RESUMO
Aiming to study the effect of glutathione peroxidase (GPx) and cysteine (Cis) addition in Botu-Sêmen® and ACP-105® diluents on integrity of equine spermatozoa, semen samples were cooling (14 C) and analyzed for total motility (TM), vigor, membrane integrity (iM) and acrosome (iAC), and mitochondrial membrane potential (MMP), after 0 (T0), 12 (T12) and 24 (T24) hours of cooling. Analysis of TM in T12 demonstrated that semen samples diluted in Botu-sêmen® (G1) and Botu-sêmen®+GPx+ Cis (G7) had higher (P 0.05) percentage than those diluted in ACP-105®+ Cis (G6). At T24, samples diluted in G7 had higher MT (P 0.05) than those in G2 and G6. Sperm vigor in T12 was higher (P<0.05) in samples diluted at G7 than in G2 and G6. At T24, the vigor of samples diluted G4 and G7 was higher (P<0.05) than inG2 and G6. No significant difference were observed to iM and MMP among groups, except to MMP at T0 was higher (P<0.05) in G1 than G7 and G8. At T24 the iAC parameter was higher (P<0.05) in the G6 than in G1. It can be concluded that GPx (5U) and Cis (5mM) in association preserves equine spermatozoa diluted in Botu-sêmen® at 14C during 24 hours.
Visando estudar o efeito da adição de glutationa peroxidase (GPx) e cisteína (Cis) aos diluentes Botu-Sêmen® e ACP-105® na viabilidade de espermatozoides equinos, amostras de sêmen foram refrigeradas (14 ºC) e analisadas quanto à motilidade total (MT), vigor, integridade de membrana (iM) e de acrossoma (iAc), e potencial da membrana mitocondrial (PMM), após0 (T0), 12 (T12) e 24 (T24) horas de refrigeração. A análise da MT evidenciou no T12 que as amostras de sêmen dos grupos Botu-sêmen® (G1) e Botu-sêmen®+GPx+Cist (G7) apresentaram maiores (P0,05) entre grupos, com exceção do PMM que no T0 foi maior (P<0,05) no G1 do que no G7 e no G8. A iAc no T24 foi maior (P<0,05) no G6 do que no G1. Conclui-se que a associação de GPx (5 U) e Cist (5 mM) preserva espermatozoides equinos diluídos em Botu-sêmen® refrigerados (14 oC) durante 24 horas.
Assuntos
Masculino , Animais , Cavalos , Cisteína , Espermatozoides , Glutationa Peroxidase , Refrigeração/veterinária , Antioxidantes , Motilidade dos Espermatozoides , Preservação do Sêmen/veterináriaRESUMO
Aiming to study the effect of glutathione peroxidase (GPx) and cysteine (Cis) addition in Botu-Sêmen® and ACP-105® diluents on integrity of equine spermatozoa, semen samples were cooling (14 C) and analyzed for total motility (TM), vigor, membrane integrity (iM) and acrosome (iAC), and mitochondrial membrane potential (MMP), after 0 (T0), 12 (T12) and 24 (T24) hours of cooling. Analysis of TM in T12 demonstrated that semen samples diluted in Botu-sêmen® (G1) and Botu-sêmen®+GPx+ Cis (G7) had higher (P 0.05) percentage than those diluted in ACP-105®+ Cis (G6). At T24, samples diluted in G7 had higher MT (P 0.05) than those in G2 and G6. Sperm vigor in T12 was higher (P<0.05) in samples diluted at G7 than in G2 and G6. At T24, the vigor of samples diluted G4 and G7 was higher (P<0.05) than inG2 and G6. No significant difference were observed to iM and MMP among groups, except to MMP at T0 was higher (P<0.05) in G1 than G7 and G8. At T24 the iAC parameter was higher (P<0.05) in the G6 than in G1. It can be concluded that GPx (5U) and Cis (5mM) in association preserves equine spermatozoa diluted in Botu-sêmen® at 14C during 24 hours.(AU)
Visando estudar o efeito da adição de glutationa peroxidase (GPx) e cisteína (Cis) aos diluentes Botu-Sêmen® e ACP-105® na viabilidade de espermatozoides equinos, amostras de sêmen foram refrigeradas (14 ºC) e analisadas quanto à motilidade total (MT), vigor, integridade de membrana (iM) e de acrossoma (iAc), e potencial da membrana mitocondrial (PMM), após0 (T0), 12 (T12) e 24 (T24) horas de refrigeração. A análise da MT evidenciou no T12 que as amostras de sêmen dos grupos Botu-sêmen® (G1) e Botu-sêmen®+GPx+Cist (G7) apresentaram maiores (P<0,05) percentuais do que no grupo ACP-105®+Cist (G6). No T24, as amostras do G7 apresentaram maior (P 0,05) MT do que as diluídas em ACP-105® (G2) e ACP-105®+- Cist (G6). O vigor espermático no T12 foi maior (P<0,05) no G7 do que no G2 e G6. No T24, o vigor das amostras do G4 e G7 foi maior (P<0,05) do que nas do G2 e G6. A iM e o PMM não diferiram (P>0,05) entre grupos, com exceção do PMM que no T0 foi maior (P<0,05) no G1 do que no G7 e no G8. A iAc no T24 foi maior (P<0,05) no G6 do que no G1. Conclui-se que a associação de GPx (5 U) e Cist (5 mM) preserva espermatozoides equinos diluídos em Botu-sêmen® refrigerados (14 oC) durante 24 horas.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Glutationa Peroxidase , Cisteína , Espermatozoides , Refrigeração/veterinária , Cavalos , Antioxidantes , Motilidade dos Espermatozoides , Preservação do Sêmen/veterináriaRESUMO
