RESUMEN
Genetic factors influence susceptibility to Paracoccidioidomycosis, a Latin American endemic mycosis. The pattern of susceptibility of congenic mouse strains infected with Paracoccidioides brasiliensis resembles the pattern of the Nramp1 gene. Thus, congenic murine bone-marrow-derived macrophage lines B10R (Nramp1rGly169) and B10S (null Nramp1 protein expression, Nramp1sAsp169) were infected with P. brasiliensis conidia and compared, under opsonic and nonopsonic conditions. Opsonization increased the percentage of phagocytosis by both cell lines. B10R macrophages exhibited a higher percentage of cells with associated conidia and higher number of conidia per macrophage than B10S. Heat-inactivation and EDTA treatment of serum used for opsonization, and treatment of macrophages with anti-complement receptor 3 (CR3) decreased phagocytosis by both cell lines. alpha-methyl-d-mannoside reduced phagocytosis by B10R macrophages, suggesting that the mannose receptor participates in phagocytosis by these cells. The CR3 expression was similar on both cell lines and B10R expressed more mannose receptors, but neither cell line expressed CR1. IFNgamma decreased the conversion of conidia to the yeast form of P. brasiliensis in B10R, but not in B10S macrophages.
Asunto(s)
Proteínas de Transporte de Catión/inmunología , Complemento C3/inmunología , Lectinas Tipo C/inmunología , Macrófagos/inmunología , Lectinas de Unión a Manosa/inmunología , Paracoccidioides/inmunología , Receptores de Superficie Celular/inmunología , Animales , Antígeno CD11b/biosíntesis , Antígeno CD11b/inmunología , Proteínas de Transporte de Catión/genética , Línea Celular , Complemento C3/metabolismo , Predisposición Genética a la Enfermedad , Lectinas Tipo C/metabolismo , Antígeno de Macrófago-1/biosíntesis , Antígeno de Macrófago-1/inmunología , Macrófagos/efectos de los fármacos , Receptor de Manosa , Lectinas de Unión a Manosa/metabolismo , Metilmanósidos/farmacología , Ratones , Ratones Congénicos , Paracoccidioides/genética , Paracoccidioidomicosis/genética , Paracoccidioidomicosis/inmunología , Paracoccidioidomicosis/microbiología , Fagocitosis/efectos de los fármacos , Fagocitosis/genética , Fagocitosis/fisiología , Receptores de Superficie Celular/metabolismo , Receptores de Complemento 3b/antagonistas & inhibidores , Receptores de Complemento 3b/inmunologíaRESUMEN
The importance of complement activation and naturally occurring anti-pig antibodies in the hyperacute rejection (HAR) observed in models of pig-to-human xenotransplantation is well established. To overcome this, much effort has been dedicated to preparing transgenic pigs by knocking out Galalpha(1-3)Gal expression in these animals, or knocking in the expression of human complement regulatory proteins (CRPs), such as CD59 or decay accelerating factor. A soluble form of another membrane CRP, complement receptor type 1 (CR1), has also been shown to inhibit complement activation. Here, we show that transfection of a pig endothelial cell line with a truncated form of human soluble complement receptor 1 (sCR1) almost completely protected these cells from complement-mediated lysis by human AB serum. Pigs genetically manipulated to express human sCR1 may represent an additional strategy to inhibit HAR of pig-to-human transplanted organs.
Asunto(s)
Muerte Celular , Células Endoteliales/metabolismo , Rechazo de Injerto/prevención & control , Receptores de Complemento/metabolismo , Suero/metabolismo , Animales , Animales Modificados Genéticamente , Línea Celular , Activación de Complemento , Células Endoteliales/citología , Humanos , Receptores de Complemento/genética , Receptores de Complemento 3b/inmunología , Porcinos , Transfección , Trasplante HeterólogoRESUMEN
Blood monocyte phagocytic functions were evaluated by chemotaxis, phagocytosis, and superoxide anion production in nine patients with common variable immunodeficiency (CVI), eight patients with X-linked agammaglobulinemia (XLA), and in 17 normal subjects. Further laboratory diagnosis included the determination of the Bruton's tyrosine kinase (Btk) protein expression in monocytes using flow cytometry. The analysis of monocyte phagocytic function demonstrated that CR3-, CR1-, and Fc-mediated phagocytosis (p = 0.0001) were significantly decreased in CVI and XLA patients, and chemotaxis of monocytes (p = 0.0082) was reduced in XLA patients. Superoxide anion production, however, did not differ between the CVI, XLA, and the control groups. The cytoplasmic expression of Btk protein in monocytes was normal in CVI patients and decreased or not detected in XLA patients. It is proposed that impaired chemotaxis and phagocytosis by monocytes may be a characteristic of the innate immune system in CVI and XLA patients, providing a new direction for the physiopathology of these immunodeficiencies.
