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The mangrove oyster Crassostrea rhizophorae is identified as a potentially valuable species for tropical aquaculture, however, information on the physiological mechanisms of reproduction under laboratory conditions for this species is limited. This study investigated the effects of salinity at different concentrations (15, 20, 25, 30, 35, and 40 g/L) on the induction of germinal vesicle breakdown (GVBD) of oocytes obtained through stripping, the release of polar bodies (PB1 and PB2), and the larval development of the mangrove oyster. The results revealed a relationship between salinity and the percentage of GVBD, with the most effective range being 30-40 g/L within the hydration time frame between 70 and 120 min. The release of 50 % of PB1 was detected within this salinity range, while for the release of 50 % of PB2, the saline treatments of 35 and 40 g/L showed the best results. Overall, the salinity range of 30-40 g/L is suggested as the most suitable of polyploidy induction methodologies through the retention of PB1 or PB2. Regarding larval hatching, while salinities between 25 and 40 g/L presented similar percentages, at 15 g/L no hatching was observed. This study demonstrated that salinity is a key factor in early pre- and post-fertilization stages for the successful reproduction of mangrove oyster in hatcheries and that the percentages of oocyte maturation and artificial fertilization can be optimized by adjusting salinity.

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The knowledge about the effect of salinity on the physiological mechanism of bivalve reproduction is fundamental to improve production strategies in hatcheries. The present work evaluated the influence of different salinity concentrations (15, 20, 25, 30, 35 and 40 g⋅L-1) on pre- and post-fertilization development processes in the clam, Anomalocardia flexuosa, oocytes obtained by stripping. Salinity directly interfered with the germinal vesicle breakdown (GVBD) rate and in the cellular stability of unfertilized oocytes. Salinity concentrations between 30 and 35 g⋅L-1 provided better percentages of stable GVBD within 120 min, and incubation of oocytes in the salinity range of 30-35 g⋅L-1 for a time interval of 80-120 min provided > 80% GVBD. In the post-fertilization analysis, salinity affected the rate of the extrusion of the first and second polar bodies (PB1 and PB2). The release of 50% of the PBs was faster at a salinity of 35 g⋅L-1, with an estimated time of 10 min for PB1 and 30 min for PB2. Thus, chromosome manipulation methodologies aiming triploids should be applied at 35 g⋅L-1 salinity, with application of post-fertilization shock before 10 min for PB1 retention or before 30 min for PB2 retention.

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The knowledge about the effect of salinity on the physiological mechanism of bivalve reproduction is fundamental to improve production strategies in hatcheries. The present work evaluated the influence of different salinity concentrations (15, 20, 25, 30, 35 and 40 g⋅L−1) on pre- and post-fertilization development processes in the clam, Anomalocardia flexuosa, oocytes obtained by stripping. Salinity directly interfered with the germinal vesicle breakdown (GVBD) rate and in the cellular stability of unfertilized oocytes. Salinity concentrations between 30 and 35 g⋅L−1 provided better percentages of stable GVBD within 120 min, and incubation of oocytes in the salinity range of 30-35 g⋅L−1 for a time interval of 80-120 min provided > 80% GVBD. In the post-fertilization analysis, salinity affected the rate of the extrusion of the first and second polar bodies (PB1 and PB2). The release of 50% of the PBs was faster at a salinity of 35 g⋅L−1, with an estimated time of 10 min for PB1 and 30 min for PB2. Thus, chromosome manipulation methodologies aiming triploids should be applied at 35 g⋅L−1 salinity, with application of post-fertilization shock before 10 min for PB1 retention or before 30 min for PB2 retention.(AU)

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This study aimed to characterize spatiotemporal variations in the ichthyofauna of two tidal containment zones in Maranhão state, Brazil. Monthly, collections were carried out in the containment zones of São Luís and São José de Ribamar, with samplings performed after the peak of the lowest tide (transition between low tide and high tide). Physicochemical parameters such as water salinity, temperature, transparency, and precipitation were measured monthly. A gill net (25-mm mesh) was used to capture fish. A total of 169 ichthyic individuals were captured and identified in the coastal containment areas of São Luís and São José de Ribamar. The orders Perciformes (41%) and Siluriformes (13.6%) were the most representative in terms of number of species. According to analysis of the t-test, there were significant seasonal and spatial variations in the number of organisms (p < 0.05), with the highest catches in rainy and transitional months. It was possible to identify a variation in niches in both study areas, the influence of physicochemical parameters on ichthyofaunal communities of São Luís and São José de Ribamar, and the effects of the containment structures on fish biomass and diversity, mainly in São Luís.(AU)

