RESUMO
A progesterona é um hormônio fundamental na manutenção da gestação nos mamíferos. Em bovinos clonados, perdas gestacionais significativas ocorrem devido à deficiência placentária. Tendo em vista esse problema, o objetivo do trabalho foi analisar em diferentes idades gestacionais a imunolocalização para receptores de progesterona em placentas de animais não clonados e clonados. Tecidos placentomais de bovinos não clonados foram obtidos da linha de abate no Matadouro Mantiqueira, enquanto os tecidos placentomais dos animais clonados com idades gestacionais de 68, 135, 225 e 270 dias de gestação foram obtidos em empresas especializadas em clonagem animal. Os tecidos foram processados e embebidos em paraplast para localização de receptores de progesterona, utilizando-se a técnica de imuno-histoquímica pelo anticorpo monoclonal (Progesterone receptor SER 294). Pela imuno-histoquímica, comparando-se a concentração de receptores de progesterona na placenta de animais clonados com as de animais não clonados, em diferentes idades gestacionais, observou-se que as células dos placentomas dos animais clonados apresentaram uma marcação mais intensa de receptor de progesterona nas idades de 135 e 270 dias de gestação em relação aos não clonados. Tal fato sugere que a presença de progesterona no final da gestação pode ser mais uma das possíveis causas de gestações prolongadas.
To progesterone is a fundamental hormone in the maintenance of the gestation in the mammals. In bovine they cloned, losses gestational significant, occur due to the placental deficiency. Having in mind that problem, the objective of the work was analyze in different gestational ages to immune stained for receivers of progesterone in placentas of normal animals and cloned. Placentomal tissues of bovine normal were obtained of the line of counts on in the Slaughterhouse Mantiqueira, while the placentomal tissues of the animals cloned with gestational ages of 68, 135, 225 and 270 days of gestation were obtained in companies specialized in animal cloning. The fabrics were prosecuted and absorbed in paraplast for progesterone receivers location, utilizing itself to technical of immunohistochemistry by the antibody monoclonal (Progesterone receiver BE 294). By the immunohistochemistry comparing the progesterone receivers concentration in the placenta of animals cloned, with the of animals done not manipulate, in different gestational ages we observe that the cells of the placentomal tissues of the animals manipulated (cloned) presented a more intense marking of receiver of progesterone in the ages of 135 and 270 days of gestation regarding the done not manipulate. Suggesting that the presence of progesterone in the end of the gestation can be more one of the possible cause of gestations prolonged.
Assuntos
Feminino , Animais , Bovinos , Células Clonais/enzimologia , Células Clonais/imunologia , Hormônios Placentários/deficiência , Imuno-Histoquímica/veterinária , Receptores de Progesterona/imunologia , Esteroides/imunologiaRESUMO
A progesterona é um hormônio fundamental na manutenção da gestação nos mamíferos. Em bovinos clonados, perdas gestacionais significativas ocorrem devido à deficiência placentária. Tendo em vista esse problema, o objetivo do trabalho foi analisar em diferentes idades gestacionais a imunolocalização para receptores de progesterona em placentas de animais não clonados e clonados. Tecidos placentomais de bovinos não clonados foram obtidos da linha de abate no Matadouro Mantiqueira, enquanto os tecidos placentomais dos animais clonados com idades gestacionais de 68, 135, 225 e 270 dias de gestação foram obtidos em empresas especializadas em clonagem animal. Os tecidos foram processados e embebidos em paraplast para localização de receptores de progesterona, utilizando-se a técnica de imuno-histoquímica pelo anticorpo monoclonal (Progesterone receptor SER 294). Pela imuno-histoquímica, comparando-se a concentração de receptores de progesterona na placenta de animais clonados com as de animais não clonados, em diferentes idades gestacionais, observou-se que as células dos placentomas dos animais clonados apresentaram uma marcação mais intensa de receptor de progesterona nas idades de 135 e 270 dias de gestação em relação aos não clonados. Tal fato sugere que a presença de progesterona no final da gestação pode ser mais uma das possíveis causas de gestações prolongadas.(AU)