Asunto(s)
Agammaglobulinemia/inmunología , Quimiotaxis/inmunología , Inmunodeficiencia Variable Común/inmunología , Antígeno de Macrófago-1/inmunología , Fagocitosis/inmunología , Receptores de Complemento 3b/inmunología , Adolescente , Adulto , Agammaglobulinemia/diagnóstico , Agammaglobulinemia/genética , Células Cultivadas , Quimiotaxis/fisiología , Niño , Preescolar , Inmunodeficiencia Variable Común/diagnóstico , Femenino , Humanos , Antígeno de Macrófago-1/análisis , Masculino , Monocitos/inmunología , Monocitos/fisiología , Fagocitosis/fisiología , Probabilidad , Proteínas Tirosina Quinasas/análisis , Proteínas Tirosina Quinasas/inmunología , Receptores de Complemento 3b/análisis , Muestreo , Sensibilidad y Especificidad , Estadísticas no ParamétricasRESUMEN
A systematic study was carried out to investigate the role of antibody functional affinity in the capacity of immune complexes (IC) to activate the complement system and to trigger subsequently the molecular events involved in the handling of IC by providing a clearance mechanism. For this purpose, two populations of polyclonal anti-BSA IgG antibodies of different affinities were prepared, with values of 1.89x10(8) M(-1) and 4.94x10(8) M(-1). First we studied the capacity of IC formed at equivalence with both antibodies to activate the classical and the alternative pathways of human complement and the ability of the complexes to bind to erythrocyte C3b-C4b receptors (CR1; CD35). The data showed that the highest affinity antibodies were more efficient in activating complement by both pathways. However, their binding to erythrocyte CR1 was significantly lower compared to the binding of the lowest affinity IgG. Second we compared these IC in terms of their ability to stimulate the respiratory burst of neutrophils (PMN) and to induce the release of PMN lysosomal enzymes. In general, both of these PMN functions were better stimulated by the IC prepared with the IgG antibodies having a highest affinity, although the effects were variable for different IC concentrations. The suggestion to be drawn from the data is that the antibody affinity has an influence on the formation of the immune complex lattice, modulating its three-dimensional structure and the arrangement of the antibody Fc fragments, interfering with complement activation and access to the neutrophil IgG receptors. The significance of these observations for the understanding of how affinity influences the precise biological mechanism that participates in the fate of IC is discussed.
Asunto(s)
Afinidad de Anticuerpos/inmunología , Complejo Antígeno-Anticuerpo/inmunología , Inmunoglobulina G/inmunología , Receptores de Complemento 3b/inmunología , Albúmina Sérica Bovina/inmunología , Animales , Humanos , ConejosRESUMEN
El preligamiento del receptor de C3b (CR1) con su ligando potencia la fagocitosis mediada por el receptor para Fc (FcR) en monocitos cultivados, pero no en monocitos frescos. Nuestros estudios se dirigieron a establecer si la cooperación CR1-FcR ocurre en neutrófilos en reposo o activados. Activando neutrófilos con dosis de 1 a 5 ng/ml de PDBu observamos estimulación de la fagocitosis via Fc, mientras que a concentraciones mayores hubo una inhibición de la misma. La adherencia de las células sobre C3 inactivado (iC3) en forma simultánea al tratamiento con dosis estimulatorias o subinhibitorias de PDBu no incrementó la ingestión de eritrocitos de carnero sensibilizados con IgG (E-IgG); aun variando la cantidad de anticuerpo sensibilizante o estimulando a las células con PDBu durante distintos tiempos. La estimulación de los neutrófilos con diferentes concentraciones de fMLP en forma simultánea a la adherencia sobre iC3 tampoco incrementó la fagocitosis de los blancos mediada por el FcR. La comunicación entre el CR1 y el FcR difere en neutrófilos y monocitos, hecho que podría relacionarse con el mecanismo de activación del CR1 y la clase de FcR encontrado en cada tipo de celular (AU)
Asunto(s)
