 months and the groups III and IV by animals of 12 months, which GI was given 100mg of active copper and GIII 75mg, both by subcutaneous way by the beginning of the study. The other groups were used as the control. The weight measure of the animals of all groups was done from 28 to 28 days during the 112 days of confinement. It was done the eritrograma in ten bovines of each group and the dosage of the hepatic and renal concentration of copper and the hystological evaluation, in the animals of the groups I and II. The values found on the eritrograma showed normality and the hepatic and renal concentrations of copper in bovines with the age of 24 months showed depletion levels. It was not verified differences about the hystological evaluation between the groups I and II. There was significant difference on the weight gain media between the groups I and II. On the groups III and IV, it was not observed difference over the weight gain media.

Nesse estudo avaliou-se o efeito da administração parenteral de etilenodinitrilo tetracetato de cálcio e cobre sobre o ganho de peso, eritrograma e parênquimas, hepático e renais, em bovinos confinados, utilizando-se 200 animais, alocados em quatro grupos (G) de 50 (I, II, III e IV). Os grupos I e II foram compostos por bovinos com 24 meses e os grupos III e IV por animais de doze meses, sendo que o GI recebeu 100 mg de cobre ativo e o GIII 75 mg, ambos por via subcutânea ao início do estudo. Os demais grupos foram utilizados como controle. A pesagem dos animais de todos os grupos foi realizada a cada 28 dias durante os 112 dias de confinamento. Realizou-se o eritrograma em dez bovinos de cada grupo e a determinação das concentrações de cobre hepático e renal, bem como a avaliação histológica em dez animais dos grupos I e II. Os valores obtidos para o eritrograma apresentaram-se dentro da normalidade e as concentrações, hepática e renal do cobre nos bovinos na faixa etária de 24 meses indicaram níveis de depleção. Não foram verificadas diferenças quanto aos achados histológicos entre os grupos I e II. Houve diferença significativa entre as médias de ganho de peso entre os grupos I (93.38Kg) e II (88,15 Kg). Nos grupos III e IV não se observou diferença entre os ganhos médios de peso.