RESUMO
The Bidder's organ and ovary of the Brazilian toad Bufo ictericus were studied by light microscopy, using hematoxylin-eosin (HE) and periodic acid Schiff (PAS) staining. The expression and distribution of carbohydrate moieties was analyzed by lectin histochemistry, using 8 lectins with different carbohydrate specificities: Ulex europaeus (UEA I), Lens culinaris (LCA), Erythrina cristagalli (ECA), Arachis hypogaea (PNA), Ricinus communis (RCA I), Aleuria aurantia (AAA), Triticum vulgaris (WGA), and Glycine maximum (SBA). The results showed that the Bidderian zona pellucida presented alpha-mannose, alpha-L-fucose, beta-D-galactose, N-acetyl-D-glucosamine, and alpha/beta-N-acetyl-galactosamine residues. The Bidderian follicular cells showed the presence of beta-D-galactose and N-acetyl-D-glucosamine. In the extracellular matrix, alpha-mannose and alpha/beta-N-acetyl-galactosamine residues were detected. The ovarian zona pellucida showed alpha-L-fucose, N-acetyl-D-glucosamine, alpha/beta-N-acetyl-galactosamine residues, and alpha-mannose and N-acetyl-D-glucosamine residues were detected in the follicular cells. Thus, the zona pellucida in both organs contains N-acetyl-D-glucosamine, and alpha/beta-N-acetyl-galactosamine residues. alpha-L-fucose residues were detected in the zona pellucida of both organs, using different lectins. Considering that beta-D-galactose residue was absent from ovary but present in the Bidder's organ, this sugar residue may play an important role in follicle development, blocking the Bidderian follicles and preventing further development of the Bidder's organ into a functional ovary.
O órgão do Bidder e o ovário do sapo Bufo ictericus foram analisados por meio de microscopia de luz, utilizando a coloração pela hematoxilina-eosina (HE) e o método do ácido periódico de Schiff (PAS). A expressão e a distribuição de carboidratos foram verificadas por meio da histoquímica com lectinas, tendo sido utilizadas 8 lectinas com diferentes especificidades para carboidratos (Ulex europaeus (UEA I), Lens culinaris (LCA), Erythrina cristagalli (ECA), Arachis hypogaea (PNA), Ricinus communis (RCA I), Aleuria aurantia (AAA), Triticum vulgaris (WGA) e Glycine maximum (SBA). Os resultados mostraram que a zona pelúcida Bidderiana apresenta resíduos de alfa-mannose, alfa-L-fucose, beta-D-galactose, N-acetilDglicosamine e alfa/beta-N-acetil-galactosamina. As células foliculares Bidderianas mostraram a presença de beta-D-galactose e N-acetil-D-glicosamina. Na matriz de extracelular foram detectados resíduos de alfa-mannose e alfa/beta-N-acetil-galactosamina. Resíduos de alfa-L-fucose, N-acetyl-D-glicosamina e alfa/beta-N-acetil-galactosamina foram evidenciados na zona pelúcida ovariana, enquanto na célula folicular foi detectado o resíduo de alfa-mannose e de N-acetil-D-glicosamina. Assim, a zona pelúcida, em ambos os órgãos, contém resíduos de N-acetil-D-glicosamina e alfa/beta-N-acetil-galactosamina. O resíduo de alfa-L-fucose foi detectado na zona pelúcida de ambos os órgãos, mas utilizando-se diferentes lectinas. Considerando que o resíduo de alfa-D-galactose é ausente no ovário, mas presente no órgão de Bidder, a alfa-D-galactose pode ter um papel importante no controle do desenvolvimento folicular, bloqueando o desenvolvimento dos folículos Bidderianos e impedindo que o órgão de Bidder se transforme em um ovário funcional.
RESUMO
The Bidder's organ and ovary of the Brazilian toad Bufo ictericus were studied by light microscopy, using hematoxylin-eosin (HE) and periodic acid Schiff (PAS) staining. The expression and distribution of carbohydrate moieties was analyzed by lectin histochemistry, using 8 lectins with different carbohydrate specificities: Ulex europaeus (UEA I), Lens culinaris (LCA), Erythrina cristagalli (ECA), Arachis hypogaea (PNA), Ricinus communis (RCA I), Aleuria aurantia (AAA), Triticum vulgaris (WGA), and Glycine maximum (SBA). The results showed that the Bidderian zona pellucida presented alpha-mannose, alpha-L-fucose, beta-D-galactose, N-acetyl-D-glucosamine, and alpha/beta-N-acetyl-galactosamine residues. The Bidderian follicular cells showed the presence of beta-D-galactose and N-acetyl-D-glucosamine. In the extracellular matrix, alpha-mannose and alpha/beta-N-acetyl-galactosamine residues were detected. The ovarian zona pellucida showed alpha-L-fucose, N-acetyl-D-glucosamine, alpha/beta-N-acetyl-galactosamine residues, and alpha-mannose and N-acetyl-D-glucosamine residues were detected in the follicular cells. Thus, the zona pellucida in both organs contains N-acetyl-D-glucosamine, and alpha/beta-N-acetyl-galactosamine residues. alpha-L-fucose residues were detected in the zona pellucida of both organs, using different lectins. Considering that beta-D-galactose residue was absent from ovary but present in the Bidder's organ, this sugar residue may play an important role in follicle development, blocking the Bidderian follicles and preventing further development of the Bidder's organ into a functional ovary.