Com o objetivo de avaliar o efeito da adição dos antioxidantes Trolox e Glutationa reduzida (GSH) na viabilidade in vitro de espermatozoides criopreservados de cães, amostras de sêmen foram colhidas de animais das raças Buldogue Francês (n=1), Basset Hound (n=2) e Rottweiler (n=1), por meio de manipulação digital. A seguir, procedeu-se à avaliação macroscópica e microscópica e divisão do volume de sêmen em alíquotas, de acordo com os experimentos e grupos experimentais, utilizando-se diferentes concentrações de Trolox (200 e 300 µM/L) ou GSH (2 e 5 µM/L). As amostras foram envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina de congelação e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelação a 37 ºC (60 seg) e incubação durante 60 minutos, constatou-se que os resultados de motilidade, vigor e espermatozoides com acrossomas íntegros evidenciaram diferença significativa (P<0,05) apenas entre os tempos de incubação, nos três experimentos. No Exp. 2, a adição de 2 e 5 µM/L de GSH (G2 e G3) determinou maior (P<0,05) porcentual de células sem estresse oxidativo. Concluiu-se que GSH, nas concentrações de 2 e 5 µM/L, pode ser adicionada ao diluente de criopreservação do sêmen de cães.(AU)
In order to evaluate the effect of adding Trolox and Glutathione reduced antioxidants on the in vitro viability of dog cryopreserved sperm, semen samples were harvested from animals of French Bulldog (n=1), Basset Hound (n=2) and Rottweiler (n=1) breeds, through digital manipulation. After macroscopic and microscopic evaluation, the volume of semen was divided in aliquots, according to the experiments and experimental groups, using different concentrations of Trolox (200 and 300 µM/L) or GSH (2 and 5 µM/L). The samples were packaged in straws (0.25 mL), cryopreserved in freezing machine and stored in liquid nitrogen. After thawing at 37ºC (60 sec) and incubation during 60 minutes, we verified that motility, vigor and sperm with intact acrosomes showed significant difference (P<0.05) only among incubation times, on the three experiments. In Exp. 2, the addition of 2 and 5 µM/L of GSH (G2 and G3) determined higher (P<0.05) percentage of sperm without oxidative stress. Therefore, we could conclude that GSH, on the concentration of 2 and 5 µM/L, can be added to diluent of dog semen cryopreservation.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Cães , Criopreservação/veterinária , Antioxidantes/administração & dosagem , Sêmen/efeitos dos fármacos , Técnicas In Vitro/veterináriaRESUMO
Com o objetivo de avaliar o efeito da adição dos antioxidantes Trolox e Glutationa reduzida (GSH) na viabilidade in vitro de espermatozoides criopreservados de cães, amostras de sêmen foram colhidas de animais das raças Buldogue Francês (n=1), Basset Hound (n=2) e Rottweiler (n=1), por meio de manipulação digital. A seguir, procedeu-se à avaliação macroscópica e microscópica e divisão do volume de sêmen em alíquotas, de acordo com os experimentos e grupos experimentais, utilizando-se diferentes concentrações de Trolox (200 e 300 µM/L) ou GSH (2 e 5 µM/L). As amostras foram envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina de congelação e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelação a 37 ºC (60 seg) e incubação durante 60 minutos, constatou-se que os resultados de motilidade, vigor e espermatozoides com acrossomas íntegros evidenciaram diferença significativa (P<0,05) apenas entre os tempos de incubação, nos três experimentos. No Exp. 2, a adição de 2 e 5 µM/L de GSH (G2 e G3) determinou maior (P<0,05) porcentual de células sem estresse oxidativo. Concluiu-se que GSH, nas concentrações de 2 e 5 µM/L, pode ser adicionada ao diluente de criopreservação do sêmen de cães.