To progesterone is a fundamental hormone in the maintenance of the gestation in the mammals. In bovine they cloned, losses gestational significant, occur due to the placental deficiency. Having in mind that problem, the objective of the work was analyze in different gestational ages to immune stained for receivers of progesterone in placentas of normal animals and cloned. Placentomal tissues of bovine normal were obtained of the line of counts on in the Slaughterhouse Mantiqueira, while the placentomal tissues of the animals cloned with gestational ages of 68, 135, 225 and 270 days of gestation were obtained in companies specialized in animal cloning. The fabrics were prosecuted and absorbed in paraplast for progesterone receivers location, utilizing itself to technical of immunohistochemistry by the antibody monoclonal (Progesterone receiver BE 294). By the immunohistochemistry comparing the progesterone receivers concentration in the placenta of animals cloned, with the of animals done not manipulate, in different gestational ages we observe that the cells of the placentomal tissues of the animals manipulated (cloned) presented a more intense marking of receiver of progesterone in the ages of 135 and 270 days of gestation regarding the done not manipulate. Suggesting that the presence of progesterone in the end of the gestation can be more one of the possible cause of gestations prolonged.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Hormônios Placentários/deficiência , /química , Receptores de Progesterona/imunologia , Células Clonais/enzimologia , Células Clonais/imunologia , Imuno-Histoquímica/veterinária , Esteroides/imunologiaRESUMO
Foram avaliados dois protocolos de administração, em ratos sadios, de uma solução de fatores hepatotróficos (FH), composta por aminoácidos, vitaminas, sais minerais, glicose, insulina, glucagon e triiodotironina (T3). A solução foi administrada durante 10 dias, 40mg/kg/dia, i.p., em duas, grupo 2xFH (n=15), ou três doses, grupo 3xFH (n=15), diárias. Foram observados os efeitos na proliferação celular dos hepatócitos, na angiogênese e na matriz extracelular hepática, assim como as possíveis reações adversas. Os animais dos grupos 2xFH e 3xFH apresentaram aumento da massa hepática de 30,1 por cento e 22,5 por cento, respectivamente, em relação ao grupo-controle (CT; n=15). O índice de proliferação hepatocelular foi maior nos grupos 2xFH (1,4 por cento) e 3xFH (1,2 por cento) em relação ao grupo CT (0,53 por cento), e a densitometria relativa do fator de crescimento do endotélio vascular pelo imunoblot não revelou diferença estatística entre os três grupos. Nos grupos 2xFH e 3xFH, houve redução do colágeno intersticial em relação ao grupo CT. A solução de FH estimulou o crescimento hepático e reduziu o volume de colágeno perissinusoidal. A administração em três doses diárias resultou em mortalidade de 26,7 por cento, possivelmente pelo excessivo estresse da manipulação e pela menor adaptação fisiológica dos ratos, o que não ocorreu nos grupos 2xFH e CT. Para esse tipo de abordagem em ratos, o procedimento experimental mais apropriado, seguro, com melhor chance de adaptação dos animais e com resultados significativos é a aplicação dos FH em duas doses diárias.
Two protocols of hepatotrophic factors (HF) administration, in solution composed by aminoacids, vitamins, mineral salts, glucose, insulin, glucagon, and triiodothyronine were evaluated in healthy rats. This solution was administered for 10 days, (40mg/kg/day) i.p., in two (group 2xFH; n=15) or three daily doses (group 3xFH n=15). The effects on hepatocytes cell proliferation, angiogenesis, and hepatic extracellular matrix, and also possible adverse reactions were analyzed. Animals of groups 2xFH and 3xFH presented an increase in hepatic mass of 30.1 percent and 22.5 percent, respectively, when compared rats of control group (CT; n=15). Hepatocellular proliferation index was higher in rats of groups 2xFH (1.4 percent) and 3xFH (1.2 percent) when compared to CT group animals (0.53 percent), and the relative densitometry of the vascular endothelial growth factor analyzed with immunoblot did not show a significant difference among the three groups. Rats of groups 2xFH and 3xFH showed a reduction of interstitial collagen when compared to CT rats. HF solution stimulated hepatic growth and reduced the volume of perisinusoidal collagen. Administration in three daily doses resulted in 26.7 percent mortality, possibly due to excessive stress from manipulation and lower physiological adaptation of rats, which did not occur in rats of groups 2xFH and CT. The more appropriate and safer experimental procedure for this approach in rats with higher chance of animal adaptation and significant results is the application of HF in two daily doses.