Este trabalho teve como objetivo caracterizar a variação espaçotemporal da ictiofauna de duas estruturas de contenção de maré no estado do Maranhão, Brasil. As coletas mensais foram realizadas nas zonas de contenção de São Luís e São José de Ribamar, com coletas realizadas após o pico da maré baixa. Parâmetros físico-químicos como salinidade, temperatura, transparência da água e precipitação foram medidos mensalmente. Uma rede de emalhar (com malha de 25 mm) foi utilizada para capturar os peixes. O total de 169 indivíduos da ictiofauna foram capturados e identificados na área de contenção costeira de São Luís e São José de Ribamar. As ordens Perciformes (41%) e Siluriformes (13,6%) foram as mais representativas em número de espécies. De acordo com o test-t, houve variação entre o número de organismos em relação aos períodos sazonal e estacionário nas áreas de estudo (p<0,05), com maiores capturas nos meses chuvosos e de transição. Foi possível notar uma variação nos nichos em ambas as áreas de estudo, a influência de parâmetros físico-químicos nas comunidades da ictiofauna de São Luís e São José de Ribamar e o efeito da construção da contenção sobre a biomassa e diversidade de peixes, principalmente em São Luís.(AU)

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Este estudo teve como objetivo estabelecer o ciclo reprodutivo da ostra do mangue, Crassostrea rhizophorae cultivada no estuário de macromarés do Rio Paciência, Maranhão, na costa nordeste do Brasil, e suas relações com fatores ambientais. As ostras foram coletadas mensalmente ao longo de 2013 para análise histológica da proporção sexual, desenvolvimento gonadal e índice de condição. A proporção sexual foi de 1:1,39 (M:F) e apenas 5 espécimes apresentaram hermafroditismo. A maturação foi contínua ao longo do ano e ostras maduras (estágio IIIA) e em desova (estágio IIIB) estiveram presentes em praticamente todos os meses. A baixa variação de temperatura parece ser o principal fator para a continuidade da gametogênese. Entretanto, além da temperatura, a relação entre precipitação, salinidade e produtividade primária afetou o estímulo e o tempo dos eventos reprodutivos. A estação chuvosa, com baixos valores de salinidade e altos valores de clorofila a e matéria orgânica particulada, pareceu ser o principal período reprodutivo, com liberação de gametas e produção e maturação de novas coortes de gametas em curto prazo. Nos trópicos, onde a maturação e liberação de gametas parecem ser contínuas e concomitantes, o índice de condição não se apresenta como o melhor método para avaliar os picos de acúmulo de reserva e desenvolvimento gonadal.(AU)

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This study aimed to establish the reproductive cycle of the mangrove oyster, Crassostrea rhizophorae cultured in the macrotidal estuary of the Paciência River, Maranhão state, on the northeastern coast of Brazil, and its relationship with environmental factors. Oysters were collected monthly throughout 2013 for histological analysis of sex ratio, gonadal development and condition index. The sex ratio was 1:1.39 (M:F) and only 5 specimens presented hermaphroditism. The breeding process was continuous throughout the year and mature (IIIA stage) and spawning oysters (IIIB stage) were present in practically all months. Low variation in temperature seemed to be the main factor for the continuity of the reproductive cycle. Besides temperature, the relationship between rainfall, salinity and primary productivity affected the stimulus and timing of reproductive events. The rainy season, with low values of salinity and high values of chlorophyll a and particulate organic matter, appeared to be the main reproductive period, with release of gametes and production and maturation of new gamete cohorts in the short term. In the tropics, where gamete maturation and release seem to be continuous and concomitant, the condition index does not appear to be the best method to assess reserve accumulation peaks and gonadal repletion.(AU)

