RESUMEN

Antibody class-switch DNA recombination (CSR) is initiated by AID-introduced DSBs in the switch (S) regions targeted for recombination, as effected by Ku70/Ku86-mediated NHEJ. Ku-deficient B cells, however, undergo (reduced) CSR through an alternative(A)-NHEJ pathway, which introduces microhomologies in S-S junctions. As microhomology-mediated end-joining requires annealing of single-strand DNA ends, we addressed the contribution of single-strand annealing factors HR Rad52 and translesion DNA polymerase θ to CSR. Compared with their Rad52+/+ counterparts, which display normal CSR, Rad52-/- B cells show increased CSR, fewer intra-Sµ region recombinations, no/minimal microhomologies in S-S junctions, decreased c-Myc/IgH translocations and increased Ku70/Ku86 recruitment to S-region DSB ends. Rad52 competes with Ku70/Ku86 for binding to S-region DSB ends. It also facilitates a Ku-independent DSB repair, which favours intra-S region recombination and mediates, particularly in Ku absence, inter-S-S recombination, as emphasized by the significantly greater CSR reduction in Rad52-/- versus Rad52+/+ B cells on Ku86 knockdown.

Asunto(s)

Reparación del ADN por Unión de Extremidades/inmunología , Cambio de Clase de Inmunoglobulina/genética , Proteína Recombinante y Reparadora de ADN Rad52/metabolismo , Reparación del ADN por Recombinación/inmunología , Animales , Linfocitos B/inmunología , Linfocitos B/metabolismo , Citidina Desaminasa/genética , Citidina Desaminasa/inmunología , Citidina Desaminasa/metabolismo , Roturas del ADN de Doble Cadena , Reparación del ADN por Unión de Extremidades/genética , ADN Polimerasa Dirigida por ADN/genética , ADN Polimerasa Dirigida por ADN/inmunología , ADN Polimerasa Dirigida por ADN/metabolismo , Femenino , Técnicas de Silenciamiento del Gen , Humanos , Cambio de Clase de Inmunoglobulina/inmunología , Región de Cambio de la Inmunoglobulina/genética , Autoantígeno Ku/genética , Autoantígeno Ku/inmunología , Autoantígeno Ku/metabolismo , Masculino , Ratones , Ratones Endogámicos C57BL , Ratones Noqueados , ARN Interferente Pequeño/metabolismo , Proteína Recombinante y Reparadora de ADN Rad52/genética , Proteína Recombinante y Reparadora de ADN Rad52/inmunología , Sulfonamidas , ADN Polimerasa theta

Asunto(s)

Reparación del ADN , Mononucleosis Infecciosa/genética , Proteína Recombinante y Reparadora de ADN Rad52/genética , Inmunodeficiencia Combinada Grave/genética , Adolescente , Ciclo Celular/efectos de los fármacos , Roturas del ADN de Doble Cadena , Fibroblastos/efectos de los fármacos , Fibroblastos/inmunología , Fibroblastos/patología , Herpesvirus Humano 4/patogenicidad , Herpesvirus Humano 4/fisiología , Humanos , Mononucleosis Infecciosa/inmunología , Mononucleosis Infecciosa/patología , Masculino , Mitomicina/farmacología , Modelos Moleculares , Conformación Proteica en Hélice alfa , Conformación Proteica en Lámina beta , Proteína Recombinante y Reparadora de ADN Rad52/química , Proteína Recombinante y Reparadora de ADN Rad52/inmunología , Inmunodeficiencia Combinada Grave/inmunología , Inmunodeficiencia Combinada Grave/patología