Assuntos
Animais , Ratos , Fígado , Nutrição Parenteral/veterinária , Suplementos Nutricionais/efeitos adversos , Colágeno/análise , Fígado/anatomia & histologia , Proliferação de Células , RatosRESUMO
Foram avaliados dois protocolos de administração, em ratos sadios, de uma solução de fatores hepatotróficos (FH), composta por aminoácidos, vitaminas, sais minerais, glicose, insulina, glucagon e triiodotironina (T3). A solução foi administrada durante 10 dias, 40mg/kg/dia, i.p., em duas, grupo 2xFH (n=15), ou três doses, grupo 3xFH (n=15), diárias. Foram observados os efeitos na proliferação celular dos hepatócitos, na angiogênese e na matriz extracelular hepática, assim como as possíveis reações adversas. Os animais dos grupos 2xFH e 3xFH apresentaram aumento da massa hepática de 30,1 por cento e 22,5 por cento, respectivamente, em relação ao grupo-controle (CT; n=15). O índice de proliferação hepatocelular foi maior nos grupos 2xFH (1,4 por cento) e 3xFH (1,2 por cento) em relação ao grupo CT (0,53 por cento), e a densitometria relativa do fator de crescimento do endotélio vascular pelo imunoblot não revelou diferença estatística entre os três grupos. Nos grupos 2xFH e 3xFH, houve redução do colágeno intersticial em relação ao grupo CT. A solução de FH estimulou o crescimento hepático e reduziu o volume de colágeno perissinusoidal. A administração em três doses diárias resultou em mortalidade de 26,7 por cento, possivelmente pelo excessivo estresse da manipulação e pela menor adaptação fisiológica dos ratos, o que não ocorreu nos grupos 2xFH e CT. Para esse tipo de abordagem em ratos, o procedimento experimental mais apropriado, seguro, com melhor chance de adaptação dos animais e com resultados significativos é a aplicação dos FH em duas doses diárias.(AU)
Two protocols of hepatotrophic factors (HF) administration, in solution composed by aminoacids, vitamins, mineral salts, glucose, insulin, glucagon, and triiodothyronine were evaluated in healthy rats. This solution was administered for 10 days, (40mg/kg/day) i.p., in two (group 2xFH; n=15) or three daily doses (group 3xFH n=15). The effects on hepatocytes cell proliferation, angiogenesis, and hepatic extracellular matrix, and also possible adverse reactions were analyzed. Animals of groups 2xFH and 3xFH presented an increase in hepatic mass of 30.1 percent and 22.5 percent, respectively, when compared rats of control group (CT; n=15). Hepatocellular proliferation index was higher in rats of groups 2xFH (1.4 percent) and 3xFH (1.2 percent) when compared to CT group animals (0.53 percent), and the relative densitometry of the vascular endothelial growth factor analyzed with immunoblot did not show a significant difference among the three groups. Rats of groups 2xFH and 3xFH showed a reduction of interstitial collagen when compared to CT rats. HF solution stimulated hepatic growth and reduced the volume of perisinusoidal collagen. Administration in three daily doses resulted in 26.7 percent mortality, possibly due to excessive stress from manipulation and lower physiological adaptation of rats, which did not occur in rats of groups 2xFH and CT. The more appropriate and safer experimental procedure for this approach in rats with higher chance of animal adaptation and significant results is the application of HF in two daily doses.(AU)
Assuntos
Animais , Ratos , Suplementos Nutricionais/efeitos adversos , Fígado , Nutrição Parenteral/veterinária , Proliferação de Células , Colágeno/análise , Fígado/anatomia & histologia , RatosRESUMO
Hepatic progenitor cells (HPCs) are bipotential stem cells residing in human and animal livers that are able to differentiate towards the hepatocytic or cholangiocytic lineages. HPCs are present in both hepatocellular (HCC) and cholangiocellular carcinoma (CC) in humans; and a small percentage of HCC can originate from cancer stem cells. However, its distribution in canine liver tumour has not been studied. Herein, we searched for stem/progenitor cells in 13 HCC and 7 CC archived samples by immunohistochemical analysis. We found that both liver tumours presented a higher amount of K19-positive HPCs. Besides, 61.6% of HCC cases presented immature CD44-positive hepatocytes. Nevertheless, only two cases presented CD133-positive cells. As observed in humans, hepatic canine tumours presented activated HPCs, with important differentiation onto hepatocytes-like cells and minimal role of cancer stem cells on HCC. These findings reiterate the applicability of canine model in the search for new therapies before application in humans.