Este estudo teve como objetivo estabelecer o ciclo reprodutivo da ostra do mangue, Crassostrea rhizophorae cultivada no estuário de macromarés do Rio Paciência, Maranhão, na costa nordeste do Brasil, e suas relações com fatores ambientais. As ostras foram coletadas mensalmente ao longo de 2013 para análise histológica da proporção sexual, desenvolvimento gonadal e índice de condição. A proporção sexual foi de 1:1,39 (M:F) e apenas 5 espécimes apresentaram hermafroditismo. A maturação foi contínua ao longo do ano e ostras maduras (estágio IIIA) e em desova (estágio IIIB) estiveram presentes em praticamente todos os meses. A baixa variação de temperatura parece ser o principal fator para a continuidade da gametogênese. Entretanto, além da temperatura, a relação entre precipitação, salinidade e produtividade primária afetou o estímulo e o tempo dos eventos reprodutivos. A estação chuvosa, com baixos valores de salinidade e altos valores de clorofila a e matéria orgânica particulada, pareceu ser o principal período reprodutivo, com liberação de gametas e produção e maturação de novas coortes de gametas em curto prazo. Nos trópicos, onde a maturação e liberação de gametas parecem ser contínuas e concomitantes, o índice de condição não se apresenta como o melhor método para avaliar os picos de acúmulo de reserva e desenvolvimento gonadal.(AU)

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The goal of this study was to evaluate biomarkers (glutathione S-transferase and catalase) and microorganisms in soft tissues of Crassostrea rhizophorae to assess possible contamination of seafood in Brazil. The oysters were sampled from a reference area (Ports 1 and 2) and an impacted area (Ports 3 and 4) in Brazil (São Luís Island, Maranhão). Six attributes were examined in sampled oysters: glutathione S-transferase activity, catalase activity, concentrations of total coliforms and thermotolerant coliforms, and levels of Escherichia coli and Aeromonas hydrophila. Water samples were analysed for aluminium, cadmium, iron, manganese, lead, mercury, phenolics, and polychlorinated biphenyls. We found that Ports 3 and 4 are impacted by several contaminants (mercury, phenolics, and polychlorinated biphenyls), while Ports 1 and 2 are still relatively free of these contaminants. Changes in enzymes activity as well as the highest tissue bacterial concentrations were recorded in oysters from Ports 3 and 4 during the rainy season.

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The purpose of this study was to determine the moment of the year for the oyster recruitment and define the type of collector and environmental conditions that maximize recruitment. Collections were conducted, during 12 months, on Amazon Macrotidal Mangrove at two different sites: raft (point I) and mangrove (point II). In each location three types of collectors were used (1) transparent PET bottles, (2) green PET bottles, and (3) PVC sheets, each with three replicates. Spats were counted and measured at 45-day intervals, while the environmental data were measured every two weeks. Identification of oyster species occurred by genetic testing (multiplex PCR) by randomly selecting individuals by sampling. Results indicated spat capturing was significantly influenced by the collector type, location and period of collection (P<0.05, MANOVA) with significantly higher recruitment in the PVC collector (P<0.05, Tukey test). Oyster recruitment occurred throughout the year, suggesting that these individuals reproduce during all months; however, months with less rain and greater salinity were the best for spat collection, while the rainy period with lower salinity proved to be the best for individuals growth. The location in interaction with the environmental variables, mainly salinity, has a significant effect on the recruitment rate of spat and on their size, so that point II (mangrove) had the best results for recruitment and point I (raft) provided the spats of the largest size. Genetic identification verified two native oysters species (Crassostrea gasar and Crassostrea rhizophorae) in both points (I and II).(AU)