O órgão do Bidder e o ovário do sapo Bufo ictericus foram analisados por meio de microscopia de luz, utilizando a coloração pela hematoxilina-eosina (HE) e o método do ácido periódico de Schiff (PAS). A expressão e a distribuição de carboidratos foram verificadas por meio da histoquímica com lectinas, tendo sido utilizadas 8 lectinas com diferentes especificidades para carboidratos (Ulex europaeus (UEA I), Lens culinaris (LCA), Erythrina cristagalli (ECA), Arachis hypogaea (PNA), Ricinus communis (RCA I), Aleuria aurantia (AAA), Triticum vulgaris (WGA) e Glycine maximum (SBA). Os resultados mostraram que a zona pelúcida Bidderiana apresenta resíduos de alfa-mannose, alfa-L-fucose, beta-D-galactose, N-acetilDglicosamine e alfa/beta-N-acetil-galactosamina. As células foliculares Bidderianas mostraram a presença de beta-D-galactose e N-acetil-D-glicosamina. Na matriz de extracelular foram detectados resíduos de alfa-mannose e alfa/beta-N-acetil-galactosamina. Resíduos de alfa-L-fucose, N-acetyl-D-glicosamina e alfa/beta-N-acetil-galactosamina foram evidenciados na zona pelúcida ovariana, enquanto na célula folicular foi detectado o resíduo de alfa-mannose e de N-acetil-D-glicosamina. Assim, a zona pelúcida, em ambos os órgãos, contém resíduos de N-acetil-D-glicosamina e alfa/beta-N-acetil-galactosamina. O resíduo de alfa-L-fucose foi detectado na zona pelúcida de ambos os órgãos, mas utilizando-se diferentes lectinas. Considerando que o resíduo de alfa-D-galactose é ausente no ovário, mas presente no órgão de Bidder, a alfa-D-galactose pode ter um papel importante no controle do desenvolvimento folicular, bloqueando o desenvolvimento dos folículos Bidderianos e impedindo que o órgão de Bidder se transforme em um ovário funcional.
RESUMO
The purpose of this work was to evaluate biochemical and serological methods to characterize and identify Candida species from the oral cavity. The strains used were five Candida species previously identified: C. albicans, C. guilliermondii, C. parapsilosis, C. krusei, C. tropicalis, and Kluyveromyces marxianus, as a negative control. The analyses were conducted through the SDS-PAGE associated with statistical analysis using software, chromogenic medium, and CHROMagar Candida (CA), as a differential medium for the isolation and presumptive identification of clinically important yeasts and an enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA), using antisera produced against antigens from two C. albicans strains. This method enabled the screening of the three Candida species: C. albicans, C. tropicalis, and C. Krusei, with 100% of specificity. The ELISA using purified immunoglobulin G showed a high level of cross-reaction against protein extracts of Candida species. The SDS-PAGE method allowed the clustering of species-specific isolates using the Simple Matching coefficient, S SM = 1.0. The protein profile analysis by SDS-PAGE increases what is known about the taxonomic relationships among oral yeasts. This methodology showed good reproducibility and allows collection of useful information for numerical analysis on information relevant to clinical application, and epidemiological and systematical studies.
Este trabalho teve o propósito de avaliar métodos bioquímicos e sorológicos para serem aplicados na caracterização e identificação de linhagens do gênero Candida isoladas da cavidade bucal. As cepas empregadas representam cinco espécies de Candida previamente identificadas: C. albicans, C. guilliermondii, C. parapsilosis, C. krusei e C. tropicalis, utilizando como controle negativo Kluyveromyces marxianus. Foram empregadas as técnicas de gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) associado à análise estatística em software, CHROMagar Candida (CA), meio cromogênico diferencial descrito para o isolamento e identificação presuntiva de leveduras de importância clínica e um ensaio de imunoabsorção ligado a enzima (ELISA), utilizando antissoro produzido contra extratos protéicos de uma linhagem-padrão de Candida e um isolado de cavidade oral de C. albicans. O método mostrou-se adequado para a identificação presuntiva de C. albicans, C. tropicalis e C. krusei, com 100% de sensibilidade e especificidade, com base na coloração e textura das colônias. O método de ELISA utilizando imunoglobulinas G purificadas apresentou alto teor de reação cruzada com as outras espécies de Candida estudadas. A análise do perfil protéico por SDS-PAGE permitiu agrupar os isolados da cavidade oral por intermédio do coeficiente "Simple Matching", S SM = 1,0. Os perfis protéicos analisados por SDS-PAGE ampliam os conhecimentos sobre as relações taxonômicas de leveduras isoladas da cavidade oral. Esta metodologia demonstra boa reprodutibilidade e origina informações úteis para aplicação clínica e estudos que envolvem a sistemática e a epidemiologia.