Assuntos
Neoplasias dos Ductos Biliares/veterinária , Ductos Biliares Intra-Hepáticos , Carcinoma Hepatocelular/veterinária , Colangiocarcinoma/veterinária , Doenças do Cão/patologia , Neoplasias Hepáticas/veterinária , Células-Tronco/patologia , Antígeno AC133 , Animais , Antígenos CD/imunologia , Neoplasias dos Ductos Biliares/patologia , Ductos Biliares Intra-Hepáticos/patologia , Transformação Celular Neoplásica/patologia , Colangiocarcinoma/patologia , Modelos Animais de Doenças , Cães , Glicoproteínas/imunologia , Humanos , Receptores de Hialuronatos/imunologia , Queratina-19/imunologia , Neoplasias Hepáticas/patologia , Peptídeos/imunologia , Antígeno Nuclear de Célula em Proliferação/metabolismoRESUMO
Nutritional substances associated to some hormones enhance liver regeneration when injected intraperitoneally, being denominated hepatotrophic factors (HF). Here we verified if a solution of HF (glucose, vitamins, salts, amino acids, glucagon, insulin, and triiodothyronine) can revert liver cirrhosis and how some extracellular matrices are affected. Cirrhosis was induced for 14 weeks in 45 female Wistar rats (200 mg) by intraperitoneal injections of thioacetamide (200 mg/kg). Twenty-five rats received intraperitoneal HF twice a day for 10 days (40 mL·kg-1·day-1) and 20 rats received physiological saline. Fifteen rats were used as control. The HF applied to cirrhotic rats significantly: a) reduced the relative mRNA expression of the genes: Col-α1 (-53 percent), TIMP-1 (-31.7 percent), TGF-β1 (-57.7 percent), and MMP-2 (-41.6 percent), whereas Plau mRNA remained unchanged; b) reduced GGT (-43.1 percent), ALT (-17.6 percent), and AST (-12.2 percent) serum levels; c) increased liver weight (11.3 percent), and reduced liver collagen (-37.1 percent), regenerative nodules size (-22.1 percent), and fibrous septum thickness. Progranulin protein (immunohistochemistry) and mRNA (in situ hybridization) were found in fibrous septa and areas of bile duct proliferation in cirrhotic livers. Concluding, HF improved the histology and serum biochemistry of liver cirrhosis, with an important reduction of interstitial collagen and increased extracelullar matrix degradation by reducing profibrotic gene expression.
Assuntos
Animais , Feminino , Ratos , Matriz Extracelular/metabolismo , Cirrose Hepática Experimental/terapia , Apoio Nutricional/métodos , Soluções/uso terapêutico , Aminoácidos/administração & dosagem , Aminoácidos/uso terapêutico , Glucose/administração & dosagem , Glucose/uso terapêutico , Hormônios/administração & dosagem , Hormônios/uso terapêutico , Imuno-Histoquímica , Hibridização In Situ , Injeções Intraperitoneais , Cirrose Hepática Experimental/metabolismo , Cirrose Hepática Experimental/patologia , Ratos Wistar , Sais/administração & dosagem , Sais/uso terapêutico , Soluções/administração & dosagem , Tioacetamida , Vitaminas/administração & dosagem , Vitaminas/uso terapêuticoRESUMO
Nutritional substances associated to some hormones enhance liver regeneration when injected intraperitoneally, being denominated hepatotrophic factors (HF). Here we verified if a solution of HF (glucose, vitamins, salts, amino acids, glucagon, insulin, and triiodothyronine) can revert liver cirrhosis and how some extracellular matrices are affected. Cirrhosis was induced for 14 weeks in 45 female Wistar rats (200 mg) by intraperitoneal injections of thioacetamide (200 mg/kg). Twenty-five rats received intraperitoneal HF twice a day for 10 days (40 mL.kg-1.day-1) and 20 rats received physiological saline. Fifteen rats were used as control. The HF applied to cirrhotic rats significantly: a) reduced the relative mRNA expression of the genes: Col-alpha1 (-53%), TIMP-1 (-31.7%), TGF-beta1 (-57.7%), and MMP-2 (-41.6%), whereas Plau mRNA remained unchanged; b) reduced GGT (-43.1%), ALT (-17.6%), and AST (-12.2%) serum levels; c) increased liver weight (11.3%), and reduced liver collagen (-37.1%), regenerative nodules size (-22.1%), and fibrous septum thickness. Progranulin protein (immunohistochemistry) and mRNA (in situ hybridization) were found in fibrous septa and areas of bile duct proliferation in cirrhotic livers. Concluding, HF improved the histology and serum biochemistry of liver cirrhosis, with an important reduction of interstitial collagen and increased extracelullar matrix degradation by reducing profibrotic gene expression.