O estudo teve como objetivo determinar o período do ano para coletar sementes de ostras, definir o tipo de coletor e as condições ambientais que maximizam o recrutamento das sementes. As coletas foram conduzidas, durante 12 meses, no manguezal amazônico de macromaré em dois locais distintos: balsa (ponto I) e manguezal (ponto II). Em cada ponto de coleta foram utilizados três tipos de coletores (1) garrafas PET transparentes, (2) garrafas PET verdes e (3) forro de PVC, com três réplicas cada. As sementes foram contadas e medidas a cada 45 dias e os dados ambientais mensurados a cada duas semanas. As espécies de ostras foram identificadas por teste genético (PCR multiplex) com indivíduos aleatoriamente selecionados por coleta. Os resultados indicaram que a captura de sementes foi influenciada significativamente pelo tipo de coletor, localização e período de coleta (P<0,05, MANOVA) com recrutamento significativamente maior no coletor de PVC (P<0,05, teste de Tukey). O recrutamento ocorreu durante todo ano, sugerindo reprodução mensal, contudo, os meses de menor pluviosidade e maior salinidade foram melhores para coletar sementes, enquanto o período chuvoso, com menor salinidade, favoreceu um crescimento superior. O local de coleta em interação com variáveis ambientais, principalmente salinidade, apresentou efeito significativo sobre a fixação e tamanho das sementes de maneira que o ponto II obteve melhores resultados de fixação e o ponto I sementes de maior tamanho. A análise genética identificou duas espécies nativas (Crassostrea gasar e Crassostrea rhizophorae) em ambos os pontos (I e II).(AU)

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ABSTRACT: The purpose of this study was to determine the moment of the year for the oyster recruitment and define the type of collector and environmental conditions that maximize recruitment. Collections were conducted, during 12 months, on Amazon Macrotidal Mangrove at two different sites: raft (point I) and mangrove (point II). In each location three types of collectors were used (1) transparent PET bottles, (2) green PET bottles, and (3) PVC sheets, each with three replicates. Spats were counted and measured at 45-day intervals, while the environmental data were measured every two weeks. Identification of oyster species occurred by genetic testing (multiplex PCR) by randomly selecting individuals by sampling. Results indicated spat capturing was significantly influenced by the collector type, location and period of collection (P<0.05, MANOVA) with significantly higher recruitment in the PVC collector (P<0.05, Tukey test). Oyster recruitment occurred throughout the year, suggesting that these individuals reproduce during all months; however, months with less rain and greater salinity were the best for spat collection, while the rainy period with lower salinity proved to be the best for individuals growth. The location in interaction with the environmental variables, mainly salinity, has a significant effect on the recruitment rate of spat and on their size, so that point II (mangrove) had the best results for recruitment and point I (raft) provided the spats of the largest size. Genetic identification verified two native oysters species (Crassostrea gasar and Crassostrea rhizophorae) in both points (I and II).

RESUMO: O estudo teve como objetivo determinar o período do ano para coletar sementes de ostras, definir o tipo de coletor e as condições ambientais que maximizam o recrutamento das sementes. As coletas foram conduzidas, durante 12 meses, no manguezal amazônico de macromaré em dois locais distintos: balsa (ponto I) e manguezal (ponto II). Em cada ponto de coleta foram utilizados três tipos de coletores (1) garrafas PET transparentes, (2) garrafas PET verdes e (3) forro de PVC, com três réplicas cada. As sementes foram contadas e medidas a cada 45 dias e os dados ambientais mensurados a cada duas semanas. As espécies de ostras foram identificadas por teste genético (PCR multiplex) com indivíduos aleatoriamente selecionados por coleta. Os resultados indicaram que a captura de sementes foi influenciada significativamente pelo tipo de coletor, localização e período de coleta (P<0,05, MANOVA) com recrutamento significativamente maior no coletor de PVC (P<0,05, teste de Tukey). O recrutamento ocorreu durante todo ano, sugerindo reprodução mensal, contudo, os meses de menor pluviosidade e maior salinidade foram melhores para coletar sementes, enquanto o período chuvoso, com menor salinidade, favoreceu um crescimento superior. O local de coleta em interação com variáveis ambientais, principalmente salinidade, apresentou efeito significativo sobre a fixação e tamanho das sementes de maneira que o ponto II obteve melhores resultados de fixação e o ponto I sementes de maior tamanho. A análise genética identificou duas espécies nativas (Crassostrea gasar e Crassostrea rhizophorae) em ambos os pontos (I e II).