Animales , Receptores Inmunológicos/inmunología , Fagocitosis/inmunología , Fagocitosis/efectos de los fármacos , Receptores de Complemento 3b/inmunología , Receptores Fc/inmunología , Forbol 12,13-Dibutirato/farmacología , N-Formilmetionina Leucil-Fenilalanina/farmacología , Monocitos/efectos de los fármacos , Monocitos/inmunología , Neutrófilos/efectos de los fármacos , Neutrófilos/inmunologíaRESUMEN
El preligamiento del receptor de C3b (CR1) con su ligando potencia la fagocitosis mediada por el receptor para Fc (FcR) en monocitos cultivados, pero no en monocitos frescos. Nuestros estudios se dirigieron a establecer si la cooperación CR1-FcR ocurre en neutrófilos en reposo o activados. Activando neutrófilos con dosis de 1 a 5 ng/ml de PDBu observamos estimulación de la fagocitosis via Fc, mientras que a concentraciones mayores hubo una inhibición de la misma. La adherencia de las células sobre C3 inactivado (iC3) en forma simultánea al tratamiento con dosis estimulatorias o subinhibitorias de PDBu no incrementó la ingestión de eritrocitos de carnero sensibilizados con IgG (E-IgG); aun variando la cantidad de anticuerpo sensibilizante o estimulando a las células con PDBu durante distintos tiempos. La estimulación de los neutrófilos con diferentes concentraciones de fMLP en forma simultánea a la adherencia sobre iC3 tampoco incrementó la fagocitosis de los blancos mediada por el FcR. La comunicación entre el CR1 y el FcR difere en neutrófilos y monocitos, hecho que podría relacionarse con el mecanismo de activación del CR1 y la clase de FcR encontrado en cada tipo de celular
Asunto(s)
Animales , Fagocitosis/inmunología , Receptores Inmunológicos/inmunología , Monocitos/efectos de los fármacos , Monocitos/inmunología , N-Formilmetionina Leucil-Fenilalanina/farmacología , Neutrófilos , Neutrófilos/inmunología , Fagocitosis/efectos de los fármacos , Forbol 12,13-Dibutirato/farmacología , Receptores de Complemento 3b/inmunología , Receptores Fc/inmunologíaRESUMEN
Durante la broncoconstricción inducida por el ejercicio (AIE) en individuos asmáticos se producen cambios cuantitativos y cualitativos de los leucocitos en sangre periférica. Para estudiar la participación de células inmunes y accesorias de la reacción inflamatoria en el AIE, analizamos las modificaciones de las subpoblaciones de linfocitos T y de la expresión de los antígenos de histocompatibilidad clase II (la) en monocitos, además de la participación de los receptores para el tercer factor del complemento (C36) mediante su expresión en monocitos y su adhesión y consecuente activación en neutrófilos. Se estudió 20 pacientes asmáticos alérgicos, de los cuales 11 presentaron broncoconstricción después de una prueba de ejercicio estandarizada. En todos los individuos estudiados se produjo, 5 min después del ejercicio, un aumento significativo de los leucocitos sanguíneos totales y de los neutrófilos, linfocitos y monocitos. Los basófilos y eosinófilos aumentaron sólo en los AIE (+). También este grupo presentó eosinófilos más altos desde el nivel inicial. En los individuos con AIE (+) el aumento inicial de los linfocitos a los 5 min se produce a expensas de los linfocitos T supresores (CD8) los que luego comienzan a disminuir hasta alcanzar valores significativamente menores que el inicial a los 60 min después del ejercicio. Esto lleva a un aumemto de la relación CD4/CD8 a nivel periférico, que es simultáneo con el aumento en la expresión de los antígenos Ia en monocitos observados en los AIE (+). Además en estos pacientes se encontró un aumento en la expresión de los receptores C3b en monocitos y en la producción de radical superóxido por neutrófilos estimulados con zimusán y complemento, desde el momento que se inicia la broncoconstricción hasta los 60 min después del ejercicio. Estos hallazgos sugieren que en los asmáticos con AIE (+) se producen cambios en las células inmunocompetentes que pudieran estar relacionados con la participación de células inflamatorias y su eventual manifestación como hiperactividad bronquial