In order to evaluate the effect of adding Trolox and Glutathione reduced antioxidants on the in vitro viability of dog cryopreserved sperm, semen samples were harvested from animals of French Bulldog (n=1), Basset Hound (n=2) and Rottweiler (n=1) breeds, through digital manipulation. After macroscopic and microscopic evaluation, the volume of semen was divided in aliquots, according to the experiments and experimental groups, using different concentrations of Trolox (200 and 300 µM/L) or GSH (2 and 5 µM/L). The samples were packaged in straws (0.25 mL), cryopreserved in freezing machine and stored in liquid nitrogen. After thawing at 37ºC (60 sec) and incubation during 60 minutes, we verified that motility, vigor and sperm with intact acrosomes showed significant difference (P<0.05) only among incubation times, on the three experiments. In Exp. 2, the addition of 2 and 5 µM/L of GSH (G2 and G3) determined higher (P<0.05) percentage of sperm without oxidative stress. Therefore, we could conclude that GSH, on the concentration of 2 and 5 µM/L, can be added to diluent of dog semen cryopreservation.
Assuntos
Masculino , Animais , Cães , Antioxidantes/administração & dosagem , Criopreservação/veterinária , Sêmen/efeitos dos fármacos , Técnicas In Vitro/veterináriaRESUMO
Visando avaliar o efeito da adição de glutationa reduzida (GSH) ao diluente de congelação de sêmen caprino à base de leite desnatado, utilizou-se sêmen de cinco reprodutores Boer. Após colheita e avaliação, procedeu-se à formação do pool dos ejaculados e diluição em leite desnatado e glicerol 7 por cento, acrescido de antioxidantes: G1) Controle; G2) GSH 2mM mL-1; G3) GSH 5mM mL-1 e G4) GSH 7mM mL-1. As amostras foram congeladas em palhetas (0,25mL) e armazenadas a -196°C. Após descongelação, avaliou-se a integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossomal (iAc), potencial de membrana mitocondrial (PMM), cinética e ultraestrutura. Os grupos Controle e GSH (2, 5 e 7mM mL-1) não diferiram (P>0,05) em iMP, iAc, PMM e cinética. Na análise ultraestrutural, os porcentuais de membrana plasmática (cabeça e cauda) e acrossoma íntegros não diferiram (P>0,05) entre grupos. Todavia, o grupo Controle apresentou maior porcentual (P<0,05) de gametas com axonema íntegros do que os de GSH (2, 5 e 7mM mL-1). Maior porcentagem (P<0,05) de espermatozoides com mitocôndrias íntegras foi observada no grupo Controle do que nos de GSH (5 e 7 mM mL-1). Conclui-se que a adição de GSH (2, 5 e 7mM mL-1) em diluente de congelação de sêmen caprino, à base de leite desnatado, não preserva a integridade dos espermatozoides.
Aiming to evaluate in vitro effect of different concentrations of glutathione reduced (GSH) in skimmed-milk and glycerol 7 percent it was used semen from five Boer bucks. After collect and evaluation, a pool of samples was diluted in skimmed-milk and glycerol 7 percent plus antioxidant: G1) Control; G2) GSH 2mM mL-1; G3) GSH 5mM mL-1 and G4) GSH 7mM mL-1. Samples were frozen in straws (0.25mL) and stored at -196°C. After thawing, samples were subjected to integrity of the plasma membrane (iMP) and acrosomal (iAc), mitochondrial membrane potential (MMP), kinematic and ultrastructure analysis. Control and GSH (2, 5 and 7mM mL-1) groups did no differ (P>0.05) in iMP, iAc, PMM and kinematic parameters. In the ultrastructural analysis, percentages of acrosome and plasma membrane (tail and head region) intact did not differ (P>0.05) between groups. However, Control group had higher percentage (P<0.05) of gametes with intact axonemes than those of GSH (2, 5 and 7mM mL-1) groups. Higher percentage (P<0.05) of sperms with intact mitochondrias were observed on Control group than those of GSH (5 and 7mM mL-1). It can be concluded that the GSH (2, 5 and 7mM mL-1) addition in skimmed-milk diluent to freeze goat semen did not preserve sperm integrity.