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Oysters are found along the whole coast of Brazil. The phenotypes of the species vary considerably according to the characteristics of the habitat. The present study investigated the existence of different oyster species of the genus Crassostrea on the coast of Maranhão, using the Multiplex PCR technique and DNA Barcoding. The results of the Multiplex PCR revealed two distinct bands characteristic of the species C. gasar and C. rhizophorae in a total of 135 samples analyzed. The sequencing of the COI gene of 98 samples produced a 695 bp fragment and 15 haplotypes for C. gasar and 640 bp and eight haplotypes for C. rhizophorae. The haplotype tree divided the two species clearly into different clades with 100% bootstrap support. Intraspecific genetic divergence was 0.2% in both species, while interspecific divergence was 23.6%. The similarity between the sequences generated and those available in BoldSystems ranged from 97.01% to 98.37% for C. rhizophorae and from 97.55% to 99.84% for both C. gasar and C. brasiliana, reinforcing the taxonomic problems in this group, which supports the synonymization of these species. The DNA barcoding permitted the reliable identification of the samples and confirmed the existence of two species of oyster in the study area.(AU)

As ostras são encontradas ao longo de toda a costa do Brasil. Os fenótipos das espécies variam consideravelmente de acordo com as características do habitat. O presente estudo investigou a existência de diferentes espécies de ostra do gênero Crassostrea no litoral do Maranhão, utilizando a técnica de PCR Multiplex e DNA barcoding. Os resultados da PCR Multiplex revelaram duas bandas distintas, características das espécies C. gasar e C. rhizophorae num total de 135 amostras analisadas. No sequenciamento do gene COI de 98 amostras obteve-se fragmentos de 695 pb e 15 haplótipos para C. gasar e de 640 pb e oito haplótipos para C. rhizophorae. A árvore haplótipica agrupou fortemente as duas espécies em clados diferentes com 100% de bootstrap. Divergências intraespecíficas foram de 0,2% para ambas, e a interespecífica de 23,6%. A similaridade das sequencias deste estudo com sequências presentes no BoldSystems variou de 97,01 a 98,37 para C. rhizophorae e de 97,55 a 99,84 tanto para C. gasar como para C. brasiliana, reforçando uma problemática na taxonomia do grupo, que apontam para a sinonimia dessas espécies. Portanto, o DNA barcoding permitiu identificar as amostras coletadas e confirmou a existência de duas espécies de ostras.(AU)

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Oysters are found along the whole coast of Brazil. The phenotypes of the species vary considerably according to the characteristics of the habitat. The present study investigated the existence of different oyster species of the genus Crassostrea on the coast of Maranhão, using the Multiplex PCR technique and DNA Barcoding. The results of the Multiplex PCR revealed two distinct bands characteristic of the species C. gasar and C. rhizophorae in a total of 135 samples analyzed. The sequencing of the COI gene of 98 samples produced a 695 bp fragment and 15 haplotypes for C. gasar and 640 bp and eight haplotypes for C. rhizophorae. The haplotype tree divided the two species clearly into different clades with 100% bootstrap support. Intraspecific genetic divergence was 0.2% in both species, while interspecific divergence was 23.6%. The similarity between the sequences generated and those available in BoldSystems ranged from 97.01% to 98.37% for C. rhizophorae and from 97.55% to 99.84% for both C. gasar and C. brasiliana, reinforcing the taxonomic problems in this group, which supports the synonymization of these species. The DNA barcoding permitted the reliable identification of the samples and confirmed the existence of two species of oyster in the study area.

As ostras são encontradas ao longo de toda a costa do Brasil. Os fenótipos das espécies variam consideravelmente de acordo com as características do habitat. O presente estudo investigou a existência de diferentes espécies de ostra do gênero Crassostrea no litoral do Maranhão, utilizando a técnica de PCR Multiplex e DNA barcoding. Os resultados da PCR Multiplex revelaram duas bandas distintas, características das espécies C. gasar e C. rhizophorae num total de 135 amostras analisadas. No sequenciamento do gene COI de 98 amostras obteve-se fragmentos de 695 pb e 15 haplótipos para C. gasar e de 640 pb e oito haplótipos para C. rhizophorae. A árvore haplótipica agrupou fortemente as duas espécies em clados diferentes com 100% de bootstrap. Divergências intraespecíficas foram de 0,2% para ambas, e a interespecífica de 23,6%. A similaridade das sequencias deste estudo com sequências presentes no BoldSystems variou de 97,01 a 98,37 para C. rhizophorae e de 97,55 a 99,84 tanto para C. gasar como para C. brasiliana, reforçando uma problemática na taxonomia do grupo, que apontam para a sinonimia dessas espécies. Portanto, o DNA barcoding permitiu identificar as amostras coletadas e confirmou a existência de duas espécies de ostras.

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The purpose of this study was to evaluate the effect of salinity on the growth and survival of the mangrove oyster Crassostrea gasar. A laboratory trial was conducted in 10 treatments, each in triplicate, corresponding to rising values of salinity at intervals of 5 in the range of 5-50, totaling 30 experimental units. The survival and growth of the oysters were significantly influenced by salinity. A high survival of oysters in the salinity range between 10 and 45 was found. Significantly higher survival rates were obtained at salinities of 20 and 25, while at 5 there was lower survival rates. The final mean shell size and live weight of the oysters were significantly higher at a salinity of 25, while the lowest growth was registered at 5 and 50. The results suggest that the C. gasar oyster is resistant to a broad salinity range, and can be cultivated in marine regions or estuary environments that do not have salinities equal or lower than 5.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da salinidade sobre o crescimento e a sobrevivência da ostra-do-mangue Crassostrea gasar. Em laboratório foi realizado ensaio com 10 tratamentos em triplicata, correspondentes a valores crescentes de salinidade em intervalos de 5, na faixa de 5 a 50, perfazendo 30 unidades experimentais. A sobrevivência e o crescimento das ostras foram influenciados significativamente pela salinidade. Observou-se elevada sobrevivência das ostras na faixa de salinidade entre 10 e 45. Valores significativamente superiores de sobrevivência foram obtidos nas salinidades de 20 e 25, enquanto em 5, registraram-se menores porcentagens de sobrevivência. As médias finais de tamanho de concha e de peso vivo das ostras foram significativamente superiores na salinidade de 25, enquanto que os menores valores de crescimento foram registrados em 5 e 50, em relação aos obtidos nas outras salinidades. Os resultados sugerem que a ostra C. gasar é resistente a uma ampla faixa de salinidade, podendo ser cultivada em áreas marinhas ou ambientes estuarinos que não apresentem salinidades iguais ou inferiores a 5.(AU)

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The purpose of this study was to evaluate the effect of salinity on the growth and survival of the mangrove oyster Crassostrea gasar. A laboratory trial was conducted in 10 treatments, each in triplicate, corresponding to rising values of salinity at intervals of 5 in the range of 5-50, totaling 30 experimental units. The survival and growth of the oysters were significantly influenced by salinity. A high survival of oysters in the salinity range between 10 and 45 was found. Significantly higher survival rates were obtained at salinities of 20 and 25, while at 5 there was lower survival rates. The final mean shell size and live weight of the oysters were significantly higher at a salinity of 25, while the lowest growth was registered at 5 and 50. The results suggest that the C. gasar oyster is resistant to a broad salinity range, and can be cultivated in marine regions or estuary environments that do not have salinities equal or lower than 5.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da salinidade sobre o crescimento e a sobrevivência da ostra-do-mangue Crassostrea gasar. Em laboratório foi realizado ensaio com 10 tratamentos em triplicata, correspondentes a valores crescentes de salinidade em intervalos de 5, na faixa de 5 a 50, perfazendo 30 unidades experimentais. A sobrevivência e o crescimento das ostras foram influenciados significativamente pela salinidade. Observou-se elevada sobrevivência das ostras na faixa de salinidade entre 10 e 45. Valores significativamente superiores de sobrevivência foram obtidos nas salinidades de 20 e 25, enquanto em 5, registraram-se menores porcentagens de sobrevivência. As médias finais de tamanho de concha e de peso vivo das ostras foram significativamente superiores na salinidade de 25, enquanto que os menores valores de crescimento foram registrados em 5 e 50, em relação aos obtidos nas outras salinidades. Os resultados sugerem que a ostra C. gasar é resistente a uma ampla faixa de salinidade, podendo ser cultivada em áreas marinhas ou ambientes estuarinos que não apresentem salinidades iguais ou inferiores a 5.

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